lipase on acrylic resin) were purch

lipase on acrylic resin) were purchased from Novozymes
(Denmark). Methanol (>99%), n-hexane (>99%) and n-hexadecane
(>99%) were purchased from Tedia (US). Plasmids pRSFDuet and
pETDuet, E. coli BL 21 (DE3), isopropylthiogalactoside, ampicillin,
kanamycin, and all restriction enzymes used were purchased from
EMD (US).
2.2. Constructions of E. coli strains co-expressing CALB and TLL and
E. coli strains expressing CALB or TLL
The optimized genes of CALB and TLL were digested with
BamHI-KpnI and BgIII-KpnI, respectively. They were inserted into
the corresponding restriction enzyme sites of plasmid pRSFDuet
to construct recombinant expression plasmid pRSFDuet-Calb and
pRSFDuet-Tll, respectively. For co-expressing CALB and TLL in
one plasmid, CALB gene was digested with BamHI-NotI and inserted
into the corresponding restriction enzyme sites of plasmid
pRSFDuet-Tll to give recombinant co-expression plasmid pRSFDuet-
Calb-Tll. The three plasmids were transformed into E. coli BL 21
(DE3), respectively, and the transformants were subsequently
selected on LB-agar plates supplemented with 50 mg/L of kanamycin.
These gave E. coli (Calb), E. coli (Tll), and E. coli (Calb/Tll),
respectively. For co-expressing CALB and TLL in two plasmids,
recombinant plasmids pETDuet-Calb and pRSFDuet-Tll were cotransformed
into E. coli BL 21 (DE3), and the transformants were
subsequently selected on LB-agar plates supplemented with
25 mg/L of kanamycin and 50 mg/L of ampicillin. This afforded
E. coli (Calb-Tll).
2.3. Preparation of recombinant E. coli cells as biocatalysts for

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เอนไซม์ไลเปสในอคิ) ซื้อจาก Novozymes(เดนมาร์ก) เมทานอล (> 99%), เอ็นเฮกเซน (> 99%) และ n hexadecane(> 99%) ซื้อจาก Tedia (สหรัฐอเมริกา) Plasmids pRSFDuet และpETDuet, E. coli BL 21 (DE3), isopropylthiogalactoside แอมพิซิลลินกานามัยซิน และเอนไซม์จำกัดทั้งหมดที่ใช้ซื้อจากEMD (เรา)2.2 การก่อสร้างของ E. coli สายพันธุ์ร่วมแสดง CALB และ TLL และE. coli สายพันธุ์แสดง CALB หรือ TLLยีนที่เพิ่มประสิทธิภาพของ CALB และ TLL ถูกต้องด้วยBamHI-KpnI และ BgIII-KpnI ตามลำดับ พวกเขาถูกแทรกลงในอเมริกาจำกัดเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องของ plasmid pRSFDuetสร้างนิพจน์ recombinant plasmid pRSFDuet-Calb และpRSFDuet-Tll ตามลำดับ สำหรับการร่วมแสดงใน TLL และ CALBต้อง มี BamHI NotI และแทรกหนึ่ง plasmid ยีน CALBเข้าไซต์จำกัดเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องของ plasmidpRSFDuet-Tll ให้นิพจน์ recombinant ร่วม plasmid pRSFDuet-Calb-Tll Plasmids สามถูกเปลี่ยนเป็น E. coli BL 21(DE3), ตาม ลำดับ และ transformants ได้มาเลือกบนแผ่น agar ปอนด์เสริม ด้วย 50 mg/L ของกานามัยซินเหล่านี้ให้ E. coli (Calb), E. coli (Tll), และ E. coli (Calb/Tll),ตามลำดับ สำหรับร่วมกำลัง CALB และ TLL ใน plasmids สองcotransformed recombinant plasmids pETDuet Calb และ pRSFDuet-Tllเข้าไปใน E. coli 21 BL (DE3), และ transformants มีต่อมาเลือกใน agar ปอนด์แผ่นเสริมด้วย25 mg/L ของกานามัยซินและ 50 mg/L ของแอมพิซิลลิน นี้นี่E. coli (Calb-Tll)2.3 การเตรียมเซลล์ recombinant E. coli เป็น biocatalysts สำหรับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เอนไซม์ไลเปสในคริลิคเรซิน) ที่ซื้อมาจาก Novozymes
(เดนมาร์ก) เมทานอล (> 99%), เฮกเซน (> 99%) และ n-hexadecane
(> 99%) ที่ซื้อมาจาก Tedia (US) พลาสมิด pRSFDuet และ
pETDuet, เชื้อ E. coli BL 21 (DE3) isopropylthiogalactoside, จิบูตี,
กานามัยซินและทุกข้อ จำกัด
ของเอนไซม์ที่ใช้ซื้อมาจากเมอร์(สหรัฐ).
2.2 การก่อสร้างของเชื้อ E. coli สายพันธุ์ร่วมแสดงความ CALB และ TLL
และอี สายพันธุ์ coli แสดง CALB TLL
หรือยีนที่ดีที่สุดของCALB และ TLL ถูกย่อยด้วย
BamHI-KpnI และ BgIII-KpnI ตามลำดับ พวกเขาถูกใส่เข้าไปในเว็บไซต์เอนไซม์ จำกัด ที่สอดคล้องกันของพลาสมิด pRSFDuet ที่จะสร้างพลาสมิดแสดงออก recombinant pRSFDuet-Calb และpRSFDuet-TLL ตามลำดับ เพื่อร่วมแสดงความ CALB และ TLL ในพลาสมิดหนึ่งยีนCALB ถูกย่อยด้วย BamHI-Noti และแทรกเข้าไปในเว็บไซต์เอนไซม์จำกัด ที่สอดคล้องกันของพลาสมิดpRSFDuet-TLL ที่จะให้พลาสมิด recombinant ร่วมแสดงออก pRSFDuet- Calb-TLL พลาสมิดทั้งสามถูกเปลี่ยนเป็นเชื้อ E. coli BL 21 (DE3) ตามลำดับและ transformants ถูกต่อมาเลือกบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อLB-เสริมด้วย 50 มก. / ลิตรกานามัยซิน. เหล่านี้ให้เชื้อ E. coli (Calb) เชื้อ E. coli ( tll) และเชื้อ E. coli (Calb / tll) ตามลำดับ เพื่อร่วมแสดงความ CALB และ TLL ในสองพลาสมิด, พลาสมิด recombinant pETDuet-Calb และ pRSFDuet-TLL ถูก cotransformed เข้าเชื้อ E. coli BL 21 (DE3) และ transformants เป็นกลุ่มที่เลือกต่อมาบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อLB-เสริมด้วย25 มก. / ลิตร กานามัยซินและ 50 มิลลิกรัม / ลิตรของจิบูตี เจ้าตัวนี้อี coli (Calb-TLL). 2.3 เตรียมความพร้อมของ recombinant อีโคไลเซลล์เป็นเอนไซม์สำหรับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไลเปสบนอะคริลิกเรซิน ) ซื้อมาจากกุ้ง
( เดนมาร์ก ) เมทานอล ( > 99% ) บีบ ( > 99% ) และ n-hexadecane
( > 99% ) ซื้อจาก tedia ( เรา ) พลาสมิดและ petduet prsfduet
, E . coli BL 21 ( DE3 ) isopropylthiogalactoside ampicillin
, , kanamycin และเอนไซม์ที่ใช้ซื้อมาจาก
EMD ( US ) .
2.2 . การก่อสร้างของ E . coli สายพันธุ์ร่วมแสดงและ calb TII และ
Eโคไลสายพันธุ์แสดง calb หรือจนกว่า
เพิ่มประสิทธิภาพยีนของ calb TII และถูกย่อยด้วย
kpni bgiii BamHI และ kpni ตามลำดับ พวกเขาถูกแทรกเข้าไปใน
ที่เว็บไซต์ของเอนไซม์พลาส prsfduet
สร้างรีคอมบิแนนท์พลาสมิดและการแสดงออก prsfduet calb
prsfduet tll ตามลำดับ แสดง calb CO และพลาสมิดใน tll
หนึ่ง ,calb ยีนที่ถูกตัดด้วย BamHI และเก็บไว้ตรงไหนก็ได้แทรก
เข้าไปที่ไซต์ของเอนไซม์ พลาสมิด
prsfduet tll ให้รีคอมบิแนนท์พลาสมิด prsfduet Co การแสดงออก --
calb tll . 3 ) ถูกเปลี่ยนเป็น E . coli BL 21
( DE3 ) ตามลำดับ และพลาสมิดได้ในภายหลัง
เลือกบนจานวุ้นปอนด์เติม 50 mg / l
เหล่านี้ให้ทั้งสอง เชื้ออีโคไล ( E . calb )( TII ) และเชื้อ E . coli ( calb / TII )
) CO และแสดง calb tll สองเพื่อ
รีคอมบิแนนท์พลาสมิดและ petduet calb prsfduet tll เป็น cotransformed
ใน E . coli BL 21 ( DE3 ) และพลาสมิดเป็น
ต่อมาเลือกบนจานวุ้นปอนด์เสริม
25 มก. / ล. kanamycin และ 50 มก. / ล. ยาเพนนิซิลลิน นี้เจ้าตัว
E . coli ( calb TII ) .
2.3 การเตรียม recombinant Eเซลล์เป็นจากัวร์สำหรับ