At the 120th day of life animals we

At the 120th day of life animals were deeply anesthetized with urethane and perfused through The heart with: (1) 25 ml of Mil-lonig 's buffer: (2) 50 ml of sodium sulfide fix 0.1% in Millonig's buffer: (3) 100ml of glutaraldehyde 3% and (4) 200 ml of sodium sulfide fix 0.1 in Millonig's buffer.Their brains were removed from the skull and cryoprotected in 15% sucrose overnight. Brains were rapidly frozen in liquid nitrogen and stored at -70˚ C. Vibratome (Series 1000-Techmical Products International) coronal sections 50 μm thick were processed for neo-Timm staining [4]. The inten-sity of sprouting in the supragranular layer was evaluated by relative optical densitometry using the software IMAGE TOOL (Image Tool software. Evans Technology. Inc.).
Biochemical measurements of K+ induced glutamate release were accessed in the hippocampus of both WN and UN groups. Animals were decapitated and their brains were quickly removed and immersed in ice-cold Krebs-HEPES buffer solution (KRH) with the following composition (in millimolar): 133 Nacl, 4.8 KCI, 1.2 KH2PO4, 1.2 Mgso4, 1.5 cacl2, 11.1 glucose, 10 HEPES. oxygenated with 95% o2 to pH 7.4 . The hippocampus was removed and cross-chopped using a tissue chopper (Mcllwain Tis- sue chopper. Brinkman Instruments. England) to produce slices of 350 x 350pm. One sample was saved for posterior measure- ments of protein content (detailed in the last paragraph) The slices were then washed 3 times in ice-cold KRH and transferred to polypropylene tubes. After discarding the supernatant, the slices were suspended in 1.0ml fresh oxygenated KRH and incubated for 10 min at 37 C .This procedure was repeated until a stable base- line was obtained. Immediately following this second incubation. the slices were suspended (1.0ml KRH) and incubated for at 37 ˚c in the absence (basal release) or presence of 40 mM KCI (evoked release) . In samples containing additional K+, an equimo- lar amount of Na+ was omitted from the buffer.Glutamate released into the incubation medium was determined using a glutamate dehydrogenase-coupled assay as described previously (Buggy et al 2000), Briefly. 200ul aliquots of sample were mixed with 50 ul NADP+ (final concentration: 1.0 mM) and 50 pl glutamate dehy- drogenase (final concentration: 30U) and made up to 1700 ul with

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัน 120 ชีวิต สัตว์อย่างลึกซึ้งด้วย ด้วยยูรีเทน และ perfused ผ่านหัวใจมี: (1) 25 ml บัฟเฟอร์ Mil-lonig: (2) 50 ml ของโซเดียมซัลไฟด์แก้ไข 0.1% ในบัฟเฟอร์ของ Millonig: มล (3) 100% glutaraldehyde 3 และ (4) 200 มลของโซเดียมซัลไฟด์แก้ไข 0.1 ในบัฟเฟอร์ของ Millonig สมองของพวกเขาถูกเอาออกจากกะโหลกศีรษะและ cryoprotected 15% ซูโครสในข้ามคืน สมองอย่างรวดเร็วถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว และเก็บไว้ที่ - 70˚ C. Vibratome (นานาชาติผลิตภัณฑ์ชุด 1000 Techmical) ส่วน coronal 50 μm หนาถูกประมวลผลสำหรับนีโอ-Timm ย้อมสี [4] การ inten-sity ของงอกในชั้น supragranular ถูกประเมิน โดย densitometry แสงสัมพัทธ์โดยใช้ซอฟต์แวร์เครื่องมือรูปภาพ (รูปเครื่องมือซอฟต์แวร์ อีวานส์เทคโนโลยี Inc.) วัดชีวเคมีของ K + เกิดปล่อย glutamate ถูกเข้าถึงในฮิพโพแคมปัสของกลุ่มดับเบิ้ลยูเอ็นและสหประชาชาติ สัตว์ถูก decapitated และสมองของพวกเขาอย่างรวดเร็วถูกเอาออก และแช่อยู่ในโซลูชันการบัฟเฟอร์เครบส์ HEPES ฉ่ำ (KRH) กับองค์ประกอบต่อไปนี้ (ใน millimolar): 133 Nacl, 4.8 KCI, 1.2 KH2PO4, 1.2 Mgso4, 1.5 cacl2, 11.1 กลูโคส 10 HEPES oxygenated มี 95% o2 กับ pH 7.4 ฮิพโพแคมปัสถูกเอาออกไป และข้ามสับใช้สับเนื้อเยื่อ (มอก. Mcllwain - ฟ้องสับ เครื่องมือ Brinkman อังกฤษ) ในการผลิตชิ้น 350 x 350 pm ตัวอย่างหนึ่งถูกบันทึกไว้สำหรับหลังวัด-ments โปรตีนเนื้อหา (รายละเอียดในย่อหน้าสุดท้าย) ชิ้นแล้วล้าง 3 ครั้งใน KRH ฉ่ำ และโอนย้ายไปยังท่อ polypropylene หลังจากละทิ้ง supernatant ชิ้นถูกหยุดชั่วคราวใน 1.0ml oxygenated KRH สด และ incubated สำหรับ 10 นาทีที่ 37 C ขั้นตอนนี้ถูกซ้ำจนกว่าจะได้รับบรรทัดฐานมั่นคง ต่อนี้ที่สองคณะทันตแพทยศาสตร์ ชิ้นถูกหยุดชั่วคราว (1.0 ml KRH) และ incubated สำหรับที่ 37 ˚ c ขาด (โรคปล่อย) หรือสถานะของ 40 มม. KCI (evoked ปล่อย) ในตัวอย่างที่ประกอบด้วยเพิ่มเติม K + equimo lar จำนวน Na + ถูกละเว้นจากบัฟเฟอร์ Glutamate ที่ปล่อยกลางคณะทันตแพทยศาสตร์ได้กำหนดใช้เป็น glutamate dehydrogenase ควบคู่วิเคราะห์อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (รถ et al 2000), โดยย่อ aliquots 200ul ของตัวอย่างถูกผสมกับ 50 ul NADP + (ความเข้มข้นสุดท้าย: 1.0 มม.) และ 50 pl glutamate dehy-drogenase (ความเข้มข้นสุดท้าย: 30U) และทำได้ถึง 1700 ul ด้วย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในวันที่ 120 ของสัตว์ที่มีชีวิตถูกอสัญญีอย่างลึกซึ้งกับยูรีเทนและ perfused ผ่านหัวใจที่มี (1) 25 มล. ของบัฟเฟอร์ Mil-lonig 's: (2) 50 มลซัลไฟด์โซเดียมแก้ไข 0.1% ในบัฟเฟอร์ Millonig ของ: (3) 100ml ของ glutaraldehyde 3% และ (4) 200 มล. ของซัลไฟด์โซเดียมแก้ไข 0.1 ในสมอง buffer.Their Millonig ถูกลบออกจากกะโหลกศีรษะและ cryoprotected ในชั่วข้ามคืน 15% น้ำตาลซูโครส สมองถูกแช่แข็งอย่างรวดเร็วในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่-70˚ซี Vibratome (ชุด 1000 Techmical สินค้านานาชาติ) ส่วนเวียนหนา 50 ไมครอนที่ถูกประมวลผลสำหรับการย้อมสีนีโอ Timm [4] Inten-Sity ของการแตกหน่อในชั้น supragranular ถูกประเมินโดย densitometry แสงญาติใช้เครื่องมือภาพซอฟแวร์ (ภาพซอฟแวร์เครื่องมือ. อีแวนส์เทคโนโลยี. อิงค์).
วัดทางชีวเคมีของ K + ปล่อยกลูตาเมตเหนี่ยวนำให้มีการเข้าถึงใน hippocampus ของทั้งสอง WN และสหประชาชาติ กลุ่ม สัตว์ที่ถูกหัวและสมองของพวกเขาถูกถอดออกได้อย่างรวดเร็วและแช่อยู่ในน้ำแข็งเย็น Krebs-HEPES สารละลายบัฟเฟอร์ (KRH) โดยมีองค์ประกอบดังต่อไปนี้ (ใน millimolar): 133 Nacl 4.8 KCI 1.2 KH2PO4 1.2 MgSO4 1.5 CaCl2 11.1 กลูโคส 10 HEPES ออกซิเจนกับ o2 95% ค่าพีเอช 7.4 ฮิบโปจะถูกลบออกและข้ามสับสับโดยใช้เนื้อเยื่อ (Mcllwain Tis- ฟ้องสับ. Brinkman เครื่องดนตรี. อังกฤษ) ในการผลิตชิ้น 350 x 350pm หนึ่งตัวอย่างที่ได้รับการบันทึกไว้สำหรับ ments วัดหลังของปริมาณโปรตีน (รายละเอียดในย่อหน้าสุดท้าย) ชิ้นถูกล้างแล้ว 3 ครั้งใน KRH เย็นและโอนไปยังท่อโพรพิลีน หลังจากที่ทิ้งใส, ชิ้นถูกระงับใน KRH ออกซิเจน 1.0ml สดและบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 37 C ขั้นตอนการนี้ซ้ำจนกว่าจะมีเส้น base- มั่นคงที่ได้รับ ทันทีหลังจากการบ่มที่สองนี้ ชิ้นถูกระงับ (1.0ml KRH) และบ่มเป็นเวลา 37 ซีในกรณีที่ไม่มี (ปลดฐาน) หรือการปรากฏตัวของ 40 มิลลิ KCI (ปลดปรากฏ) ในตัวอย่างที่มีเพิ่มเติม K + จำนวน LAR equimo- นา + ถูกตัดออกจาก buffer.Glutamate ปล่อยลงในกลางบ่มถูกกำหนดโดยใช้การทดสอบ dehydrogenase คู่กลูตาเมตตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Buggy et al, 2000) ในเวลาสั้น ๆ aliquots 200ul ของกลุ่มตัวอย่างได้รับการผสมกับ 50 ยู NADP + (ความเข้มข้นสุดท้าย: 1.0 มิลลิเมตร) และ 50 พีกลูตาเมต dehy- drogenase (ความเข้มข้นสุดท้าย: 30U) และทำให้ได้ถึง 1,700 ยูกับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในวันที่เศรษฐกิจสัตว์ชีวิตถูกดูดนำสลบด้วยยูรีเทน หนูผ่านหัวใจ ( 1 ) 25 ml มิล lonig ' บัฟเฟอร์ ( 2 ) 50 กรัมของโซเดียมซัลไฟด์แก้ไข 0.1% ใน millonig เป็นบัฟเฟอร์ ( 3 ) 100ml ของกลูตารัลดีไฮด์ 3 ) และ ( 4 ) 200 มล. ของโซเดียมซัลไฟด์ แก้ไขใน millonig 0.1 เท่า สมองของพวกเขาถูกเอาออกจากกะโหลกศีรษะและ cryoprotected น้ำตาลซูโครสร้อยละ 15 ในชั่วข้ามคืนสมองได้อย่างรวดเร็วแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวที่อุณหภูมิ - 70 องศาเซลเซียส และ˚ vibratome ( ชุด 1 , 000 ผลิตภัณฑ์ techmical นานาชาติ ) มีส่วน 50 μเมตรหนาถูกประมวลผลสำหรับ Neo timm staining [ 4 ] การ sity inten ของการแตกหน่อในชั้น supragranular ประเมินโดย densitometry แสงสัมพัทธ์โดยใช้ซอฟต์แวร์เครื่องมือเครื่องมือซอฟต์แวร์ภาพ ( ภาพ อีแวนส์ ) อิงค์ )
การวัดทางชีวเคมีของ K และผงชูรสปล่อยถูกเข้าถึงได้จากสมอง ทั้งรูปแบบ และกลุ่มสหประชาชาติ สัตว์ถูกตัดหัวและสมองของพวกเขาออกอย่างรวดเร็ว และแช่ในน้ำแข็งเย็นปูฮีเปสสารละลายบัฟเฟอร์ ( krh ) กับองค์ประกอบต่อไปนี้ ( ในพบว่า NaCl KCl ) : 133 , 4.8 , kh2po4 1.2 , 1.2 MgSO4 ใ , 1.5 , CaCl2 , 11.1 กลูโคส 10 ฮีเปส . ออกซิเจนกับ 95 % O2 pH 7.4 .ฮิปโปแคมปัสจะถูกลบออกและข้ามสับ ใช้ทิชชู่เฮลิคอปเตอร์ ( mcllwain มอก. - ซูเตอร์ บริคแมนเครื่องมือ อังกฤษ ) เพื่อผลิตชิ้น 350 x 350pm . ตัวอย่างหนึ่งคือบันทึกด้านหลังวัด ments ของโปรตีน ( รายละเอียดในย่อหน้าสุดท้าย ) ชิ้นแล้วล้าง 3 ครั้งใน krh น้ำแข็งเย็นและย้ายท่อ โพรพิลีน หลังจากนำทิ้ง ,ชิ้นถูกระงับใน 1.0ml สดออกซิเจน krh บ่มเป็นเวลา 10 นาที ที่ 37 องศาเซลเซียส ขั้นตอนนี้ซ้ำจนกว่าฐาน - มั่นคง สายที่ได้รับ ทันทีต่อ 1 วินาทีนี้ ชิ้นที่ถูกหยุดชั่วคราว ( 1.0ml krh ) และบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส ในการ˚ ( รุ่นพื้นฐาน ) หรือการแสดงตนของ 40 mM KCl ( evoked ปล่อย ) ในตัวอย่างประกอบด้วยเพิ่มเติม K ,การ equimo - lar จํานวนนาถูกละเว้นจากบัฟเฟอร์ ผงชูรสปล่อยเข้าไปในการบ่มโดยใช้ glutamate dehydrogenase ( 100 คู่ ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( รถ et al 2000 ) สั้น ๆ 200ul เฉยๆ ของ จำนวน ผสมกับ 50 UL nadp ( สุดท้ายเข้มข้น 1.0 มม. ) และ 50 PL ผงชูรส dehy - drogenase สุดท้าย ( ความเข้มข้น 30U ) และทำให้ถึง 1700 UL ด้วย