To ensure that both donor and accep

To ensure that both donor and acceptor proteins maintain their characteristics as part of the BRET fusion constructs, we measured their spectral properties in the 460–720 nm range by bioluminescence imaging of cells using an IVIS-200 imaging system equipped with 20-nm bandwidth filters. Fusion of the donor and acceptor proteins induces no significant change to the spectral signature of these proteins (Fig. 2B and Fig. S1). As anticipated, the emission maximum of cells expressing BRET6 was red-shifted to 640 nm (emission of TurboFP) relative to the 540-nm RLuc8.6 signal (Fig. 2B). The BRET ratios for BRET4.1 (0.55 ± 0.02), BRET5 (0.59 ± 0.04), and BRET 6 (0.58 ± 0.02) (Fig. 2C), indicated similar energy transfer efficiencies. BRET6.1 (0.78 ± 0.04) showed slightly higher BRET efficiency than BRET6 but comparable with that of previously reported BRET3 (0.79 ± 0.01). In contrast, the use of CLZ-v (BRET3.1) provided a slightly lower BRET ratio (0.74 ± 0.02) than BRET3 in accordance with lower spectral resolution. Additionally, the calculated BRET ratios were independent of cell number in the given experimental setting, showing the ratiometric characteristic of the measurements (Fig. 2D). These results revealed that BRET6 and BRET6.1 systems hold the greatest potential for in vivo application because of their high BRET efficiencies, unprecedented red wavelength emission (640 nm), and high spectral resolution (100 and 65 nm, respectively).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพื่อให้แน่ใจว่า ผู้บริจาคและ acceptor โปรตีนรักษาลักษณะของพวกเขาเป็นส่วนหนึ่งของโครงสร้างฟิวชั่นเบรต เราวัดคุณสมบัติของสเปกตรัมในช่วง 460-720 nm โดย bioluminescence ภาพของเซลล์โดยใช้ระบบการถ่ายภาพ IVIS 200 พร้อมกรองแบนด์วิธ 20 nm อาหารโปรตีนที่ผู้บริจาคและ acceptor ก่อให้เกิดเปลี่ยนแปลงลายเซ็นสเปกตรัมของโปรตีนเหล่านี้ (Fig. 2B และฟิกไม่สำคัญ S1) ตามคาด ปล่อยก๊าซสูงสุดของเซลล์ที่แสดง BRET6 เป็นสีแดงจาก 640 nm (ไอเสีย TurboFP) สัมพันธ์กับสัญญาณ RLuc8.6 540 nm (Fig. 2B) อัตราเบรตสำหรับ BRET4.1 (0.55 ± 0.02), BRET5 (0.59 ± 0.04), และ 6 (0.58 ± 0.02) เบรต (Fig. 2C), ระบุคล้ายพลังงานโอนประสิทธิภาพ BRET6.1 (0.78 ± 0.04) แสดงให้เห็นว่าประสิทธิภาพเบรตสูงขึ้นเล็กน้อยกว่า BRET6 แต่เปรียบเทียบกับที่รายงานไปก่อนหน้านี้ BRET3 (0.79 ± 0.01) ในทางตรงกันข้าม ใช้ CLZ-v (BRET3.1) ให้บริการต่ำกว่าเล็กน้อยเบรตอัตรา (0.74 ± 0.02) กว่า BRET3 ตามความละเอียดต่ำกว่าสเปกตรัม นอกจากนี้ อัตราส่วนเบรตคำนวณได้ขึ้นอยู่กับจำนวนเซลล์การทดลองกำหนด แสดงลักษณะ ratiometric ของวัด (Fig. 2D) ผลลัพธ์เหล่านี้เปิดเผยว่า ระบบ BRET6 และ BRET6.1 ถือศักยภาพยิ่งใหญ่ที่สุดสำหรับโปรแกรมประยุกต์ในสัตว์ทดลองเนื่องจากเบรตสูงของประสิทธิภาพ ความยาวคลื่นสีแดงเป็นประวัติการณ์มลพิษ (640 nm), และความละเอียดสูงสเปกตรัม (100 และ 65 nm ตามลำดับ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อให้แน่ใจว่าทั้งผู้บริจาคและโปรตีนตัวรับรักษาลักษณะของพวกเขาเป็นส่วนหนึ่งของการสร้างฟิวชั่น BRET เราวัดคุณสมบัติสเปกตรัมของพวกเขาในช่วง 460-720 นาโนเมตรโดยการถ่ายภาพชีวิตเรืองแสงของเซลล์โดยใช้ระบบการถ่ายภาพ Ivis-200 มาพร้อมกับฟิลเตอร์แบนด์วิดธ์ 20 นาโนเมตร . ฟิวชั่นของผู้บริจาคและโปรตีนตัวรับก่อให้เกิดการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญลายเซ็นสเปกตรัมของโปรตีนเหล่านี้ (รูป. 2B และรูป. S1) ขณะที่คาดว่าจะเกินการปล่อยเซลล์แสดง BRET6 ถูกสีแดงเลื่อนไป 640 นาโนเมตร (ปล่อย TurboFP) เทียบกับ 540 นาโนเมตรสัญญาณ RLuc8.6 (รูป. 2B) อัตราส่วน BRET สำหรับ BRET4.1 (0.55 ± 0.02) BRET5 (0.59 ± 0.04) และ BRET 6 (0.58 ± 0.02) (รูป. 2C) ชี้ให้เห็นประสิทธิภาพการถ่ายโอนพลังงานที่คล้ายกัน BRET6.1 (0.78 ± 0.04) พบว่ามีประสิทธิภาพ BRET สูงกว่า BRET6 แต่เทียบเคียงกับที่ของรายงานก่อนหน้านี้ BRET3 (0.79 ± 0.01) ในทางตรงกันข้ามการใช้ CLZ-V (BRET3.1) ให้อัตราส่วน BRET ลดลงเล็กน้อย (0.74 ± 0.02) มากกว่า BRET3 ตามมติสเปกตรัมที่ต่ำกว่า นอกจากนี้การคำนวณอัตราส่วน BRET เป็นอิสระของจำนวนเซลล์ในการตั้งค่าการทดลองที่ได้รับแสดงให้เห็นลักษณะของการวัด ratiometric (รูป. 2D) ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า BRET6 และระบบ BRET6.1 ถือที่มีศักยภาพที่ยิ่งใหญ่ที่สุดสำหรับการใช้งานในร่างกายเพราะ BRET ประสิทธิภาพสูงของพวกเขาสีแดงความยาวคลื่นประวัติการณ์ปล่อยก๊าซเรือนกระจก (640 นาโนเมตร) และความละเอียดสูงสเปกตรัม (100 นาโนเมตรและ 65 ตามลำดับ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อให้แน่ใจว่า ทั้งผู้บริจาคและพระนาสิกโปรตีนรักษาลักษณะของพวกเขาเป็นส่วนหนึ่งของการสร้าง Bret เราวัดคุณสมบัติของสเปกตรัมของพวกเขาใน 460 – 720 nm ช่วงโดยไบโอลูมิเนสเซนภาพเซลล์โดยใช้ระบบการถ่ายภาพ ivis-200 ติดตั้ง 20 กรองแบนด์วิดธ์ nm .ฟิวชั่นของผู้บริจาคและโปรตีนพระนาสิก ทำให้ไม่แตกต่างกัน เปลี่ยนลายเซ็นสเปกตรัมของโปรตีนเหล่านี้ ( รูปที่ 2B และมะเดื่อ S1 ) ตามที่คาดการณ์ไว้ การปล่อยก๊าซสูงสุดของเซลล์ที่แสดง bret6 เป็นสีแดงเปลี่ยน 640 nm ( ปล่อย turbofp ) เทียบกับ 540 nm rluc8.6 สัญญาณ ( รูปที่ 2B ) โดยเบร็ทอัตราส่วน bret4.1 ( 0.55 ± 0.02 ) bret5 ( 0.59 ± 0.04 ) และเบร็ท 6 ( 0.58 ± 0.02 ) ( รูปที่ 2 )แสดงประสิทธิภาพการถ่ายเทพลังงานที่คล้ายกัน bret6.1 ( 0.78 ± 0.04 ) ให้สูงขึ้นเล็กน้อย Bret ประสิทธิภาพมากกว่า bret6 แต่เปรียบกับที่เคยรายงาน bret3 ( 0.79 ± 0.01 ) ในทางตรงกันข้าม การใช้ clz-v ( bret3.1 ) มีสัดส่วนลดลงเล็กน้อย Bret ( 0.74 ± 0.02 ) กว่า bret3 ตามลดสเปกตรัมความละเอียด นอกจากนี้คำนวณอัตราส่วนของจำนวนเซลล์เบรต เป็นอิสระในการตั้งค่าการทดลองให้แสดงลักษณะ ratiometric ของการวัด ( รูปที่ 2 ) ผลลัพธ์เหล่านี้และพบว่า bret6 bret6.1 ระบบถือศักยภาพมากที่สุดในสัตว์ทดลองโปรแกรมเพราะสูงประสิทธิภาพ Bret , ประวัติการณ์สีแดงความยาวคลื่นเล็ด ( 640 nm )สเปกตรัมความละเอียดสูง ( 100 และ 65 nm ตามลำดับ )