Materials and methodsCeOll lines an

Materials and methods
CeOll lines and culture conditions
DU-145 human androgen-independent prostatic cancer cells were kindly
provided by Dr John S.Lazo, Department of Pharmacology, Pittsburg
University Medical School, PA. They were maintained in RPMI 1640
medium supplemented with 10% fetal calf serum (FCS), glutamine and
antibiotics. Cells were routinely seeded on day 0 at 5 x 105 cells per
75 cm3 flask and treated with VP-16 at 25 ItM on day 5. The resulting
detached cells were collected every 2 h over the subsequent 2 days. MCF-7
human mammary carcinoma cells were kindly provided by Dr W.Bursch
(Institute of Tumor Biology, Vienna) and were maintained in DMEM
medium supplemented with 10% FCS, glutamine and antibiotics. Cultures
were routinely divided at a ratio of 1: 10 or 1:20 and fed until confluence.
Serum was then reduced to 0.25%. Cells started to detach 24-36 h after
the reduction of serum and were collected at the intervals indicated.
HIlras-R3 (RE423) cells were revertants of HPV1 1 and ras-transformed
rat fibroblasts, kindly provided by Dr C.Cerni (Institute of Tumor Biology,
Vienna), and were maintained in DMEM medium supplemented with 10%
FCS, glutamine and gentamycin. Monolayers were divided 1:5 and fed every
4 days. Two days after reaching confluence, the serum was reduced to 0.25%
whereupon the cells underwent rapid detachment (within 3-4 h). The kinetics
of detachment and the morphology of detached cells were assessed. At each
time point, both the detached and attached cells were combined and 105
cells were reserved for FIGE such that the proportion of detached cells in
the combined sample increased with time. This cellular system will be
described in detail elsewhere. A clone of the MvlLu mink lung epithelial
cell line (designated CC164, American Type Culture Collection), which
is sensitive to TGF-,B1, was kindly provided by Dr M.Vetterlein (Institute
of Histology-Embryology, University of Innsbruck, Austria). Cells were
cultured in DMEM supplemented with 10% FCS, glutamine and antibiotics.
Confluent cultures were divided 1:20 and grown until they reached 50-70%
confluence prior to reduction of FCS to 0.25%. After 36 h, cells were
stimulated to die by the addition of 10% FCS and 10 ng/ml of recombinant
TGF-(31, kindly provided by Dr Clare Heyworth (Paterson Institute,
Manchester). Asynchronous cell death began 24-72 h later and the detached
cells were collected from 24 h onwards, at the intervals indicated. HT-29-I1
human colon adenocarcinoma cells were provided by Dr E.A.Friedman
(Memorial Sloane-Kettering Center, New York) and grown in DMEM
medium supplemented with 10% FCS, glutamine and antibiotics. Cells were
divided at a ratio of 1: 10 and fed every 3-4 days until confluence, when
they began to detach from the monolayer. These were collected at the times
shown. All cell lines were maintained in an atmosphere of 5% C02/95 %
air at 370C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการเส้น CeOll และสภาพวัฒนธรรมดู 145 มนุษย์ androgen อิสระของต่อมลูกหมากมะเร็งได้กรุณาโดยดร.จอห์น S.Lazo ภาควิชาเภสัชวิทยา Pittsburgโรงเรียนแพทย์มหาวิทยาลัย PA. พวกเขาถูกเก็บรักษาไว้ใน RPMI 1640สื่อเสริม ด้วยเซรั่มและทารกในครรภ์ลูก 10% (FCS), glutamine และยาปฏิชีวนะ เซลล์ถูก seeded วัน 0 ที่ 5 x 105 เซลล์ต่อเป็นประจำ75 cm3 หนาว และรับ VP-16 ที่ 25 ItM วัน 5 การส่งผลเซลล์เดี่ยวถูกเก็บรวบรวมทุก h 2 เหนือ 2 วันต่อมา MCF-7เซลล์มนุษย์ทางหน้าอก carcinoma ได้กรุณาโดยดร. W.Bursch(สถาบันชีววิทยาเนื้องอก เวียนนา) และถูกจัดเก็บอยู่ใน DMEMสื่อเสริม glutamine, FCS 10% และยาปฏิชีวนะ วัฒนธรรมเป็นประจำแบ่งในอัตราส่วน 1:10 หรือ 1:20 และเลี้ยงจนบรรจบกันเซรั่มแล้วลดลงเป็น 0.25% เซลล์เริ่มต้นถอด h 24-36 หลังการลดลงของซีรั่ม และถูกรวบรวมไว้ในช่วงเวลาที่ระบุHIlras-R3 (RE423) เซลล์มี revertants 1 HPV1 และ แปลงราหนู fibroblasts ละม่อมโดยดร. C.Cerni (สถาบันเนื้องอกวิชาชีววิทยาเวียนนา), และได้รักษาไว้ใน DMEM เสริม ด้วย 10%FCS, glutamine และ gentamycin Monolayers แบ่ง 1:5 และติดตามทุกวันที่ 4 วันที่สองหลังจากถึงบรรจบ เซรั่มถูกลดลง 0.25%whereupon เซลล์รับปลดอย่างรวดเร็ว (ภายใน 3-4 h) จลนพลศาสตร์การปลดและสัณฐานวิทยาของเซลล์เดี่ยวที่ประเมิน ในแต่ละเวลาจุด ทั้งเดี่ยว และแนบเซลล์ถูกรวมและ 105เซลล์ถูกสงวนไว้สำหรับ FIGE เช่นที่บ้านเดี่ยวสัดส่วนของเซลล์ในตัวอย่างรวมที่เพิ่มขึ้นกับเวลา ระบบเซลลูลาร์นี้จะอธิบายในรายละเอียดอื่น ๆ โคลนของลุง MvlLu mink ที่ epithelialรายการ (กำหนด CC164 คอลเลกชันชนิดวัฒนธรรมอเมริกัน), เซลล์ที่มีความไวต่อ TGF- B1 ถูกกรุณาโดยดร. M.Vetterlein (สถาบันของมิญชวิทยาคัพภวิทยา มหาวิทยาลัยอินส์บรุค ออสเตรีย) เซลล์ได้อ่างใน DMEM เสริมกับ FCS 10%, glutamine และยาปฏิชีวนะมี confluent วัฒนธรรมแบ่งออกเป็น 1:20 และเติบโตจนกว่าจะถึง 50-70%บรรจบก่อนลด FCS 0.25% หลังจาก 36 h เซลล์ได้ถูกกระตุ้นการตาย โดยการเพิ่ม 10% FCS 10 ng/ml ของวททชTGF- (31 ละม่อมโดย Dr แคลร์ Heyworth (ทเทอร์ สถาบันแมนเชสเตอร์) ตายของเซลล์แบบอะซิงโครนัสเริ่ม 24-72 h ในภายหลังและที่หลังเซลล์ถูกรวบรวมจาก 24 ชมเป็นต้นไป ช่วงเวลาที่ระบุ เอชที-29-I1เซลล์มะเร็งชนิดต่อมคู่มนุษย์ได้ โดยดร. E.A.Friedman(ศูนย์เมโมเรียลสโลนเดย์ตัน นิวยอร์ก) และเติบโตใน DMEMสื่อเสริม glutamine, FCS 10% และยาปฏิชีวนะ เซลล์ได้แบ่งในอัตราส่วน 1:10 และติดตามทุก 3-4 วันจนบรรจบ เมื่อพวกเขาเริ่มที่จะแยกออกจากแบบ monolayer เหล่านี้ถูกเก็บรวบรวมเวลาแสดง รายการเซลล์ทั้งหมดถูกจัดเก็บอยู่ในบรรยากาศ 5% C02/95%อากาศที่ 370 c

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการสาย CeOll และเงื่อนไขวัฒนธรรม DU-145 มนุษย์แอนโดรเจนที่เป็นอิสระต่อมลูกหมากโตเซลล์มะเร็งได้รับความกรุณาให้โดยดรจอห์นS.Lazo, ภาควิชาเภสัชวิทยาเบิร์กโรงเรียนแพทย์มหาวิทยาลัย, PA พวกเขาได้รับการดูแลใน RPMI 1640 กลางเสริมด้วยซีรั่ม 10% จากลูกวัว (FCS) glutamine และยาปฏิชีวนะ เซลล์ที่ถูกเมล็ดเป็นประจำในวันที่ 0 5 x 105 เซลล์ต่อขวด75 cm3 และรับการรักษาด้วย VP-16 ที่ 25 ITM ในวันที่ 5 ส่งผลให้เซลล์เดี่ยวที่ถูกเก็บรวบรวมทุก2 ชั่วโมงในช่วง 2 วันต่อมา MCF-7 มนุษย์เซลล์มะเร็งเต้านมได้ให้ความกรุณาโดยดร W.Bursch (สถาบันชีววิทยาเนื้องอกเวียนนา) และได้รับการเก็บรักษาไว้ใน DMEM กลางเสริมด้วย 10% FCS glutamine และยาปฏิชีวนะ วัฒนธรรมที่ถูกแบ่งออกเป็นประจำในอัตราส่วน 1: 10 หรือ 1:20 และเลี้ยงจนบรรจบ. เซรั่มลดลงแล้ว 0.25% เซลล์เริ่มที่จะถอด 24-36 ชั่วโมงหลังจากการลดลงของซีรั่มและถูกเก็บในช่วงเวลาที่ระบุ. HIlras-R3 (RE423) เซลล์ revertants ของ HPV1 ที่ 1 และ-ras เปลี่ยนเซลล์หนูให้ความกรุณาโดยดรC.Cerni (จากสถาบัน ชีววิทยาเนื้องอกเวียนนา) และได้รับการดูแลในระดับปานกลาง DMEM เสริมด้วย 10% FCS, glutamine และ Gentamycin monolayers ถูกแบ่งออก 1: 5 และเลี้ยงทุก4 วัน สองวันหลังจากที่ไปถึงจุดบรรจบ, เซรั่มลดลงเป็น 0.25% ดังนั้นเซลล์เหล่านั้นออกอย่างรวดเร็ว (ภายใน 3-4 ชั่วโมง) จลนศาสตร์ของการปลดและสัณฐานวิทยาของเซลล์เดี่ยวที่ถูกประเมิน ในแต่ละจุดเวลาทั้งเดี่ยวและเซลล์ที่แนบมารวมกันและ 105 เซลล์ถูกสงวนไว้สำหรับ FIGE ดังกล่าวว่าสัดส่วนของเซลล์เดี่ยวในตัวอย่างรวมเพิ่มขึ้นตามกาลเวลา ระบบโทรศัพท์มือถือจะได้รับการอธิบายในรายละเอียดอื่น ๆ โคลนของมิงค์ MvlLu ปอดเยื่อบุผิวเซลล์(CC164 กำหนดประเภทวัฒนธรรมอเมริกันเก็บ) ซึ่งมีความไวต่อTGF-, B1, ให้ความกรุณาโดยดร M.Vetterlein (สถาบันของจุล-คัพภมหาวิทยาลัยอินส์บรุ, ออสเตรีย) . เซลล์ที่ถูกเพาะเลี้ยงใน DMEM เสริมด้วย 10% FCS glutamine และยาปฏิชีวนะ. วัฒนธรรมไหลมารวมกันที่ถูกแบ่งออก 1:20 และเติบโตขึ้นจนพวกเขามาถึง 50-70% บรรจบกันก่อนที่จะมีการลดลงของ FCS 0.25% หลังจาก 36 ชั่วโมงเซลล์ถูกกระตุ้นที่จะตายโดยนอกเหนือจากFCS 10% และ 10 ng / ml ของไข้ทรพิษTGF- (31 ให้ความกรุณาโดยดร Heyworth แคลร์ (แพ็ตเตอร์สันสถาบันแมนเชสเตอร์). การตายของเซลล์ Asynchronous เริ่ม 24-72 ชั่วโมงต่อมา และเดี่ยวเซลล์ที่ถูกเก็บรวบรวมจาก24 ชั่วโมงเป็นต้นไปในช่วงเวลาที่ระบุ. HT-29 I1 เซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ของมนุษย์มีให้โดยดร EAFriedman (เมโมเรียลสโลน-Kettering ศูนย์นิวยอร์ก) และที่ปลูกใน DMEM กลางเสริมด้วย 10% FCS . glutamine และยาปฏิชีวนะเซลล์ที่ถูกแบ่งออกในอัตราส่วน1: 10 และเลี้ยงทุก 3-4 วันจนบรรจบกันเมื่อ. พวกเขาก็เริ่มที่จะแยกออกจาก monolayer เหล่านี้ถูกเก็บรวบรวมตลอดเวลา. แสดงให้เห็นว่าเซลล์ทั้งหมดถูกเก็บรักษาไว้ในชั้นบรรยากาศ 5% C02 / 95% อากาศ 370C

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ ceoll และวัฒนธรรมเงื่อนไข

เส้น du-145 มนุษย์ฮอร์โมนเพศชายอิสระต่อมลูกหมากเซลล์มะเร็งได้กรุณา
โดยดร. จอห์น เอส lazo ภาควิชาเภสัชวิทยา คณะแพทย์ มหาวิทยาลัย Pittsburgh
. พวกเขาถูกเก็บรักษาไว้ใน RPMI 1640
เติม 10% เซรั่มของลูกวัว ( FCS ) , กลูตามีนและ
ยาปฏิชีวนะ เซลล์ถูกตรวจเมล็ดในวันที่ 0 5 x 105 เซลล์ต่อ
75 cm3 ขวดและรักษาด้วย vp-16 25 ITM ในวันที่ 5 ส่งผลให้เซลล์ครั้งนี้
บ้านเดี่ยวทุก 2 ชั่วโมงกว่าต่อมาอีก 2 วัน mcf-7
มนุษย์เซลล์มะเร็งเต้านมได้กรุณาให้ โดย ดร w.bursch
( ชีววิทยาเนื้องอกสถาบัน Vienna ) และถูกเก็บรักษาไว้ใน dmem
เติม 10% FCS กลูตามีน และยาปฏิชีวนะ วัฒนธรรม
ถูกตรวจแบ่งในอัตราส่วน 1 : 1 : 10 หรือ20 และเลี้ยงจนบรรจบ .
เซรั่มก็ลดลง 0.25 % เซลล์เริ่มแยกตัว 24-36 ชั่วโมงหลังจาก
ลดเซรั่มและถูกเก็บรวบรวมเป็นระยะ พบ .
hilras-r3 ( re423 ) เซลล์มี revertants ของ hpv1 1 และราสเปลี่ยน
หนูไฟโบรบลาส กรุณาให้โดย ดร. ซี. cerni ( สถาบันเนื้องอกชีววิทยา
เวียนนา ) และถูกเก็บรักษาไว้ใน dmem เติม 10% FCS
,กลูตามีน และเจนตามัยซิน . monolayers แบ่งเป็น 1 : 5 และเลี้ยงทุก
4 วัน สองวันหลังจากที่ถึงบรรจบ เซรั่มลง 0.25 %
ดังนั้นเซลล์ถูกปลดอย่างรวดเร็ว ( ภายใน 3-4 ชั่วโมง ) จลนศาสตร์
ไม่สนใจและสัณฐานวิทยาของเซลล์เดี่ยวถูกประเมิน ในแต่ละจุดเวลา
ทั้งเดี่ยวและแนบเซลล์ถูกรวมและ 105
เซลล์จะถูกสงวนไว้สำหรับ fige เช่นสัดส่วนของเซลล์เดี่ยวใน
ตัวอย่างรวมเพิ่มขึ้นกับเวลา ระบบมือถือนี้จะ
อธิบายในรายละเอียดอื่น โคลนของปอดเยื่อบุผิวเซลล์เส้น mvllu Mink
( เขต cc164 อเมริกันประเภทวัฒนธรรมคอลเลกชัน ) ซึ่งมีความไวต่อ tgf
- , B1 , กรุณาให้ โดย ดร ม. vetterlein จุลกายวิภาคศาสตร์คัพภวิทยาของสถาบัน
,มหาวิทยาลัยอินส์บรุค ออสเตรีย ) ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ถูก
dmem เสริม 10% FCS กลูตามีน และยาปฏิชีวนะ
วัฒนธรรมกระจู๋กระจี๋แบ่ง 1 : 20 และเติบโต จน ถึง 50-70%
บรรจบก่อนลด FCS 0.25 % หลังจาก 36 ชั่วโมง เซลล์ที่ถูกกระตุ้นโดย
ตายเพิ่ม 10% FCS 10 ng / ml ของรีคอมบิแนนท์
tgf - ( 31 ,กรุณาให้โดย ดร. แคลร์เฮเวิร์ท ( แพ็ตเตอร์สันสถาบัน
แมนเชสเตอร์ ) การตายของเซลล์แบบเริ่ม 24-72 H ในภายหลังและบ้านเดี่ยว
เซลล์ที่เก็บจาก 24 ชั่วโมงเป็นต้นไป ณ ช่วงเวลาที่ระบุ ht-29-i1
มนุษย์ลำไส้ใหญ่ adenocarcinoma cells โดยดร e.a.friedman
( อนุสรณ์สโลน Kettering Center , New York ) และปลูกใน dmem
เติม 10% FCS กลูตามีน และยาปฏิชีวนะ