Molecular identification of the sel

Molecular identification of the selected isolates: Total genome DNA of each isolate was extracted from 5 ml overnight cultures grown in MRS broth at 30°C by CTAB (cetyltrimethylammonium bromide) method 16 with modifications. Purified DNA was diluted to 100 ng/µl for following test. The isolated strains were identified by 16S rRNA sequencing and phylogenetic analysis. For each strain, specific region of 16S rRNA was amplified using the genomic DNA as a template, and primers 27f (5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’) and 1495R (‘5- CTACGGCTACCTTGTTACGA-3’) 17. PCR amplifying procedure was as follows: 5 min at 94°C, 30 cycles of 1 min at 94°C, 1 min at 58°C, 2 min at 72°C and then 10 min at 72°C. It was carried out on the automatic thermal cycler (MJ Research PTC-200). The purified PCR products were sequenced by Shanghai Sangni Biosciences Corporation of China (Shanghai, China). The sequence of all phylotypes was further used to construct the phylogenetic tree. The obtained sequences of all phylotypes in this study were deposited in the GenBank database.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บัตรประจำตัวของโมเลกุลของเชื้อที่เลือก: dna จีโนมรวมของแต่ละแยกถูกสกัดจาก 5 ml วัฒนธรรมค้างคืนที่ปลูกในน้ำซุป mrs ที่ 30 องศาเซลเซียสโดย ctab (cetyltrimethylammonium โบรไมด์) วิธีที่ 16 มีการปรับเปลี่ยน dna บริสุทธิ์ถูกเจือจางถึง 100 นาโนกรัม / ไมโครลิตรสำหรับการทดสอบต่อไปนี้ สายพันธุ์ที่แยกได้ระบุ 16s rRNA ลำดับและการวิเคราะห์สายวิวัฒนาการ สำหรับแต่ละสายพันธุ์ภูมิภาคท​​ี่เฉพาะเจาะจงของ rrna 16s ถูกขยายโดยใช้ดีเอ็นเอจีโนมเป็นแม่แบบและไพรเมอร์ 27f (5'-agagtttgatcctggctcag-3 ') และ 1495r ('5 - ctacggctaccttgttacga-3') 17 pcr ขยายขั้นตอนมีดังนี้: 5 นาทีที่ 94 ° C, 30 รอบ 1 นาทีที่ 94 ° C, 1 นาทีที่ 58 ° C, 2 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียสแล้ว 10 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียส จะได้รับการดำเนินการใน Cycler ความร้อนอัตโนมัติ (MJ วิจัย PTC-200)ผลิตภัณฑ์ pcr บริสุทธิ์มีลำดับขั้นตอนโดยเซี่ยงไฮ้ sangni บริษัท ชีววิทยาศาสตร์ของจีน (เซี่ยงไฮ้) ลำดับของ phylotypes ทั้งหมดที่ถูกนำมาใช้ต่อไปในการสร้างต้นไม้สายวิวัฒนาการ ลำดับที่ได้รับของ phylotypes ทั้งหมดในการศึกษาครั้งนี้มีเงินในฐานข้อมูล genbank.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รหัสโมเลกุลของ isolates เลือก: จีโนมรวมดีเอ็นเอของแต่ละ isolate มีสกัดจาก 5 ml ค้างคืนวัฒนธรรมปลูกในซุป MRS ที่ 30° C โดย CTAB (cetyltrimethylammonium โบรไมด์) วิธี 16 พร้อมปรับเปลี่ยน ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ที่ผสมกับ ng 100 µl สำหรับการทดสอบต่อไปนี้ สายพันธุ์ที่แยกได้ระบุลำดับ 16S rRNA และวิเคราะห์ phylogenetic สำหรับแต่ละต้องใช้ เฉพาะภูมิภาคของ 16S rRNA ถูกขยายโดยใช้ดีเอ็นเอ genomic เท็ม และไพรเมอร์ 27f (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3') และ 1495R ('5-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3') 17 มือกระบวนการ PCR มีดังนี้: 5 นาทีที่ 94° C, 30 รอบ 1 นาทีที่ 94° C, 1 นาทีที่ 58° C, 2 นาทีที่ 72° C และจากนั้น 10 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียส จะถูกดำเนินบน cycler ความร้อนอัตโนมัติ (MJ วิจัย PTC-200) ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์ถูกเรียงลำดับตาม บริษัทเวลาออก Sangni เซี่ยงไฮ้ของจีน (เซี่ยงไฮ้ จีน) เพิ่มเติมลำดับของ phylotypes ทั้งหมดถูกใช้สร้างแผนภูมิ phylogenetic ลำดับที่ได้รับของ phylotypes ทั้งหมดในการศึกษานี้ได้ฝากต่อ GenBank

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การระบุตัวตนระดับโมเลกุลของดีเอ็นเอที่เลือกที่แยกยีนทั้งหมดของแต่ละรายแยกเป็นถูกแยกออกมาจาก 5 วัฒนธรรมพักค้างคืนมล.ปลูกในน้ำซุปนางที่ 30 ° C โดย ctab (สำหรับอัดรูปถ่าย cetyltrimethylammonium )เป็นวิธีการ 16 ด้วยการแก้ไข ที่กรองแล้วไว้เป็นดีเอ็นเอเจือจางในการทดสอบ 100 NG /μ L สำหรับรายการต่อไปนี้: พันธุ์แยกกันได้รับการระบุว่าจากการวิเคราะห์ 16 S rrna จัดลำดับและ phylogenetic สำหรับแต่ละความเมื่อยล้าพื้นที่เฉพาะ 16 rrna s เป็นแอมพลิฟายโดยใช้ดีเอ็นเอ genomic ที่เป็นเทมเพลตและ primers 27 F ( 5 ' - agagtttgatcctggctcag - 3 ')และ 1495 R (' 5 - 3 ' ctacggctaccttgttacga ) 17 วิธีการขยายเสียง ได้ใน pcr มีลักษณะเป็นดังต่อไปนี้: 5 นาทีที่ 94 ° C 30 รอบใน 1 นาทีที่ 94 ° C 1 นาทีที่ 58 ° C 2 นาทีที่ 72 ° C และ 10 นาทีที่ 72 ° C มันเป็นการกระทำที่อัตโนมัติระบายความร้อน cycler ( MJ การวิจัย PTC - 200 )ผลิตภัณฑ์ pcr บริสุทธิ์เป็นอักษรเรียงลำดับ\โดย Shanghai Corporation sangni ชีวศาสตร์ของจีน(เมืองเซี่ยงไฮ้ประเทศจีน) ลำดับที่ของ phylotypes ทั้งหมดได้ถูกใช้เพื่อสร้างทรี phylogenetic ที่เพิ่มเติม ซีเควนซ์ของได้รับของ phylotypes ทั้งหมดในการศึกษานี้ได้เลี้ยงดูไว้ในฐานข้อมูล.
ได้