2.4. Enzyme activity and hydrolysis

2.4. Enzyme activity and hydrolysis

Two commercial enzymes and four enzymes, produced in-house from A. flavus, P. funiculosum, P. verruculosum, and T. longibrachiatum, were evaluated. The protein concentration was measured by the Lowry method using bovine serum albumin as standard [20]. Enzyme activities were assayed with specific substrate solution, 50 mM sodium citrate buffer pH 4.8 (at 37 °C for 30 min). Endoglucanase (CMCase) and exoglucanase (Avicelase) activities were determined with 1% carboxymethylcellulose and microcrystalline cellulose (Avicel) as substrate, respectively. Xylanase activity was determined by the same procedure described for endo- and exo-cellulase, but using beechwood xylan (Sigma) as substrate. Polygalacturonase acitivity was measured with a 0.5% polygalacturonic acid (Sigma) in 50 mM sodium citrate buffer (pH 4.8) at 37 °C for 5 min. Reducing sugars were quantified with DNS (dinitrosalicylic acid) and the absorbance was measured at 540 nm by modified Miller [21] using Thermo Scientific Multiskan EX (Thermo Fisher Scientific, Finland). One unit of activity was defined as the amount of enzyme required to release one μmol of glucose, xylose or galacturonic acid per min. Specific activities were expressed as enzyme units per milligram of protein.

Commercial and extracellular enzymes were added to okara at concentration of 40–140 ug protein/g okara. Enzymatic hydrolysis was performed on 1% (w/v) dry matter with 50 mM sodium acetate buffer (pH 4.8) at 180 rpm for 72 h at 37 °C. Optimization of enzyme loading volume and time course change okara during enzymatic hydrolysis were measured using colorimetric method (DNS) for determination of sugars. Based on a small scale study, the enzymatic hydrolysis process was scaled up to a 5 L bioreactor (1% dry matter).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. เอนไซม์และสลายเอนไซม์ทางการค้าที่สองและสี่เอนไซม์ ผลิตในองค์กร จาก A. flavus, P. funiculosum, P. verruculosum, T. longibrachiatum ถูกประเมิน มีวัดความเข้มข้นของโปรตีน โดยวิธีการของประเทศที่ใช้วัว serum albumin เป็นมาตรฐาน [20] กิจกรรมของเอนไซม์ได้ assayed ด้วยพื้นผิวเฉพาะ 50 มม.โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ pH 4.8 (ที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 นาที) Endoglucanase (CMCase) และ exoglucanase (Avicelase) กิจกรรมกำหนด 1% carboxymethylcellulose และจุลเซลลูโลส (Avicel) เป็นพื้นผิว ตามลำดับ กิจกรรมไซลาเนสที่ถูกกำหนด โดยขั้นตอนเดียวกันอธิบายสำหรับเอ็นโด - และ exo แชร์-cellulase แต่ใช้บีชวู้ด xylan (Sigma) เป็นพื้นผิว Polygalacturonase acitivity ถูกวัดเป็นกรด polygalacturonic 0.5% (Sigma) 50 มม.โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ (pH 4.8) ที่ 37 องศาเซลเซียส 5 นาทีลดน้ำตาลได้วัดกับ DNS (dinitrosalicylic กรด) และมีวัด absorbance ที่ที่ 540 nm โดยแก้ไขมิลเลอร์ [21] โดยใช้เทอร์โมวิทยาศาสตร์ Multiskan EX (เทอร์โม Fisher วิทยาศาสตร์ ฟินแลนด์) กำหนดกิจกรรมหนึ่งหน่วยเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นต้องปล่อยหนึ่งไมโครโมลของกลูโคส กรดสารหรือ galacturonic ต่อนาทีเฉพาะกิจกรรมที่แสดงเป็นเอนไซม์ยูนิตต่อมิลลิกรัมโปรตีนพาณิชย์ และสารเอนไซม์ถูกเพิ่มไปยัง okara ที่ความเข้มข้น 40 – 140 ยูจี โปรตีน/g okara เอนไซม์ย่อยดำเนินการในเรื่องแห้ง 1% (w/v) 50 มม.โซเดียมอะซิเตบัฟเฟอร์ (pH 4.8) ที่ 180 รอบต่อนาทีสำหรับ 72 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เพิ่มประสิทธิภาพของเอนไซม์โหลด okara เปลี่ยนหลักสูตรปริมาณและเวลาช่วงย่อยเอนไซม์ถูกวัดโดยใช้วิธีการสี (DNS) สำหรับการวัดปริมาณน้ำตาล จากการศึกษาขนาดเล็ก การย่อยเอนไซม์ถูกปรับค่าการถังปฏิกรณ์ชีวภาพ 5 ลิตร (1% เรื่องแห้ง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 กิจกรรมของเอนไซม์ย่อยสลายและสองเอนไซม์ในเชิงพาณิชย์และสี่เอนไซม์ที่ผลิตในบ้านจาก A. flavus, P. funiculosum, P. verruculosum และ T. longibrachiatum, ได้รับการประเมิน ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกวัดโดยวิธี Lowry ใช้ซีรั่มอัลบูมิวัวเป็นมาตรฐาน [20] เอนไซม์และนำไปวิเคราะห์กับการแก้ปัญหาสารตั้งต้นเฉพาะขนาด 50 มมโซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์ค่า pH 4.8 (ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที) Endoglucanase (CMCase) และ exoglucanase (Avicelase) กิจกรรมได้รับการพิจารณาด้วย carboxymethylcellulose 1% และ microcrystalline เซลลูโลส (Avicel) เป็นสารตั้งต้นตามลำดับ กิจกรรมไซลาเนสถูกกำหนดโดยขั้นตอนเดียวกันที่อธิบายไว้สำหรับ endo- และ EXO-เซลลูเลส แต่ใช้สายใจไซแลน (ซิกม่า) เป็นสารตั้งต้น acitivity polygalacturonase วัดกับ 0.5% กรด polygalacturonic (Sigma) ในขนาด 50 มมโซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์ (pH 4.8) ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที น้ำตาลรีดิวซ์ที่มีปริมาณ DNS (กรด dinitrosalicylic) และการดูดกลืนแสงที่ถูกวัดที่ 540 นาโนเมตรโดยดัดแปลงมิลเลอร์ [21] โดยใช้เทอร์โมวิทยาศาสตร์ Multiskan EX (Thermo Fisher Scientific, ฟินแลนด์) หนึ่งหน่วยของกิจกรรมที่ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการรุ่นหนึ่งไมโครโมลของน้ำตาลกลูโคส, ไซโลหรือกรดกาแลคต่อนาที กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงถูกแสดงเป็นหน่วยเอนไซม์ต่อมิลลิกรัมโปรตีน. พาณิชย์และเอนไซม์ที่ถูกเพิ่มเข้ากากถั่วเหลืองที่ระดับความเข้มข้น 40-140 ไมโครกรัมโปรตีน / g กากถั่วเหลือง เอนไซม์ที่ได้ดำเนินการเมื่อวันที่ 1% (w / v) แห้ง 50 มิลลิบัฟเฟอร์ acetate โซเดียม (pH 4.8) ที่ 180 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 72 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส การเพิ่มประสิทธิภาพของปริมาณเอนไซม์โหลดและเวลาการเปลี่ยนแปลงแน่นอนกากถั่วเหลืองในระหว่างการย่อยโปรตีนถูกวัดโดยใช้วิธีการสี (DNS) สำหรับการกำหนดของน้ำตาล อยู่บนพื้นฐานของการศึกษาขนาดเล็กกระบวนการย่อยโปรตีนเป็นสัดส่วนถึงเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพ 5 ลิตร (1% น้ำหนักแห้ง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . กิจกรรมของเอนไซม์ย่อยสองในเชิงพาณิชย์เอนไซม์และเอนไซม์ที่ผลิตในบ้านจาก 4 , A . flavus , หน้า funiculosum , หน้า verruculosum และ ต. longibrachiatum , ประเมิน ระดับโปรตีนจะถูกวัดโดยวิธีโลว์รีใช้อัลบูมินเป็นมาตรฐาน [ 20 ] กิจกรรมของเอนไซม์คือเอนไซม์ด้วยวิธีพื้นผิวเฉพาะ 50 มิลลิโมลาร์โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ pH 4.8 ( ที่อุณหภูมิ 37 องศา C นาน 30 นาที ) endoglucanase ( CMCase ) และ exoglucanase ( avicelase ) กิจกรรมวิเคราะห์ผู้ป่วยในด้วย 1% และเซลลูโลส Microcrystalline ( เซล ) เป็นสับสเตรท ตามลำดับ กิจกรรมของเอนไซม์ที่ถูกกำหนดโดยขั้นตอนเดียวกัน อธิบาย Endo - exo เซล แต่ใช้ Beechwood ไซ ( Sigma ) เป็นสับสเตรท เอนไซม์ polygalacturonase อากาศยาน วัดด้วย 0.5% กรด polygalacturonic ( Sigma ) 50 มิลลิโมลาร์โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ pH 4.8 ) ที่อุณหภูมิ 37 องศา C เป็นเวลา 5 นาทีลดน้ำตาลถูก quantified กับ DNS ( dinitrosalicylic acid ) และค่าวัด 540 nm โดยดัดแปลงมิลเลอร์ [ 21 ] โดยใช้เทอร์โมวิทยาศาสตร์ multiskan EX ( เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ฟินแลนด์ ) หน่วยหนึ่งของกิจกรรมที่ถูกกำหนดโดยปริมาณของเอนไซม์ ต้องปล่อยμโมลของกลูโคส เอนไซม์หรือกรดกาแลคต่อนาที กิจกรรมเฉพาะมีการแสดงออกเป็นเอนไซม์หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีนเชิงพาณิชย์ และยัดเยียด ) เพิ่มกากที่ความเข้มข้น 40 – 140 ไมโครกรัมโปรตีน / กรัมกาก . เอนไซม์คือใช้ 1% ( w / v ) แห้ง กับ 50 มม. โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 4.8 ) 180 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 72 ชั่วโมง ที่ 37 องศา การเพิ่มประสิทธิภาพของเอนไซม์ปริมาณกากโหลดและเปลี่ยนแน่นอนเวลาในเอนไซม์ถูกวัดโดยใช้พระชานุ ( DNS ) สำหรับการหาปริมาณน้ำตาล จากการศึกษาขนาดเล็ก กระบวนการไฮโดรไลซิสด้วยเอนไซม์ถูกลดขนาดได้ถึง 5 ลิตร ในถังปฏิกรณ์ ( 1 เปอร์เซ็นต์วัตถุแห้ง )