REF and SRPP Interact Differently w

REF and SRPP Interact Differently with Membrane

As REF and SRPP proteins have been previously visualized by immunogold labeling TEM, bound to the surface of Large Rubber Particles (LRP) and Small Rubber Particles (SRP) [15], [17], we investigated their interactions with model lipid membranes. The rubber particles are surrounded by a biomembrane organized as a monolayer and constituted of proteins, phospholipids (mainly phosphatidyl choline and ethanolamine), glycolipids and β-sitosterol [19], [42], [43]. First we studied the direct interaction with bulk lipids blotted on PVDF membranes, to compare the difference of interactions with various kinds of lipids. We chose to use asolectin, DMPC, and cholesterol. Asolectin is a complex mixture of lipids derived from soybean membranes, which is composed of many lipids found in latex, and PC is also highly present in rubber particle membrane [44]. From lipid dot blots presented in Figure 6A we can clearly visualized that both REF and SRPP strongly interacted with asolectin and cholesterol, but weakly with DMPC. In the experiment, the lipids in bulk were presented on the blot in a non-oriented fashion. Both polar heads and lipid tails could be recognized by the proteins.

To go deeper in our characterization of the interaction with membranes, we used then lipid monolayers as model. The zwitterionic DMPC or asolectin monomembranes are realized at the air-water interface and the protein is injected in the aqueous subphase (Figure 6B). The interaction is visualized by surface pressure (Table 2 and Table 3) and ellipsometry. Our first astonishing observation was that both proteins were extremely reactive alone at the air-water interface. Compared to a previous Langmuir study we performed on HET-s(218–289) amyloids [45], REF and SRPP were forming very rapidly (less than 30 min) a thick homogeneous protein film at the air/water interface (REF ∼136 Å and SRPP ∼36 Å). The surface pressures for both proteins alone at the interface was also quite strong (REF ∼24 mN/m and SRPP ∼28 mN/m). Apparently, this effect was stronger for REF, but is consistent with the fact that they are both highly hydrophobic and confirmed the high binding to Bis-ANS and hydropathicity (Figure 3D; Supplementary Table 1, Supplementary Fig. 2). When we added the proteins under the DMPC and asolectin monolayers the effect was different. For REF in both cases, the protein came rapidly to the contact of the lipid polar heads and clearly modified the lipid monolayer (Figure 6B). The interaction was stronger with DMPC (Table 3), but each lipid presented a relatively high increase of the interface thickness (∼66 Å and ∼63 Å) and morphology, which is the observation of a massive insertion into the monolayer as revealed by the increase of the surface pressure. In the case of SRPP, the proteins come rapidly to the contact of the lipid polar heads, slightly thickening the interface film (∼26 Å) below the lipids but not modifying the lipid film morphology. It was previously observed that SRPP could be released (and REF to a lower extend) from RP into the cytosol upon osmotic lysis [33]. This confirms also a weaker interaction of SRPP compared to REF towards membranes.

In conclusion, both proteins are very surface active, but display different behaviors towards membrane monolayers. In Figure 7, we proposed and schematized a model of the interactions of SRPP as bound to the surface of SRP and REF as deeply inserted into LRP. Two models of interaction which could lead to different functions

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

REF and SRPP Interact Differently with MembraneAs REF and SRPP proteins have been previously visualized by immunogold labeling TEM, bound to the surface of Large Rubber Particles (LRP) and Small Rubber Particles (SRP) [15], [17], we investigated their interactions with model lipid membranes. The rubber particles are surrounded by a biomembrane organized as a monolayer and constituted of proteins, phospholipids (mainly phosphatidyl choline and ethanolamine), glycolipids and β-sitosterol [19], [42], [43]. First we studied the direct interaction with bulk lipids blotted on PVDF membranes, to compare the difference of interactions with various kinds of lipids. We chose to use asolectin, DMPC, and cholesterol. Asolectin is a complex mixture of lipids derived from soybean membranes, which is composed of many lipids found in latex, and PC is also highly present in rubber particle membrane [44]. From lipid dot blots presented in Figure 6A we can clearly visualized that both REF and SRPP strongly interacted with asolectin and cholesterol, but weakly with DMPC. In the experiment, the lipids in bulk were presented on the blot in a non-oriented fashion. Both polar heads and lipid tails could be recognized by the proteins.การเข้าไปลึกขึ้นเราจำแนกลักษณะของการโต้ตอบกับเยื่อ เราใช้แล้วไขมัน monolayers เป็นรูป Monomembranes DMPC หรือ asolectin zwitterionic จะตระหนักในอินเตอร์เฟซของน้ำอากาศ และมีฉีดโปรตีนในสารละลาย subphase (รูปที่ 6B) การโต้ตอบคือมองเห็นความกดดันที่พื้นผิว (ตารางที่ 2 และตารางที่ 3) และ ellipsometry สังเกตน่าอัศจรรย์ครั้งแรกของเราคือ โปรตีนทั้งสองมีปฏิกิริยามากคนเดียวที่เชื่อมน้ำอากาศ เมื่อเทียบกับการศึกษาก่อนหน้านี้ของ Langmuir เราดำเนินการใน HET-s(218–289) มีการสะสม [45], อ้างอิงและ SRPP ขึ้นรูปอย่างรวดเร็ว (น้อยกว่า 30 นาที) ฟิล์มหนาเหมือนโปรตีนที่เชื่อมอากาศน้ำ (REF ∼136 Å และ SRPP ∼36 Å) ดันพื้นผิวสำหรับทั้งโปรตีนเพียงอย่างเดียวในอินเตอร์เฟซก็แข็งแรง (REF ∼24 mN/m และ SRPP ∼28 mN/m) เห็นได้ชัด ผลกระทบนี้แข็งแกร่งสำหรับการอ้างอิง แต่ไม่สอดคล้องกับความจริงที่ว่า พวกเขามีทั้งแบบสูง และยืนยันการรวมสูง Bis ANS และ hydropathicity (รูป 3D เสริมตาราง 1, 2 รูปเสริม) เมื่อเราเพิ่มโปรตีนภายใต้ monolayers DMPC และ asolectin ผลไม่แตกต่างกัน สำหรับอ้างอิงในทั้งสองกรณี โปรตีนมาติดต่อหัวขั้วไขมันอย่างรวดเร็ว และชัดเจนแก้ไข monolayer ไขมัน (รูปที่ 6B) การโต้ตอบก็แข็งแรง ด้วย DMPC (ตาราง 3), แต่ไขมันแต่ละแสดงเพิ่มขึ้นค่อนข้างสูงความหนาติดต่อ (∼66 Å และ ∼63 Å) และสัณฐาน วิทยา ซึ่งเป็นการสังเกตการแทรกขนาดใหญ่เป็น monolayer การที่เปิดเผย โดยการเพิ่มขึ้นของความดันที่พื้นผิว ในกรณีของ SRPP โปรตีนมาอย่างรวดเร็วการติดต่อของไขมันขั้วหัว ผมฟิล์มอินเตอร์เฟซ (∼26 Å) ด้านล่างไขมันเล็กน้อย แต่ไม่ปรับเปลี่ยนสัณฐานฟิล์มไขมัน ก่อนหน้านี้พบว่า อาจต้องปล่อย SRPP (และอ้างอิงการขยายต่ำ) จาก RP ในไซโตซอลเมื่อ lysis น้ำ [33] นอกจากนี้นี้ยังยืนยันโต้อ่อนของ SRPP ไปอ้างอิงต่อเยื่อหุ้มในการสรุป โปรตีนทั้งสองมีมากผิวที่ใช้งานอยู่ แต่แสดงพฤติกรรมต่าง ๆ ต่อ monolayers เมมเบรน ในรูป 7 ที่เราเสนอ และ schematized รูปแบบของการโต้ตอบของ SRPP เป็นถูกผูกไว้กับพื้นผิวของ SRP และอ้างอิงเป็นแทรกลึกลงใน LRP สองรุ่นของการโต้ตอบซึ่งอาจทำให้ฟังก์ชั่นต่าง ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

REF และ SRPP กระทบแตกต่างกันด้วยเมมเบรนในฐานะที่เป็นกรรมการและ SRPP โปรตีนได้รับการมองเห็นก่อนหน้านี้โดย TEM ติดฉลาก immunogold ถูกผูกไว้กับพื้นผิวของอนุภาคยางขนาดใหญ่ (LRP) และขนาดเล็กยางอนุภาค (SRP) ส่วน [15], [17], เราตรวจสอบของพวกเขา การสื่อสารกับเยื่อไขมันรุ่น อนุภาคยางถูกล้อมรอบด้วย biomembrane จัดเป็น monolayer และประกอบด้วยโปรตีน phospholipids (ส่วนใหญ่โคลีนและ Phosphatidyl ethanolamine) glycolipids และβ-sitosterol [19] [42], [43] ครั้งแรกที่เราได้ศึกษาปฏิสัมพันธ์โดยตรงกับไขมันกลุ่มเปื้อนเยื่อ PVDF เพื่อเปรียบเทียบความแตกต่างของการมีปฏิสัมพันธ์กับชนิดของไขมัน เราเลือกที่จะใช้ asolectin, DMPC และคอเลสเตอรอล Asolectin เป็นส่วนผสมที่ซับซ้อนของไขมันที่ได้มาจากเยื่อถั่วเหลืองซึ่งประกอบด้วยกรดไขมันที่พบในน้ำและ PC ยังมีอยู่สูงในเมมเบรนของอนุภาคยาง [44] จากจุด blots ไขมันที่นำเสนอในรูปที่ 6A เราสามารถมองเห็นได้อย่างชัดเจนว่าทั้ง REF และ SRPP ขอปฎิสัมพันธ์กับ asolectin และคอเลสเตอรอล แต่ไม่ค่อยมี DMPC ในการทดสอบไขมันในจำนวนมากที่ถูกนำเสนอบนรอยเปื้อนในแฟชั่นที่ไม่ได้มุ่งเน้น ทั้งหัวและหางขั้วโลกไขมันอาจจะได้รับการยอมรับโดยโปรตีน. ไปลึกในลักษณะของการมีปฏิสัมพันธ์กับเยื่อของเราเราใช้แล้ว monolayers ไขมันเป็นแบบจำลอง zwitterionic DMPC หรือ asolectin monomembranes จะตระหนักที่ติดต่อทางอากาศน้ำและโปรตีนถูกฉีดใน subphase น้ำ (รูปที่ 6B) การทำงานร่วมกันคือมองเห็นโดยความดันพื้นผิว (ตารางที่ 2 และตารางที่ 3) และ ellipsometry สังเกตที่น่าอัศจรรย์ครั้งแรกของเราคือการที่ทั้งโปรตีนมีปฏิกิริยามากอยู่คนเดียวที่อินเตอร์เฟซที่อากาศน้ำ เมื่อเทียบกับการศึกษา Langmuir ก่อนหน้านี้เราดำเนินการใน HET-S (218-289) amyloids [45] REF และ SRPP ถูกก่อตัวขึ้นอย่างรวดเร็วมาก (น้อยกว่า 30 นาที) ภาพยนตร์โปรตีนหนาเหมือนกันที่ติดต่อทางอากาศ / น้ำ (REF ~136 และ SRPP ~36 A) แรงกดดันพื้นผิวสำหรับทั้งโปรตีนอยู่คนเดียวที่อินเตอร์เฟซก็ยังแข็งแกร่งมาก (REF ~24 mN / m และ SRPP ~28 mN / m) เห็นได้ชัดว่าผลกระทบนี้เป็นที่แข็งแกร่งสำหรับ REF แต่มีความสอดคล้องกับความจริงที่ว่าพวกเขาทั้งสองไม่ชอบน้ำมากและได้รับการยืนยันสูงที่มีผลผูกพันกับ BIS-ANS และ hydropathicity (รูป 3 มิติ. เสริมตารางที่ 1 เสริมรูปที่ 2) เมื่อเราเพิ่มโปรตีนภายใต้ DMPC และ asolectin monolayers ผลกระทบที่แตกต่างกัน สำหรับ REF ในทั้งสองกรณีโปรตีนมาอย่างรวดเร็วไปที่รายชื่อของหัวขั้วโลกไขมันและการแก้ไข monolayer ไขมันได้อย่างชัดเจน (รูปที่ 6B) การทำงานร่วมกันได้ดีกับ DMPC (ตารางที่ 3) แต่แต่ละไขมันนำเสนอเพิ่มขึ้นค่อนข้างสูงของความหนาของอินเตอร์เฟซ (~66 และ ~63) และสัณฐานวิทยาซึ่งเป็นข้อสังเกตของการแทรกขนาดใหญ่เข้าไปใน monolayer ได้เป็นอย่างเปิดเผยโดย การเพิ่มขึ้นของความดันพื้นผิว ในกรณีของ SRPP โปรตีนมาอย่างรวดเร็วไปที่รายชื่อของหัวขั้วโลกไขมันเล็กน้อยหนาฟิล์มอินเตอร์เฟซ (~26 A) ด้านล่างไขมัน แต่ไม่ปรับเปลี่ยนสัณฐานฟิล์มไขมัน มันถูกตั้งข้อสังเกตก่อนหน้านี้ว่า SRPP อาจได้รับการปล่อยตัว (และ REF ไปขยายต่ำกว่า) จาก RP เข้าไปในเซลล์สลายเมื่อออสโมซิม [33] นี้เป็นการยืนยันว่ายังมีปฏิสัมพันธ์ที่อ่อนแอของ SRPP เมื่อเทียบกับ REF ต่อเยื่อ. สรุปทั้งโปรตีนมากใช้งานพื้นผิว แต่แสดงพฤติกรรมที่แตกต่างกันต่อ monolayers เมมเบรน ในรูปที่ 7 เราเสนอและ schematized รูปแบบของการมีปฏิสัมพันธ์ของ SRPP เป็นที่ถูกผูกไว้กับพื้นผิวของ SRP และอ้างอิงตามที่แทรกลึกลงไปใน LRP รุ่นที่สองของการทำงานร่วมกันซึ่งอาจนำไปสู่การทำงานที่แตกต่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Ref และ srpp โต้ตอบที่แตกต่างกันกับเมมเบรนเป็นโปรตีนที่ได้จาก Ref และ srpp มองเห็นโดย TEM ฉลาก immunogold ผูกกับพื้นผิวของอนุภาคยางขนาดใหญ่ ( LRP ) และอนุภาคยางขนาดเล็ก ( SRP ) [ 15 ] , [ 17 ] เราได้ปฏิสัมพันธ์กับเยื่อไขมัน รุ่น อนุภาคยางที่ถูกล้อมรอบด้วย biomembrane จัดเป็นอย่างและ constituted ของโปรตีน ฟอสโฟลิพิด ( ส่วนใหญ่เป็น phosphatidyl choline และคัดเลือก ) , ไกลโคลิพิด และบีตา - sitosterol [ 19 ] , [ 42 ] , [ 43 ] ครั้งแรกที่เราศึกษาปฏิสัมพันธ์โดยตรงกับกลุ่มไขมันเปื้อนบนแผ่นฟิล์ม PVDF ขนาด เพื่อเปรียบเทียบความแตกต่างของการโต้ตอบกับชนิดต่าง ๆ ของลิปิด เราเลือกที่จะใช้ asolectin dmpc , และคอเลสเตอรอล asolectin เป็นส่วนผสมที่ซับซ้อนของไขมันที่ได้จากถั่วเหลือง membranes ซึ่งประกอบด้วยไขมันมากพบในน้ำยางและ PC ยังสูงอยู่ในเยื่ออนุภาคยาง [ 44 ] จากจุดที่นำเสนอในรูปของ blots 6A เราอย่างชัดเจนสามารถมองเห็นทั้ง Ref และ srpp ขอติดต่อกับ asolectin และคอเลสเตอรอล แต่ป้อแป้ กับ dmpc . ในการทดลองของลิปิดเป็นกลุ่มที่ถูกนำเสนอบนเปรอะเปื้อนในแฟชั่นแบบไม่ ทั้งหัวและหางเป็นขั้วโลกและได้รับการยอมรับโดยวิลเลียมไปลึกในคุณสมบัติของการมีปฏิสัมพันธ์กับเมมเบรน เราใช้แล้ว monolayers ลิพิดเป็นแบบ การ dmpc zwitterionic หรือ asolectin monomembranes จะตระหนักในอากาศและน้ำในอินเตอร์เฟซและโปรตีนจะถูกฉีดเข้าไป subphase น้ำ ( รูปบน ) ปฏิสัมพันธ์จะมองเห็นโดยพื้นผิวความดัน ( ตารางที่ 2 และตารางที่ 3 ) และลิปโซมิตรี . สังเกตที่น่าอัศจรรย์ของเราก่อนว่าโปรตีนทั้งสองมีมากเป็นคนเดียวในอากาศและน้ำในอินเตอร์เฟซ เมื่อเทียบกับก่อนหน้านี้ ขนาดเรียนเราแสดงบน het-s ( 218 ( 289 ) amyloids [ 45 ] , Ref และ srpp ได้เป็นอย่างรวดเร็วมาก ( น้อยกว่า 30 นาที ) เป็นโปรตีนที่เป็นฟิล์มหนา อากาศ / น้ำอินเตอร์เฟซ ( Ref ∼ 136 และกริพเพน srpp ∼ 36 • ) พื้นผิวความดันทั้งโปรตีนคนเดียวที่ติดต่อก็ค่อนข้างแรง ( Ref ∼ 24 MN / m และ srpp ∼ 28 MN / m ) เห็นได้ชัดว่าผลนี้แข็งแกร่งสำหรับอ้างอิง แต่สอดคล้องกับความจริงที่ว่าพวกเขามีทั้งสูง ) และยืนยันสูงผูก ans ทวิและ hydropathicity ( รูปสามมิติ เสริมตารางที่ 1 เสริม รูปที่ 2 ) เมื่อเราเพิ่มโปรตีนภายใต้ dmpc asolectin monolayers และผลกระทบที่แตกต่างกัน สำหรับอ้างอิงในทั้งสองกรณี , โปรตีนมาอย่างรวดเร็ว การติดต่อของไขมันขั้วหัวและชัดเจนแก้ไขไขมันอย่าง ( รูปบน ) ปฏิสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งกับ dmpc ( ตารางที่ 3 ) แต่แต่ละเสนอเพิ่มไขมันค่อนข้างสูงของอินเตอร์เฟซที่ความหนา ( ∼ 66 •∼ 63 และกริพเพน ) และรูปร่าง ซึ่งสังเกตจากการแทรกใหญ่เข้าไปอย่างเป็นเปิดเผยโดยการเพิ่มขึ้นของพื้นผิวความดัน ในกรณีของ srpp , โปรตีนมาอย่างรวดเร็ว การติดต่อของไขมันที่ขั้วหัวเล็กน้อยจากอินเตอร์เฟซภาพยนตร์ ( 26 ∼Å ) ด้านล่างไขมันแต่ไม่แก้ไขภาพยนตร์ไขมันน้ำหนัก มันเคยสังเกตว่า srpp สามารถปล่อยออก ( และอ้างอิงเพื่อลดการขยาย ) จาก RP ในแต่ครั้งเมื่อการเสื่อม [ 33 ] ยืนยันยังลดลงเมื่อเทียบกับการ srpp อ้างอิงต่อเยื่อสรุป ทั้งโปรตีน มีพื้นผิวที่ใช้งานอยู่ แต่แสดงพฤติกรรมที่แตกต่างกันต่อเยื่อ monolayers . ในรูปที่ 7 เราเสนอ และ schematized รูปแบบปฏิสัมพันธ์ของ srpp เป็นผูกกับพื้นผิวของ SRP Ref เป็นอย่างมากและสอดแทรกเข้าไปใน LRP . สองรูปแบบของปฏิสัมพันธ์ซึ่งสามารถนำไปสู่การทำงานที่แตกต่างกัน