วัสดุและวิธีการ2.1 . สารเคมีและวัสด

วัสดุและวิธีการ

2.1 . สารเคมีและวัสดุ

เหง้าของขมิ้นชัน . . . ได้มาจาก Ooty , ทมิฬนาฑู , อินเดีย sabouraud dextrose agar ( SDA ) และน้ำซุป ( เอสดีบี ) ที่ได้รับจาก himedia ( มุมไบอินเดีย ) ซีราลีโนนและสารเคมีอื่น ๆซื้อมาจาก Sigma –ดิช ( บังกาลอร์ , อินเดีย )

2.2 . การสกัดน้ำมันหอมระเหยจากเหง้าของขมิ้นชัน .

เหง้าของขมิ้นชัน L C แห้งในร่ม อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 4 สัปดาห์และบดให้เป็นผง ( 500 กรัม ) และน้ำมันหอมระเหยสกัดโดยใช้เครื่องมือตามมาตรฐานยุโรปเคลวินเจอร์กรุ๊ป ( 1997 ) น้ำมันที่สกัดได้ ( คลีโอ ) ก็แห้งกว่าโซเดียมซัลเฟตที่จะลบความชื้น และเก็บไว้ในขวดแก้วสีเหลืองอำพันที่อุณหภูมิ 4 องศา ค่าร้อยละของผลผลิตน้ำมันถูกคำนวณเป็นน้ำหนักของน้ำมัน หารด้วยน้ำหนักของเหง้าแห้ง

2.3 ประวัติทางเคมีของน้ำมันขมิ้นชัน L . ที่จำเป็น .

2.3.1 . การวิเคราะห์ gc-fid

ชื่อโปรไฟล์ของคลีโอ ถูกกำหนดจากการวิเคราะห์ gc-fid ใช้ Perkinelmer clarus 600 C ( วอลแทม , สหรัฐอเมริกา ) อุปกรณ์ตรวจจับเปลวไฟไอออไนเซชัน ( FID ) และ db-5ms ผสมคอลัมน์ซิลิกา ( 30 m × 0.25 มม. ความหนาฟิล์ม 3 M ; μ ) รวมกับโปรแกรมซอฟต์แวร์ turbomass . สภาพการทำงาน ได้แก่ ฮีเลียมถูกใช้เป็นแก๊สที่ขนส่งด้วยอัตราการไหล 1 มิลลิลิตรต่อนาทีและอุณหภูมิของหัวฉีดที่ 250 องศา C และเซ็นเซอร์ที่ 280 องศา C มาใช้ คอลัมน์ อุณหภูมิตั้งไว้ที่ 40 องศา C เป็นเวลา 3 นาที และเพิ่มขึ้นเป็นเส้นตรงโดย 4 ° C / นาทีถึง 280 องศา มวลแสงดำเนินการในโหมด EI ( 70 eV ) ด้วยการสแกนความเร็ว 0.5 สแกน / วินาทีในช่วงของ M / Z 40 – 450 คลีโอเจือจาง ) ( 10 μ L / มิลลิลิตร ) และ โซลูชั่น ชั้น 1 μถูกฉีดในโหมดแยกของ 1 : 30 . โปรไฟล์ของคลีโอถูกกำหนดโดยการเปรียบเทียบความคงทนของดัชนีมวลสเปกตรัม และด้วยความเคารพต่ออนุกรมฟังก์ชันปกติของอัลเคน ( อดัมส์ , 2007 ) และมวลสเปกตรัมคอมพิวเตอร์ห้องสมุดของ nist05.lib/wiley 8 ฉบับ ตามลำดับ องค์ประกอบร้อยละของสารประกอบทางเคมีที่ได้จากการคำนวณ GC ยอดพื้นที่โดยไร้ปัจจัยการตอบสนองฟิต .

2.4 . ฤทธิ์ต้านราของน้ำมันขมิ้นชัน L . ที่จำเป็น .

เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . เชื้อราและสภาพวัฒนธรรม

ฤทธิ์ต้านราของคลีโอ มีการใช้เอฟ graminearum ( mtcc 1893 ) วัฒนธรรม ราโตบนในปีที่ 28 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 สัปดาห์ และสามารถเก็บรวบรวมข้อมูลโดยใช้เปปโตนน้ำกับทวี 0.001 % 80 การสร้างสปอร์จำนวนนับและการปรับใช้ haemocytometer 1 × 106 สปอร์ต่อมิลลิลิตร

2.4.2 . ไมโครดีวิธีเจือจาง

ต่ำสุดที่ยับยั้ง ( MIC ) และความเข้มข้น fungicidal ( MFC ) คลีโอเป็นไมโครดีเจือจางโดยวิธีการตามต่างๆ ( 2008 ) ปริมาณ 10 μ l สปอร์แขวนลอย ( 1 × 106 สปอร์ต่อมิลลิลิตร ) คือเพิ่ม 96 ดีไมโครจานและผสมความเข้มข้นต่าง ๆ ของคลีโอ ( 500 - 3500 μกรัม / มิลลิลิตร ) และหมวดสุดท้ายคือ ปรับ 100 μ L กับซอดันบิบ่มที่ 28 ° C เป็นเวลา 3 วัน บ่อไม่มีคลีโอ และด้วยนัยสะแตติน amphotericin B และมีการควบคุมและมาตรฐานอ้างอิงตามลำดับ ไมค์ถูกกำหนดเป็นค่าความเข้มข้นต่ำสุดของคลีโอที่มองเห็นได้ไม่มีการเจริญเติบโต ) หลังจาก 3 วัน ระยะเวลา 10 μ l ตัวอย่างจากแต่ละคนก็เป็นเชื้อบ่ม SDA จาน 3 วันที่ 28 องศา ซึ่งถูกกำหนดเป็นค่าความเข้มข้นต่ำสุดที่ตรวจพบไม่มีการเติบโตมากนัก

2.4.3 . กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบสแกน การสังเกต

ผลของ Cleo เชื้อราโดยใช้วิธี SEM ตามเทคนิคของยามาโมโตะ Ribeiro et al . , ( 2013 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย เป็นเส้นใยถูกรวบรวมจากเจ็ดวันแก่วัฒนธรรม และโอนไปยัง sda สไลด์เตรียมเปิดไมค์และความเข้มข้นของ Cleo และบ่มเป็นเวลา 7 วัน ที่ 28 องศา ตามระยะเวลาที่เหมาะสมต่อการเป็นแก้ไขด้วยกลูตารัลดีไฮด์ 2.5% ใน 0.1 โมลาร์โซเดียมจากนั้นนำบัฟเฟอร์ pH 6.5 ) และใช้สำหรับวิเคราะห์ SEM ตัวอย่างการเจริญคงที่บนเทปกาวคาร์บอนคู่และแห้งออกใน CO2 และละล่ำละลักเคลือบด้วยทองคำ และสังเกตได้ที่ SEM ( Quanta 200 , เฟย , USA ) 20.0 KV ในโหมดสิ่งแวดล้อม

2.5 ผลของเชื้อราและการผลิตมวลชีวภาพ Cleo ในซี

ดาวน์โหลด . น้ำซุปวัฒนธรรม

จุดมุ่งหมายสุดท้ายของการศึกษาครั้งนี้เพื่อทราบกิจกรรมการยับยั้งของ Cleo ในซีผลิตในต่างประเทศ graminearum . ความเข้มข้นต่าง ๆ ของคลีโอ และ 10 μลิตรช่วงล่างสปอร์ ( 1 × 106 สปอร์ต่อมิลลิลิตรเชื้อ 100 ml ในขวด 250 มิลลิลิตร ซอดันบิเออร์เลนเมเยอร์และขวดเหล้ากับการระงับสปอร์และไม่มีคลีโอถูกเรียกว่าการควบคุมและ flasks ถูกบ่มภายใต้เครื่องเขย่า ( 140 และ 160 รอบต่อนาที ) สำหรับ 14 วัน ที่ 28 องศา ตามระยะเวลาที่เหมาะสมต่อการรวบรวมในก่อนชั่งน้ำหนัก whatman กรอง 1 กระดาษและอบแห้งที่อุณหภูมิ 60 องศา C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและมวลชีวภาพเชื้อราตั้งใจ ( เดนเวอร์เครื่องมือ , อินเดีย ) ซี สกัดจากน้ำซุปตามด้วย IB áñ EZ แว่ et al . ( 2554 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย น้ำซุปผสมที่มีปริมาณเท่ากันของไน ( 1 : 1 v / v ) 145 รอบต่อนาที 15 ml ผ่านผ่านซีเฉพาะ immunoaffinity คอลัมน์ ( vicam Milford , USA ) , pre ปรับอากาศที่มี 10 มิลลิลิตร ฟอสเฟต

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ2.1 สารเคมีและวัสดุเหง้าของขมิ้นชัน... ได้มาจากอูตี้ ทมิฬนาฑู อินเดีย sabouraud เป็นอาหาร (SDA) และน้ำซุป (เอสดีบี) ที่ได้รับจาก himedia (มุมไบอินเดีย) ซีราลีโนนและสารเคมีอื่นๆซื้อมาจาก Sigma – ดิช (บังกาลอร์ อินเดีย)2.2 การสกัดน้ำมันหอมระเหยจากเหง้าของขมิ้นชันเหง้าของขมิ้นชัน L C แห้งในร่มอุณหภูมิห้องเป็นเวลา 4 สัปดาห์และบดให้เป็นผง (น. 500) และน้ำมันหอมระเหยสกัดโดยใช้เครื่องมือตามมาตรฐานยุโรปเคลวินเจอร์กรุ๊ป (1997) น้ำมันที่สกัดได้ (คลีโอ) ก็แห้งกว่าโซเดียมซัลเฟตที่จะลบความชื้นและเก็บไว้ในขวดแก้วสีเหลืองอำพันที่อุณหภูมิ 4 องศาค่าร้อยละของผลผลิตน้ำมันถูกคำนวณเป็นน้ำหนักของน้ำมันหารด้วยน้ำหนักของเหง้าแห้ง2.3 ประวัติทางเคมีของน้ำมันขมิ้นชันลิตร ที่จำเป็น2.3.1 Gc-fid แบบการวิเคราะห์ชื่อโปรไฟล์ของคลีโอ ถูกกำหนดจากการวิเคราะห์ gc-fid ใช้ Perkinelmer clarus 600 C ( วอลแทม , สหรัฐอเมริกา ) อุปกรณ์ตรวจจับเปลวไฟไอออไนเซชัน ( FID ) และ db-5ms ผสมคอลัมน์ซิลิกา ( 30 m × 0.25 มม. ความหนาฟิล์ม 3 M ; μ ) รวมกับโปรแกรมซอฟต์แวร์ turbomass . สภาพการทำงาน ได้แก่ ฮีเลียมถูกใช้เป็นแก๊สที่ขนส่งด้วยอัตราการไหล 1 มิลลิลิตรต่อนาทีและอุณหภูมิของหัวฉีดที่ 250 องศา C และเซ็นเซอร์ที่ 280 องศา C มาใช้ คอลัมน์ อุณหภูมิตั้งไว้ที่ 40 องศา C เป็นเวลา 3 นาที และเพิ่มขึ้นเป็นเส้นตรงโดย 4 ° C / นาทีถึง 280 องศา มวลแสงดำเนินการในโหมด EI ( 70 eV ) ด้วยการสแกนความเร็ว 0.5 สแกน / วินาทีในช่วงของ M / Z 40 – 450 คลีโอเจือจาง ) ( 10 μ L / มิลลิลิตร ) และ โซลูชั่น ชั้น 1 μถูกฉีดในโหมดแยกของ 1 : 30 . โปรไฟล์ของคลีโอถูกกำหนดโดยการเปรียบเทียบความคงทนของดัชนีมวลสเปกตรัม และด้วยความเคารพต่ออนุกรมฟังก์ชันปกติของอัลเคน ( อดัมส์ , 2007 ) และมวลสเปกตรัมคอมพิวเตอร์ห้องสมุดของ nist05.lib/wiley 8 ฉบับ ตามลำดับ องค์ประกอบร้อยละของสารประกอบทางเคมีที่ได้จากการคำนวณ GC ยอดพื้นที่โดยไร้ปัจจัยการตอบสนองฟิต .2.4 . ฤทธิ์ต้านราของน้ำมันขมิ้นชัน L . ที่จำเป็น .เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . เชื้อราและสภาพวัฒนธรรมฤทธิ์ต้านราของคลีโอ มีการใช้เอฟ graminearum ( mtcc 1893 ) วัฒนธรรม ราโตบนในปีที่ 28 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 สัปดาห์ และสามารถเก็บรวบรวมข้อมูลโดยใช้เปปโตนน้ำกับทวี 0.001 % 80 การสร้างสปอร์จำนวนนับและการปรับใช้ haemocytometer 1 × 106 สปอร์ต่อมิลลิลิตร2.4.2 . ไมโครดีวิธีเจือจางต่ำสุดที่ยับยั้ง ( MIC ) และความเข้มข้น fungicidal ( MFC ) คลีโอเป็นไมโครดีเจือจางโดยวิธีการตามต่างๆ ( 2008 ) ปริมาณ 10 μ l สปอร์แขวนลอย ( 1 × 106 สปอร์ต่อมิลลิลิตร ) คือเพิ่ม 96 ดีไมโครจานและผสมความเข้มข้นต่าง ๆ ของคลีโอ ( 500 - 3500 μกรัม / มิลลิลิตร ) และหมวดสุดท้ายคือ ปรับ 100 μ L กับซอดันบิบ่มที่ 28 ° C เป็นเวลา 3 วัน บ่อไม่มีคลีโอ และด้วยนัยสะแตติน amphotericin B และมีการควบคุมและมาตรฐานอ้างอิงตามลำดับ ไมค์ถูกกำหนดเป็นค่าความเข้มข้นต่ำสุดของคลีโอที่มองเห็นได้ไม่มีการเจริญเติบโต ) หลังจาก 3 วัน ระยะเวลา 10 μ l ตัวอย่างจากแต่ละคนก็เป็นเชื้อบ่ม SDA จาน 3 วันที่ 28 องศา ซึ่งถูกกำหนดเป็นค่าความเข้มข้นต่ำสุดที่ตรวจพบไม่มีการเติบโตมากนัก2.4.3 . กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบสแกน การสังเกตผลของ Cleo เชื้อราโดยใช้วิธี SEM ตามเทคนิคของยามาโมโตะ Ribeiro et al . , ( 2013 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย เป็นเส้นใยถูกรวบรวมจากเจ็ดวันแก่วัฒนธรรม และโอนไปยัง sda สไลด์เตรียมเปิดไมค์และความเข้มข้นของ Cleo และบ่มเป็นเวลา 7 วัน ที่ 28 องศา ตามระยะเวลาที่เหมาะสมต่อการเป็นแก้ไขด้วยกลูตารัลดีไฮด์ 2.5% ใน 0.1 โมลาร์โซเดียมจากนั้นนำบัฟเฟอร์ pH 6.5 ) และใช้สำหรับวิเคราะห์ SEM ตัวอย่างการเจริญคงที่บนเทปกาวคาร์บอนคู่และแห้งออกใน CO2 และละล่ำละลักเคลือบด้วยทองคำ และสังเกตได้ที่ SEM ( Quanta 200 , เฟย , USA ) 20.0 KV ในโหมดสิ่งแวดล้อม2.5 ผลของเชื้อราและการผลิตมวลชีวภาพ Cleo ในซีดาวน์โหลด . น้ำซุปวัฒนธรรมจุดมุ่งหมายสุดท้ายของการศึกษาครั้งนี้เพื่อทราบกิจกรรมการยับยั้งของ Cleo ในซีผลิตในต่างประเทศ graminearum . ความเข้มข้นต่าง ๆ ของคลีโอ และ 10 μลิตรช่วงล่างสปอร์ ( 1 × 106 สปอร์ต่อมิลลิลิตรเชื้อ 100 ml ในขวด 250 มิลลิลิตร ซอดันบิเออร์เลนเมเยอร์และขวดเหล้ากับการระงับสปอร์และไม่มีคลีโอถูกเรียกว่าการควบคุมและ flasks ถูกบ่มภายใต้เครื่องเขย่า ( 140 และ 160 รอบต่อนาที ) สำหรับ 14 วัน ที่ 28 องศา ตามระยะเวลาที่เหมาะสมต่อการรวบรวมในก่อนชั่งน้ำหนัก whatman กรอง 1 กระดาษและอบแห้งที่อุณหภูมิ 60 องศา C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและมวลชีวภาพเชื้อราตั้งใจ ( เดนเวอร์เครื่องมือ , อินเดีย ) ซี สกัดจากน้ำซุปตามด้วย IB áñ EZ แว่ et al . ( 2554 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย น้ำซุปผสมที่มีปริมาณเท่ากันของไน ( 1 : 1 v / v ) 145 รอบต่อนาที 15 ml ผ่านผ่านซีเฉพาะ immunoaffinity คอลัมน์ ( vicam Milford , USA ) , pre ปรับอากาศที่มี 10 มิลลิลิตร ฟอสเฟต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ2.1 เคมีและสารวัสดุเหง้าของขมิ้นชัน . . ได้มาจากอูทมิฬนาฑู, อินเดีย SABOURAUD dextrose agar (SDA) และน้ำซุป (เอสดีบี) ที่ได้รับจาก HIMEDIA (มุมไบอินเดีย) ซีราลีโนนและสารเคมีอื่น ๆ ซื้อมาจาก ซิก - ดิ ช (บังกาลอร์, อินเดีย) 2.2 . เหง้าของขมิ้นชัน LC แห้งในร่มอุณหภูมิห้องเป็นเวลา 4 สัปดาห์และบดให้เป็นผง (500 กรัม) (1997) น้ำมันที่สกัดได้ (คลีโอ) 4 องศา หารด้วยน้ำหนักของเหง้าแห้ง2.3 ประวัติทางเคมีของน้ำมันขมิ้นชัน L ที่จำเป็น. 2.3.1 การวิเคราะห์ GC-FID ชื่อโปรไฟล์ของคลีโอถูกกำหนดจาก การวิเคราะห์ GC-FID ใช้ Perkinelmer Clarus 600 C (วอลแทม, สหรัฐอเมริกา) อุปกรณ์ตรวจจับเปลวไฟไอออไน เซชัน (FID) และ DB-5ms ผสมคอลัมน์ ซิลิกา (30 เมตร× 0.25 มมความหนาฟิล์ม 3 เอ็ม. μ) รวมกับโปรแกรมซอฟต์แวร์ turbomass สภาพการทำงาน ได้แก่ 1 250 องศาเซลเซียสและเซ็นเซอร์ที่ 280 องศาเซลเซียสมาใช้คอลัมน์อุณหภูมิตั้งไว้ที่ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาทีและเพิ่มขึ้นเป็นเส้นตรงโดย 4 ° C / นาทีถึง 280 องศามวลแสงดำเนินการในโหมด EI (70 EV) ด้วย การสแกนความเร็ว 0.5 สแกน / วินาทีในช่วงของ M / Z 40-450 คลีโอเจือจาง) (10 μ L / มิลลิลิตร) และโซลูชั่นชั้น 1 μถูกฉีดในโหมดแยกของ 1: 30 (อดัมส์, 2007) nist05.lib / Wiley 8 ฉบับตามลำดับ GC . 2.4 ฤทธิ์ต้านราของน้ำมันขมิ้นชัน L ที่จำเป็น. เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย มีการใช้เอฟ graminearum (MTCC 1893) วัฒนธรรมราโตบนในปีที่ 28 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 สัปดาห์ 0.001% 80 สไลด์นับเม็ดเลือด 1 × 106 สปอร์ต่อมิลลิลิตร2.4.2 (MIC) และความเข้มข้นเชื้อรา (MFC) (2008) ปริมาณ 10 μ L สปอร์แขวนลอย (1 × 106 สปอร์ต่อมิลลิลิตร) คือเพิ่ม 96 ดีไมโครจานและผสมความเข้มข้นต่าง ๆ ของคลีโอ (500-3500 μกรัม / มิลลิลิตร) และหมวดสุดท้ายคือปรับ 100 μ L กับซอดันบิบ่มที่อุณหภูมิ 28 ° C เป็นเวลา 3 วันบ่อไม่มีคลีโอและด้วยนัย สะแตติน amphotericin B ) หลังจาก 3 วันระยะเวลา 10 μ L ตัวอย่างจากแต่ละคนก็เป็นเชื้อบ่ม SDA จานที่ 3 วันที่ 28 องศา . อิเล็กตรอนแบบกล้องจุลทรรศน์สแกนหัวเรื่อง: การสังเกตผลของคลีโอเชื้อราโดยใช้วิธี SEM ตามเทคนิคของยามาโมโตะ Ribeiro, et al (2013) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย และโอนไปยัง SDA คลีโอและบ่มเป็นเวลา 7 วันที่ 28 องศา 2.5% ใน 0.1 โมลาร์โซเดียมจากนั้นนำบัฟเฟอร์ค่า pH 6.5) และใช้สำหรับวิเคราะห์ SEM CO2 และละล่ำละลักเคลือบด้วยทองคำและสังเกตได้ ที่ SEM (ควอนตั้ม 200, เฟย, สหรัฐอเมริกา) 20.0 KV ในโหมดสิ่งแวดล้อม2.5 ผลของเชื้อราและการผลิตมวลชีวภาพคลีโอซีในห้างหุ้นส่วนจำกัดดาวน์โหลด คลีโอในซีผลิตในต่างประเทศ graminearum ความเข้มข้นต่าง ๆ ของคลีโอและ 10 μลิตรช่วงล่างสปอร์ (1 × 106 สปอร์ต่อมิลลิลิตรเชื้อ 100 มล. ในขวด 250 มิลลิลิตร ขวดถูกบ่มภายใต้เครื่องเขย่า (140 และ 160 รอบต่อนาที) สำหรับ 14 วันที่ 28 องศา Whatman กรอง 1 กระดาษและอบแห้งที่อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและมวลชีวภาพเชื้อราตั้งใจ (เดนเวอร์เครื่องมือ, อินเดีย) ซีสกัดจากน้ำซุปตามด้วย IB EZ แว่ et al. (2554) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย น้ำซุปผสมที่มีปริมาณเท่ากัน ของไน (1: 1 v / v) 145 รอบต่อนาที 15 มลผ่านผ่านซีเฉพาะ immunoaffinity คอลัมน์ (vicam ฟอร์ด, สหรัฐอเมริกา) ก่อนปรับอากาศที่มี 10 มิลลิลิตรฟอสเฟต