2.7. Characteristic of purified chi

2.7. Characteristic of purified chitinase
The molecular mass of the enzyme was determined. Electrophoresis
under denaturing conditions (SDS PAGE) was performed
in 12% polyacrylamide gel according to the procedure described
by Laemmli (1970) in Tris-Glycine buffer, pH 8.3. The protein
bands were visualized using Coomassie Brilliant Blue R-250. The
molecular mass of the enzyme was estimated by SDS-PAGE. The
following molecular weight standards were used: phosphorylase
b (97 kDa), bovine serum albumin (66 kDa), ovalbumin (45 kDa),
carbonic anhydrase (31 kDa), soybean trypsin inhibitor (21 kDa),
and lysozyme (14 kDa). The optimum temperature activity of
chitinase was determined between 40 and 60
C. The optimum
pH was determined in a range of 4.0e8.0. The buffer systems
were the following: 50 mM acetate buffer for the pH 4e5 and
50 mM sodium phosphate buffer for the pH range of 6e8. The
effects of various chemicals on enzyme activity was determined
following pre-incubation of the purified chitinase for 30 min at
4
C in the presence of divalent metal ions (Mg, Ca, Hg, Zn, Mn,
Cd, Pb) and SDS, urea. Final concentrations of the chemicals were
1 mM. Afterward the substrate was added and the residual
activity was tested. Antifungal activity of chitinase was also
estimated using growth inhibition assay described earlier by
Wang et al. (2002). The chitinase was tested for inhibitory activity
against the growth of phytopathogenic strains: Alternaria alternata,
Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Fusarium culmorum,
Botrytis cinerea. The fungi came from the Bank of Plant Pathogens
in Poznan.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7. ลักษณะของ chitinase บริสุทธิ์
กำหนดมวลโมเลกุลของเอนไซม์นี้ Electrophoresis
ภายใต้เงื่อนไข denaturing ดำเนิน (SDS หน้า)
ในเจล polyacrylamide 12% ตามขั้นตอนที่อธิบายไว้
โดย Laemmli (1970) ในบัฟเฟอร์ทริสเรทติ้ง Glycine, pH 8.3 โปรตีน
วงมี visualized ใช้ Coomassie Brilliant Blue R-250 ใน
มวลโมเลกุลของเอนไซม์ถูกประเมิน โดย SDS-หน้า ใน
ใช้มาตรฐานน้ำหนักโมเลกุลต่อไปนี้: phosphorylase
b (97 kDa), วัว serum albumin (66 kDa) ovalbumin (45 kDa),
carbonic anhydrase (31 kDa) ถั่วเหลืองสารยับยั้งทริปซิน (21 kDa),
และ lysozyme (14 kDa) กิจกรรมที่เหมาะสมอุณหภูมิของ
chitinase กำหนดระหว่าง 40 และ 60 c มีประสิทธิภาพสูงสุด
pH ที่ถูกกำหนดในช่วง 4.0e8.0 ระบบบัฟเฟอร์
ได้ต่อไปนี้: บัฟเฟอร์ acetate 50 มม.สำหรับ 4e5 ค่า pH และ
50 mM โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์สำหรับช่วงค่า pH ที่ 6e8 ใน
กำหนดผลกระทบของสารเคมีต่าง ๆ เอนไซม์
ต่อก่อนบ่มของ chitinase บริสุทธิ์ใน 30 นาทีที่
4 C ในต่อหน้าของประจุ divalent โลหะ (Mg, Ca, Hg, Zn, Mn,
Cd, Pb) และ SDS ยูเรีย สุดท้ายความเข้มข้นของสารเคมีถูก
1 mM หลังจากนั้นมีเพิ่มพื้นผิวการ และส่วนที่เหลือจากการ
กิจกรรมทดสอบ กิจกรรมต้านเชื้อราของ chitinase ชยัง
ประเมินวิเคราะห์การยับยั้งการเจริญเติบโตที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดยใช้
วัง et al. (2002) Chitinase ถูกทดสอบในกิจกรรมลิปกลอสไข
กับการเติบโตของสายพันธุ์ phytopathogenic: Alternaria alternata,
Fusarium oxysporum, Fusarium solani Fusarium culmorum,
Botrytis cinerea เชื้อรามาจากธนาคารของพืชโรค
ในพอซนาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 ลักษณะของไคติเนสบริสุทธิ์
มวลโมเลกุลของเอนไซม์ที่ถูกกำหนด อิ
ภายใต้สภาวะ (SDS PAGE) ได้ดำเนินการ
ในเจล polyacrylamide 12% เป็นไปตามขั้นตอนที่อธิบาย
โดย Laemmli (1970) ในบัฟเฟอร์ Tris-Glycine, pH 8.3 โปรตีน
วงถูกมองเห็นโดยใช้สีฟ้าสดใส Coomassie R-250
มวลโมเลกุลของเอนไซม์เป็นที่คาดกันโดย SDS-PAGE
มาตรฐานน้ำหนักโมเลกุลต่อไปนี้ถูกนำมาใช้: โฟ
b (97 กิโลดาลตัน), ซีรั่มอัลบูมิวัว (66 กิโลดาลตัน), ovalbumin (45 กิโลดาลตัน),
คาร์บอ anhydrase (31 กิโลดาลตัน) ถั่วเหลือง trypsin ยับยั้ง (21 กิโลดาลตัน)
และไลโซไซม์ (14 กิโลดาลตัน) . กิจกรรมอุณหภูมิที่เหมาะสมของ
ไคติเนสถูกกำหนดระหว่าง 40 และ 60? C. เหมาะสม
ถูกกำหนดค่า pH อยู่ในช่วงของ 4.0e8.0 ระบบบัฟเฟอร์
ถูกต่อไปนี้: 50 มิลลิบัฟเฟอร์น้ำนมเพื่อ 4e5 pH และ
50 มิลลิโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์สำหรับช่วงพีเอชของ 6E8
ผลกระทบของสารเคมีต่างๆในกิจกรรมของเอนไซม์ถูกกำหนด
ดังต่อไปนี้ก่อนการบ่มของไคติเนสบริสุทธิ์เป็นเวลา 30 นาทีที่
4 องศาเซลเซียสในการปรากฏตัวของไอออนประจุโลหะ (Mg, Ca, ปรอท, สังกะสี, แมงกานีส,
แคดเมียมตะกั่ว) และ SDS, สารยุรีอะ ความเข้มข้นสุดท้ายของสารเคมีที่เป็น
1 มิลลิ หลังจากนั้นพื้นผิวถูกเพิ่มเข้ามาและที่เหลือ
กิจกรรมการทดสอบ กิจกรรมต้านเชื้อราของไคติเนสยังได้รับการ
คำนวณโดยใช้วิธีทดสอบการยับยั้งการเจริญเติบโตที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดย
วังเอตอัล (2002) ไคติเนสที่ได้รับการทดสอบการยับยั้ง
การเจริญเติบโตของกับสายพันธุ์โรคพืช: Alternaria alternata,
Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Fusarium culmorum,
Botrytis cinerea เชื้อรามาจากธนาคารของเชื้อสาเหตุโรคพืช
ในพอซนัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . ลักษณะของยีนไคติเนส
มวลโมเลกุลของเอนไซม์ ตั้งใจให้บริสุทธิ์ อิเล็กโตรโฟรีซิส
ภายใต้เงื่อนไข ( SDS ี่หน้า ) กำหนด
12 % โพลีอะคริลาไมด์เจลตามขั้นตอนที่อธิบาย
โดย laemmli ( 1970 ) ในบริษัทที่มีบัฟเฟอร์ pH 8.3 โปรตีน
รัดมองเห็นใช้เหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าสดใส
มวล โมเลกุลของเอนไซม์ ( เอนไซม์ .
ตามมาตรฐานน้ำหนัก โมเลกุลที่ใช้ : ฟอ ฟรีเลส
b ( 97 ) ) อัลบูมิน ( 66 kDa ) , โอวัลบูมิน ( 45 kDa ) ,
ฉะนี้แล ( 31 kDa ) , ถั่วเหลืองเอนไซม์ inhibitor ( 21 kDa ) และ ไลโซไซม์ ( 14 )
) กิจกรรมของเอนไซม์สูงสุดที่อุณหภูมิ
ตัดสินใจระหว่าง 40 และ 60
เหมาะสม
Cอ มุ่งมั่น ในช่วง 4.0e8.0 . ระบบบัฟเฟอร์
เป็นดังต่อไปนี้ : 50 mm อาซีเตตบัฟเฟอร์สำหรับ pH 4e5
50 มม. และฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH ในช่วง 6e8 สำหรับ .
ผลของสารเคมีต่าง ๆในกิจกรรมของเอนไซม์ถูกกำหนด
ต่อไปนี้ก่อนบ่มเอนไซม์เป็นเวลา 30 นาทีที่บริสุทธิ์

4 C ในการปรากฏตัวของไอออนโลหะขนาด ( Mg , Ca , HG , Zn , Mn ,
ซีดี , PB ) และ SDS , ยูเรียความเข้มข้นสุดท้ายของสารเคมี )
1 มิลลิเมตร หลังจากนั้น พื้นผิว และเพิ่มกิจกรรมที่เหลือ
ถูกทดสอบ ฤทธิ์ต้านราของไคก็
วิธียับยั้งการเจริญเติบโต ( ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ โดย
Wang et al . ( 2002 ) เอนไซม์ไคติเนสพบว่ากิจกรรม
ต่อต้านการเจริญเติบโตของเชื้อโรค alternata phytopathogenic :
, Fusarium oxysporum , Fusarium solani ,culmorum
Fusarium , Botrytis cinerea . เชื้อรามาจากธนาคารของเชื้อโรคพืช
ในพอซนัน .