2.6. Q-PCR analysisQ-PCR analysis w

2.6. Q-PCR analysis
Q-PCR analysis was performed to analyze the gene expression
of GR1, GR2 and MR in the gill, intestine and kidney during the
FW and SW acclimation with an iQ™ Multicolor Real-Time PCR
Detection System (Bio-Rad Co., Hercules, CA). Primers were designed
using primer expression software (Applied Biosystems, Foster
City, CA) (Table 1). GAPDH was used as an internal control in
the present study. Gene quantification of the standards, samples
and controls was conducted simultaneously in a Q-PCR machine
(iQ™ Multicolor Real-Time PCR Detection System; Bio-Rad Co.,
Hercules, CA), with iQ™ SYBR green (Bio-Rad) as a dsDNA minor
groove-binding agent and forward and reverse primers and water
according to the method from our previous study [33]. Calculations
of the PCR efficiency, which were based on the slope of the relationship
between the log input cDNA (transcript concentrations)
vs. Ct (the calculated fractional cycle number at which the PCR-
fluorescence product is detectable above a threshold), were obtained.
We used an efficiency-corrected method for the calculation
of the relative expression levels of GR1, GR2 and MR in the gill,
intestine and kidney. The correlation of the standard curve was -
0.999. The determination of the transcripts was normalized with
a control gene, GADPH.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 การวิเคราะห์ Q-PCR
วิเคราะห์ Q-PCR ได้ดำเนินการในการวิเคราะห์การแสดงออกของยีน
ของ GR1, GR2 และนายในเหงือกลำไส้และไตในระหว่างการ
ส่งต่อและปรับตัวกับ SW iQ ™ Multicolor แบบ Real-Time PCR
ระบบตรวจจับ (Bio-Rad ร่วม . ดาว CA) ไพรเมอร์ได้รับการออกแบบ
โดยใช้ซอฟแวร์การแสดงออกของไพรเมอร์ (Applied Biosystems, ฟอสเตอร์
ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) (ตารางที่ 1) GAPDH ถูกใช้เป็นระบบการควบคุมภายในใน
การศึกษาปัจจุบัน ปริมาณยีนของมาตรฐานตัวอย่าง
และการควบคุมได้ดำเนินการพร้อมกันในเครื่อง Q-PCR
(iQ ™ Multicolor แบบ Real-Time PCR ระบบตรวจจับ; Bio-Rad Co. ,
ดาว, CA) ด้วย iQ ™ SYBR สีเขียว (Bio-Rad) เป็นผู้เยาว์ dsDNA
ร่องผูกพันตัวแทนและไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์และน้ำ
ตามวิธีการจากการศึกษาก่อนหน้านี้ [33] การคำนวณ
ประสิทธิภาพของวิธี PCR ซึ่งอยู่บนพื้นฐานของความลาดชันของความสัมพันธ์
ระหว่างยีนเข้าสู่ระบบการป้อนข้อมูล (ความเข้มข้นหลักฐาน)
เมื่อเทียบกับ กะรัต (คำนวณจำนวนรอบเศษส่วนที่ PCR-
สินค้าเรืองแสงสามารถตรวจพบได้สูงกว่าเกณฑ์) ที่ได้รับ.
เราใช้วิธีการแก้ไขที่มีประสิทธิภาพสำหรับการคำนวณ
ของระดับการแสดงออกของญาติของ GR1, GR2 และนายในเหงือก,
ลำไส้ และไต ความสัมพันธ์ของเส้นโค้งเป็นมาตรฐาน -
0.999 ความมุ่งมั่นของยีนที่ได้รับปกติกับ
ยีนควบคุม GADPH

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 q-pcr การวิเคราะห์
q-pcr การวิเคราะห์วิเคราะห์การแสดงออกของยีนของ gr1 gr2
, และคุณ ในกิล ลำไส้และไตในระหว่าง
FW และ SW acclimation กับไอคิว™ multicolor เวลาจริงและระบบตรวจจับ ( ไบแรด
. , Hercules , CA ) ไพรเมอร์ที่ออกแบบ
โดยใช้ซอฟต์แวร์การแสดงออกรองพื้น ( Applied Biosystems ฟอสเตอร์
City , CA ) ( ตารางที่ 1 ) gapdh ถูกใช้เป็นระบบควบคุมภายในใน
การศึกษาปัจจุบัน ปริมาณของยีนและการควบคุมมาตรฐานตัวอย่าง
ดำเนินการพร้อมกันในเครื่อง q-pcr
( IQ ™ multicolor เวลา PCR จริงระบบการตรวจสอบ ; ไบโอ ราด Co . ,
Hercules , CA ) กับไอคิว™ SYBR กรีน ( ไบโอ ราด ) เป็น dsdna เล็กน้อย
ร่องผูกตัวแทนและไปข้างหน้าและย้อนกลับชนิดน้ำ
ตาม วิธีการศึกษาจากเดิม [ 33 ] การคำนวณ
ประสิทธิภาพของวิธี PCR ซึ่งขึ้นอยู่กับความลาดชันของความสัมพันธ์ระหว่างบันทึกข้อมูล cDNA (
.
) ) กับ CT ( คำนวณเศษส่วนรอบหมายเลขที่ PCR -
เรืองแสงผลิตภัณฑ์ได้เหนือเกณฑ์ ) ที่ได้รับ
เราใช้ประสิทธิภาพการแก้ไขวิธีการคำนวณ
ของ ญาติระดับการแสดงออกของ gr1 gr2 , และนายในเหงือก
ลำไส้และไต ความสัมพันธ์ของเส้นโค้งมาตรฐาน -
0.999 . ความมุ่งมั่นของยีนเป็นปกติกับ
ควบคุมยีน gadph .