The S-Tbr (DyNAmo II; Finnzymes Oy,

The S-Tbr (DyNAmo II; Finnzymes Oy, Espoo, Finland) and Taq (Roche, Indianapolis, IN) DNA polymerases were used for PCR. S-Tbr is an engineered polymerase where the N-terminal 5′-3′ exonuclease domain of Thermus brockianus DNA polymerase I has been removed and replaced by the 7-kDa double-stranded DNA-binding protein Sso7d from Sulfolobus solfataricus (40). Oligonucleotide primers were synthesized by Operon (Huntsville, AL) or Integrated DNA Technologies (Coralville, IA). PCR was performed in 20 or 30 μl with sterile, nucleic acid-free water (MO BIO Laboratories, Carlsbad, CA), 1× Taq polymerase reaction buffer (10 mM Tris-HCl, 1.5 mM MgCl2, 5 mM KCl, pH 8.3 at 20°C), 200 μM each deoxynucleoside triphosphate, 0.75 U of polymerase, and primers at a concentration of 10 pmol/μl. PCR components were mixed on ice before placing them in a thermocycler preheated to 80°C. PCR samples were incubated at 95°C for 120 s; thermally cycled 30 times at 94°C for 5 s, 40 to 50°C for 40 s, and 72°C for 60 s; and finally incubated at 72°C for 600 s. Unless otherwise noted in the text and figures, an annealing temperature of 40°C was used. MJ Research (Waltham, MA) PTC-100, PTC-200, and Tetrad PTC-225 thermocyclers were used for thermal cycling.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

s-TBR (ไดนาโม ii; finnzymes เอ๋ย, โป, ฟินแลนด์) และ taq (โรช, อินเดีย) ​​polymerases ดีเอ็นเอถูกนำมาใช้เพื่อ pcr s-TBR เป็นโพลิเมอร์วิศวกรรมที่ n-ขั้ว 5'-3 'exonuclease โดเมนของ thermus brockianus dna โพลิเมอร์ที่ฉันได้ถูกลบออกไปและแทนที่ด้วยเกลียวคู่ดีเอ็นเอมัด sso7d โปรตีน 7-kda จาก Sulfolobus solfataricus (40)ไพรเมอร์ oligonucleotide ถูกสังเคราะห์โดย operon (ฮันอัล) หรือเทคโนโลยีดีเอ็นเอแบบบูรณาการ (คอรัลวิลล์) pcr ได้ดำเนินการใน 20 หรือ 30 ไมโครลิตรที่มีการฆ่าเชื้อน้ำกรดนิวคลีอิก (ห้องปฏิบัติการโมไบโอเชียนไซด์), 1 ×บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาโพลิเมอร์ taq (10 มิลลิเมตร tris-hcl 1.5 มม. MgCl2, 5 มม. kcl, ph 8.3 ที่ 20 ° C), 200 ไมโครเมตรแต่ละ triphosphate deoxynucleoside 0.75 u ของโพลิเมอร์และไพรเมอร์ที่มีความเข้มข้นจาก 10 pmol / ไมโครลิตร ส่วนประกอบ pcr ผสมบนน้ำแข็งก่อนที่จะวางไว้ใน thermocycler อุ่นถึง 80 องศาเซลเซียส pcr ตัวอย่างที่ถูกบ่มที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 120 วินาที; ความร้อนกรณื 30 ครั้งที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วินาที, 40 ถึง 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 วินาที, และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 วินาที; และบ่มจนได้ที่ 72 องศาเซลเซียส 600 s ยกเว้นที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่นในข้อความและตัวเลขอุณหภูมิการหลอมจาก 40 องศาเซลเซียสถูกนำมาใช้MJ วิจัย (เคมบริดจ์) PTC-100, PTC-200 และ tetrad PTC-225 thermocyclers ถูกนำมาใช้สำหรับการขี่จักรยานร้อน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

S-Tbr (ไดนาโม II Finnzymes Oy, Espoo ฟินแลนด์) และดีเอ็นเอ Taq (Roche อินเดียนา IN) polymerases ใช้สำหรับ PCR S Tbr เป็นพอลิเมอเรสการออกแบบที่โดเมน exonuclease 5′-3′ N-เทอร์มินัลของ Thermus brockianus ดีเอ็นเอพอลิเมอเรสฉันได้ถูกเอาออก และแทนที่ ด้วย 7-kDa คู่-stranded DNA รวมโปรตีน Sso7d จาก Sulfolobus solfataricus (40) มีสังเคราะห์ oligonucleotide ไพรเมอร์ โดย Operon (ฮันต์สวิลล์ AL) หรือดีเอ็นเอเทคโนโลยี (Coralville, IA) ทำ PCR ใน 20 หรือ 30 μl ปราศจากกรดนิวคลีอิก กระบอกน้ำ (ห้องปฏิบัติการชีวภาพ MO คาร์ลส CA), การ 1 บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาพอลิเมอเรส Taq × (10 mM ตรี-HCl, 1.5 มม. MgCl2, 5 mM KCl, pH 8.3 ที่ 20° C) 200 μM deoxynucleoside โนซีนไตร ฟอสเฟต 0.75 U ของพอลิเมอเรส และไพรเมอร์ที่มีความเข้มข้นของ 10 pmol μl ส่วน PCR ได้ผสมในน้ำแข็งก่อนวางใน thermocycler preheated ถึง 80 องศาเซลเซียส ตัวอย่างของ PCR ได้ incubated ที่ 95° C สำหรับ 120 s แพล้ม 30 ครั้งที่ 94° C สำหรับ 5 s, 40-50° C สำหรับ 40 s และ 72° C 60 s และสุดท้าย incubated ที่ 72° C สำหรับ 600 s. เว้นแต่จะระบุเป็น ข้อความและตัวเลข 40° C อุณหภูมิการหลอมใช้ PTC MJ วิจัย (Waltham, MA) -100, PTC 200 และ Tetrad PTC-225 thermocyclers ถูกใช้สำหรับการขี่จักรยานความร้อน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอ polymerases S - TBR (ไดนาโม II finnzymes OY Espoo คือบริการล่าสุดของฟินแลนด์)และ taq ( Roche อินเดียแนโพลิส)ได้ถูกใช้สำหรับ pcr. S - TBR เป็นการออกแบบ polymerase ที่ N - อาคารโดยสาร 5 - 3 '' exonuclease โดเมนของดีเอ็นเอ thermus brockianus polymerase ผมได้ถูกถอดออกแล้วและถูกแทนที่ด้วย 7 - kda ดับเบิลคลิกที่สายตีเกลียวดีเอ็นเอ - มีผลผูกพันโปรตีน SSO 7 d จาก sulfolobus solfataricus ( 40 )primers oligonucleotide สังเคราะห์ความถี่ได้โดย operon ( Huntsville , AL )หรือดีเอ็นเอแบบอินทิเกรตเทคโนโลยี( coralville Ia ) pcr ได้ดำเนินการใน 20 หรือ 30 μl ฆ่าเชื้อขวดนมด้วย,อยู่กรด - แบบไม่เสียค่าบริการน้ำ(หมอ BIO Laboratories , Carlsbad , CA ), 1 × taq polymerase ปฏิกริยา Buffer ( 10 มม.ผลิตไฟฟ้าราชบุรีโฮลดิ้งจำกัด - HCL , 1.5 มม. mgcl2 , 5 มม. kcl , pH 8.3 ที่ 20 ° C ), 200 μ m แต่ละ deoxynucleoside triphosphate , 0.75 U ของ polymerase ,และ primers ที่ความเข้มข้นที่ 10 pmol / μl. คอมโพเนนต์ pcr มาบนน้ำแข็งก่อนที่จะอุ่นไว้ thermocycler ที่ไปที่ 80 ° C pcr ตัวอย่างเป็น incubated ที่ 95 ° C สำหรับ 120 s ;ระบบระบายอากาศหมุนเวียน 30 ครั้งที่ 94 ° C สำหรับ 5 S , 40 ถึง 50 ° C 40 S และ 72 ° C 60 s ;และสุดท้าย incubated ที่ 72 ° C สำหรับ 600 S . เว้นแต่ระบุไว้เป็นอย่างอื่นในข้อความและตัวเลข อุณหภูมิ annealing ที่ 40 ° C ได้ถูกใช้MJ การวิจัย( Waltham mA ) PTC PTC Model XT - 200 - 100 และ tetrad PTC -225 thermocyclers ถูกใช้สำหรับการขี่จักรยานระบายความร้อน.