3.2. Granule structure and development
Granules in microorganisms were observed under the
microscope by Beijerinck as early as 1888 (reported in [97])
andmay have been known before this.An image of granules
in Azotobacter chroococcum (taken using a transmission
electron microscope) is given in Fig. 2 as an example [98].
The genetically manipulable model organism in PHA
research, Ralstonia eutropha, can accumulate P(3HB) in the
form of multiple granules of 0.2–0.5 m in size, and can
have a polyester content of more than 90% of the cell
dry matter [99], with an average final number of granules
in a typical PHA-producing cell of around 10 [2,100].
Steinbüchel et al. [101] presented some calculations on
P(3HB) in granules: assuming a relative molecular mass of
3 × 106 Da, then a single P(3HB) molecule would be made
up of approximately 35,000 3HB units, with a total length
of 24,000 nm. Based on the typical density of 1.2 g cm−3,
the diameter of a granule of a single P(3HB) molecule
would be around 9.7 nm. In a typical granule of 350 nm
diameter, therefore, there would be around 43,000 P(3HB)
molecules. A granule has an amorphous polyester core (see
Section 3.3). A distinct boundary layer atleast 3–4 nm thick
was noted in early thin-section electron microscopy and
was thoughtembedded and attached proteins; later results suggested
that this layer may be as thick as 14 nm [94,102,103]. Other
results obtained using atomic force microscopy (AFM) on
lysed cells seemed to suggest a smooth outer envelope
(lipid) with an inner network structure ∼2–4 nm thick
based on PhaP (protein) and a crystalline layer beneath this
[104]. However, Western blot and immunogold labeling
experiments have shown that the surface of the granule
has a high protein content. Electron cryotomography has
recently been used [105] to examine granule synthesis and
development in a “near-native”, “frozen-hydrated” state in
intact cells. All had a discontinuous surface layer more consistent
with a partial protein coating than a lipid mono- or
bi-layer [105]. It was proposed that the results of earlier
studies may have been in part affected by artifacts of the
preparationmethodsusedas well asdifferences innucleoid
condensation. to comprise a phospholipid monolayer with
3.2. เม็ดโครงสร้างและการพัฒนาเม็ดในจุลินทรีย์ถูกตั้งข้อสังเกตภายใต้การกล้องจุลทรรศน์ โดย Beijerinck เร็วเป็น 1888 (รายงานใน [97])andmay ได้รับทราบก่อนหน้านี้ รูปภาพของเม็ดใน chroococcum Azotobacter (ถ่ายโดยใช้การส่งผ่านกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน) ถูกกำหนดในรูปที่ 2 เป็นตัวอย่าง [98]สิ่งมีชีวิตแปลงพันธุกรรม manipulable รุ่นในผาวิจัย Ralstonia eutropha สามารถสะสม P(3HB) ในการรูปแบบของหลายเม็ด 0.2 – 0.5 เมตร และสามารถมีเนื้อหาเป็นโพลีเอสเตอร์มากกว่า 90% ของเซลล์เรื่อง [99], มีตัวเลขเฉลี่ยของเม็ดแห้งในทั่วไปผาผลิตเซลล์ประมาณ 10 [2,100]Steinbüchel et al. [101] นำเสนอการคำนวณบางอย่างบนP(3HB) ในเม็ด: สมมติว่ามวลโมเลกุลสัมพัทธ์ของ3 × 106 ดา แล้ว P(3HB) โมเลกุลเดี่ยวจะทำของหน่วย 3HB ประมาณ 35,000 มีความยาวรวมของ 24,000 nm อิงตามบททั่วไปความหนาแน่นของ 1.2 g cm−3เส้นผ่าศูนย์กลางของเม็ดของโมเลกุลเดี่ยว P(3HB)จะประมาณ 9.7 nm ในแบบเม็ดทั่วไป 350 nmเส้นผ่าศูนย์กลาง ดังนั้น จะมี P(3HB) ประมาณ 43,000โมเลกุล แกรนูลได้ไปโพลีเอสเตอร์หลัก (ดูส่วน 3.3) ชั้นขอบเขตแตกต่างกันอย่างน้อย 3-4 นาโนเมตรหนาถูกบันทึกไว้ในส่วนบางช่วงชาวดัตช์ และเป็น thoughtembedded และแนบโปรตีน ผลภายหลังการแนะนำว่า ชั้นนี้อาจหนาเท่า 14 nm [94,102,103] อื่น ๆผลลัพธ์ได้โดยใช้อะตอมบังคับกล้องจุลทรรศน์ (AFM)นาทีที่ 37uc เซลล์ดูเหมือนจะ แนะนำเป็นซองชั้นนอกเรียบ(ไขมัน) กับมีเครือข่ายภายในโครงสร้าง ∼2 – 4 nm หนาตามภาพ (โปรตีน) และชั้นผลึกด้านใต้นี้[104] . อย่างไรก็ตาม น้าเวสและฉลาก immunogoldการทดลองได้แสดงให้เห็นว่าพื้นผิวของแกรนูลมีโปรตีนสูง มีอิเล็กตรอน cryotomographyเมื่อเร็ว ๆ นี้ การใช้ [105] การตรวจสอบการสังเคราะห์เม็ด และในสถานะ "ใกล้พื้นเมือง" "แช่แข็งไฮเดรท" ในการพัฒนามีเซลล์เหมือนเดิม มีทั้งหมดชั้นผิวไม่ต่อเนื่องมากขึ้นด้วยการเคลือบโปรตีนบางส่วนกว่าโมโนไขมัน - หรือชั้นสอง [105] มันถูกเสนอที่ผลลัพธ์ของก่อนหน้านี้การศึกษาอาจได้รับในส่วนผลกระทบจากสิ่งประดิษฐ์ของการpreparationmethodsusedas ดี asdifferences innucleoidการควบแน่น เพื่อประกอบเป็น monolayer เรียมด้วย
การแปล กรุณารอสักครู่..
3.2 โครงสร้างและการพัฒนาเม็ด
เม็ดในจุลชีพถูกตั้งข้อสังเกตภายใต้
กล้องจุลทรรศน์โดย Beijerinck เร็วที่สุดเท่าที่ 1888 (รายงานใน [97])
andmay ได้รับทราบก่อนที่ภาพของเม็ด this.An
ใน Azotobacter chroococcum (ถ่ายโดยใช้การส่งผ่าน
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน) จะได้รับใน มะเดื่อ. 2 เป็นตัวอย่าง [98].
ยักย้ายพันธุกรรมสิ่งมีชีวิตในรูปแบบ PHA
วิจัย Ralstonia eutropha สามารถสะสม P (3HB) ใน
รูปแบบของหลายเม็ด 0.2-0.5 เมตรในขนาดและสามารถ
มีเนื้อหาโพลีเอสเตอร์กว่า 90 % ของเซลล์
แห้ง [99] โดยมีจำนวนเฉลี่ยสุดท้ายของเม็ด
ในเซลล์ PHA ผลิตทั่วไปประมาณ 10 [2100].
Steinbüchel et al, [101] ที่นำเสนอการคำนวณบางอย่างเกี่ยวกับ
P (3HB) ในเม็ด: สมมติว่ามวลโมเลกุลญาติของ
3 × 106 ดาแล้ว P เดียว (3HB) โมเลกุลจะทำ
ขึ้นจากประมาณ 35,000 3HB หน่วยมีความยาวรวม
24,000 นาโนเมตร . ขึ้นอยู่กับความหนาแน่นตามแบบฉบับของ G 1.2 ซม-3,
เส้นผ่านศูนย์กลางของเม็ดของ P เดียว (3HB) เป็นโมเลกุล
จะประมาณ 9.7 นาโนเมตร ในแบบฉบับของเม็ดนาโนเมตร 350
เส้นผ่าศูนย์กลางจึงจะมีรอบ 43,000 P (3HB)
โมเลกุล เม็ดมีแกนโพลีเอสเตอร์สัณฐาน (ดู
มาตรา 3.3) ชั้นขอบเขตที่แตกต่างกันอย่างน้อย 3-4 นาโนเมตรหนา
ได้ระบุไว้ในบางส่วนกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนในช่วงต้นและ
ถูก thoughtembedded และแนบโปรตีน; ภายหลังผลแนะนำ
ว่าชั้นนี้อาจจะหนาเป็น 14 นาโนเมตร [94102103] อื่น ๆ
ผลที่ได้รับโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม (AFM) บน
เซลล์ lysed ดูเหมือนจะแนะนำซองเรียบด้านนอก
(ไขมัน) กับเครือข่ายภายในโครงสร้าง ~2-4 นาโนเมตรหนา
ขึ้นอยู่กับปราบ (โปรตีน) และชั้นผลึกใต้นี้
[104] อย่างไรก็ตามดวงตะวันและการติดฉลาก immunogold
การทดลองแสดงให้เห็นว่าพื้นผิวของเม็ดที่
มีปริมาณโปรตีนสูง อิเลคตรอน cryotomography ได้
เมื่อเร็ว ๆ นี้ถูกนำมาใช้ [105] เพื่อตรวจสอบการสังเคราะห์เม็ดและ
พัฒนาใน "ใกล้แม่", "แช่แข็งไฮเดร" ของรัฐใน
เซลล์เหมือนเดิม ทั้งหมดมีชั้นผิวต่อเนื่องสอดคล้องกันมากขึ้น
ด้วยการเคลือบโปรตีนบางส่วนกว่าไขมันขาวดำหรือ
สองชั้น [105] มันก็เสนอว่าผลของการก่อนหน้านี้
การศึกษาอาจได้รับในส่วนที่ได้รับผลกระทบโดยสิ่งประดิษฐ์ของ
preparationmethodsusedas ดี asdifferences innucleoid
ควบแน่น จะประกอบด้วย monolayer เรียมด้วย
การแปล กรุณารอสักครู่..