2. Materials and methods2.1. Microb

2. Materials and methods
2.1. Microbial cultures
The recall-associatedM. circinelloides strain isolated fromspoiled yogurt
and two clinical isolates were generously provided by the Joseph
Heitman at Duke University (Durham, NC). M. circinelloides strains
NRRL 3615, 3614, and 3627were obtained fromUSDA's Agricultural Research
Service collection (Table 1). All isolates were maintained as frozen
stock cultures and plated on Potato Dextrose Agar (Becton,Dickinson and Co., Franklin Lakes, NJ) acidified to pH 3.5 prior to use
in experiments. Inoculum was prepared by scraping plates which had
been incubated at 25 °C for 48 h and re-suspending the hyphae/
sporangiospores in peptone water (Becton, Dickinson and Co., Franklin
Lakes, NJ) or skim milk, depending on the experiment.
Yeast-like cells used to generate thermal destruction data were prepared
by streaking M. circinelloides onto acidified PDA. Plates were incubated
at 25 °C for at least 48 h in a GasPack anaerobic jar (Becton,
Dickinson and Co., Franklin Lakes, NJ). Typical colony and cellular morphology
was observed following incubation. Following extraction from
GasPack anaerobic jars, yeast-like cells were immediately used for thermal
destruction experiments.
2.2. Inoculation of yogurt cups
The time required for various M. circinelloides isolates to produce
sufficient CO2 to visibly spoil yogurt cups was determined by inoculating
single serving yogurt cups (purchased from a commercial retailer,
Geneva, NY) with 104 CFU/g yogurt of sporangiospores from a given
M. circinelloides isolate. Adhesive rubber septa (Thermo Fisher Scientific
Inc., Indianapolis, IN)were fixed to the foil top and inoculumwas delivered
via a sterile needle. Cupswere incubated at 25 °C until CO2 production
was visibly detectable.
2.3. Hyphal phase product inoculation
In all experiments reporting hyphal phase growth, commercially
available yogurt was purchased from a retailer (Geneva, NY) in
850.5 g (32 oz) units and 30 g of yogurt was transferred to individual
stomacher bags. Yogurt was inoculated with M. circinelloides (approximately
104 CFU/g yogurt), homogenized, and transferred by weight
into sterile stomacher bags. Yogurt samples were stored aerobically at
designated storage temperatures (4 °C, 15 °C, and 25 °C) for the growth
study. All data comparing growth rates of various M. circinelloides isolates
(Fig. 1) were collected from yogurt incubated at 25 °C.
2.4. Yeast phase product inoculation
Yeast-like growth was induced by inoculation of hypha/spore suspension
into sealed yogurt packages which contained headspace compositions
sufficient to induce a morphological switch as described in
Section 2.2. These conditions most closely mimicked actual product
conditions and allowed for the quantification of headspace compositional
changes in the challenge study. For challenge studies, inoculum
was added to skim milk containing lactic acid bacteria (LAB). This was
then transferred to retortable pouches (Amcor Limited, Hawthorne,
Victoria, Australia) and heat-sealed. Bags were incubated at 42 °C for

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. จุลินทรีย์วัฒนธรรมAssociatedM เรียกคืน โยเกิร์ต fromspoiled แยกสายพันธุ์ circinelloidesและสองทางคลินิกแยกกว้างได้โดยการHeitman ที่มหาวิทยาลัยดุ๊ก (Durham, NC) สายพันธุ์ circinelloides ม.NRRL 3615, 3614 วิจัยทางการเกษตรของ fromUSDA และ 3627wereรวบรวมบริการ (ตารางที่ 1) แยกทั้งหมดถูกเก็บรักษาไว้เป็นแช่แข็งวัฒนธรรม และชุบบนมันฝรั่งเดกซ์โทรสวุ้น (Becton ดิกคินสัน และ บริษัท ทะเลสาบแฟรงคลิน NJ) กรดกับค่า pH 3.5 ก่อนที่จะใช้ในการทดลอง ถูกเตรียม inoculum แผ่นขูดซึ่งมีได้รับการกกที่ 25 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมงและการระงับ hyphae เทียบsporangiospores น้ำ peptone (Becton ดิกคินสัน และ บริษัท แฟรงคลินทะเลสาบ NJ) หรือ นมพร่องมันเนย ขึ้นอยู่กับการทดลองใช้ในการสร้างข้อมูลความร้อนทำลายเซลล์ยีสต์เหมือนวจัดโดยหลาก M. circinelloides ลงบน PDA กรด แผ่นได้รับการกกที่ 25 ° C สำหรับโหล GasPack ไม่ใช้ออกซิเจน (Becton อย่างน้อย 48 ชั่วโมงดิกคินสันและบริษัท ทะเลสาบแฟรงคลิน NJ) ปกติอาณานิคมและสัณฐานวิทยาของเซลล์ก็สังเกตเห็นต่อไปนี้การกกไข่ ต่อไปนี้สกัดจากGasPack ขวดไม่ใช้ออกซิเจน เซลล์ยีสต์เหมือนทันทีใช้สำหรับระบายความร้อนการทดลองทำลาย2.2. กักบริเวณถ้วยโยเกิร์ตเวลาต้องใช้ต่าง ๆ M. circinelloides ที่แยกได้ในการผลิตCO2 เพียงพออย่างเห็นได้ชัดเสียถ้วยโยเกิร์ตดโดย inoculatingถ้วยโยเกิร์ตให้บริการเดียว (ซื้อจากผู้ค้าปลีกเพื่อการพาณิชย์เจนีวา NY) กับ 104 CFU/g โยเกิร์ตของ sporangiospores จากการกำหนดม. circinelloides แยก กาวยางผนัง (เทอร์โม Fisher วิทยาศาสตร์อิงค์ อินเดียนาโพลิส IN) ได้รับการแก้ไขไปยังด้านบนของฟอยล์และ inoculumwas ส่งผ่านเข็มปลอดเชื้อ Cupswere รับการกกที่ 25 ° C จนถึงการผลิต CO2ถูกตรวจจับได้อย่างเห็นได้ชัด2.3. ขั้นตอนที่ hyphal ผลิตภัณฑ์กักบริเวณในการทดลองทั้งหมดรายงาน hyphal ระยะเจริญเติบโต จำหน่ายโยเกิร์ตที่มีซื้อจากผู้ค้าปลีก (เจนีวา NY) ในหน่วย 850.5 (32 กรัม) และ 30 กรัมโยเกิร์ตถูกถ่ายโอนให้กับบุคคลกระเป๋าแผงประดับหน้าอก โยเกิร์ตคือ inoculated กับ circinelloides เมตร (โดยประมาณ104 CFU/g โยเกิร์ต), homogenized และโอนย้าย โดยน้ำหนักเข้ากระเป๋าแผงประดับหน้าอกเป็นหมัน ตัวอย่างโยเกิร์ตถูกเก็บไว้ที่ aerobicallyกำหนดอุณหภูมิการจัดเก็บ (4 ° C, 15 ° C และ 25 ° C) สำหรับการเจริญเติบโตการศึกษา แยกข้อมูลเปรียบเทียบการเจริญเติบโตราคาของต่าง ๆ M. circinelloides(รูปที่ 1) เก็บรวบรวมจากโยเกิร์ตรับการกกที่ 25 องศาเซลเซียส2.4. ยีสต์ระยะผลิตภัณฑ์กักบริเวณเจริญเติบโตของยีสต์เหมือนถูกเหนี่ยวนำ โดยกักบริเวณของกันกระเทือน hypha/สปอร์เป็นแพคเกจโยเกิร์ตปิดผนึกที่ประกอบด้วยองค์ประกอบเหมือนเพียงพอที่จะก่อให้เกิดสวิตช์สัณฐานตามที่อธิบายไว้ในการสังเกต เงื่อนไขเหล่านี้เลียนแบบผลิตภัณฑ์จริงอย่างใกล้ชิดมากที่สุดเงื่อนไข และการอนุญาตให้ใช้สำหรับนับจำนวนเหมือน compositionalการเปลี่ยนแปลงในการศึกษาความท้าทาย ศึกษาความท้าทาย inoculumถูกนมพร่องมันเนยที่มีแบคทีเรียกรดแลคติก (LAB) นี้โอนไป retortable ถุง (แอมคอร์ จำกัด ทุนวิคตอเรีย ออสเตรเลีย) และ heat-sealed กระเป๋าได้รับการกกที่ 42 ° C สำหรับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัฒนธรรมจุลินทรีย์
จำ-associatedM โยเกิร์ตสายพันธุ์ circinelloides fromspoiled แยก
และสองสายพันธุ์ทางคลินิกได้ให้เห็นแก่ตัวโดยโจเซฟ
Heitman ที่มหาวิทยาลัยดุ๊ก (Durham, NC) เอ็ม circinelloides สายพันธุ์
NRRL 3615, 3614 และได้รับ 3627were วิจัยการเกษตร fromUSDA ของ
คอลเลกชันบริการ (ตารางที่ 1) ไอโซเลททั้งหมดถูกแช่แข็งยังคงเป็น
วัฒนธรรมที่สต็อกและชุบมันฝรั่ง Dextrose Agar (Becton ดิกคินสันและ Co. , แฟรงคลินทะเลสาบ, นิวเจอร์ซีย์) กรดค่าพีเอช 3.5 ก่อนที่จะใช้
ในการทดลอง หัวเชื้อถูกจัดทำขึ้นโดยการขูดแผ่นซึ่งได้
รับการบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงและอีกครั้งระงับเส้นใยที่ /
ปอร์ในน้ำเปปโตน (Becton ดิกคินสันและ Co. , แฟรงคลิน
ทะเลสาบ, นิวเจอร์ซีย์) หรือนมพร่องมันเนยขึ้นอยู่กับการทดลอง
เซลล์ยีสต์เช่นใช้ในการสร้างการทำลายข้อมูลการระบายความร้อนได้จัดทำ
โดยพุ่ง circinelloides เมตรบน PDA กรด แผ่นถูกบ่ม
ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลาอย่างน้อย 48 ชั่วโมงในขวด GasPack แบบไม่ใช้ออกซิเจน (Becton,
ดิกคินสันและ Co. , แฟรงคลินทะเลสาบ, นิวเจอร์ซีย์) อาณานิคมทั่วไปและสัณฐานวิทยาโทรศัพท์มือถือ
พบว่าการบ่มต่อไปนี้ ต่อไปนี้การสกัดจาก
GasPack ขวดแบบไม่ใช้ออกซิเจนเซลล์ยีสต์เหมือนถูกนำมาใช้ทันทีสำหรับความร้อน
การทดลองการทำลาย.
2.2 การฉีดวัคซีนของถ้วยโยเกิร์ต
เวลาที่จำเป็นสำหรับการ circinelloides เอ็มต่างๆที่แยกได้ในการผลิต
CO2 เพียงพอที่จะเห็นได้ชัดเสียถ้วยโยเกิร์ตถูกกำหนดโดยการฉีดวัคซีน
เดียวที่ให้บริการถ้วยโยเกิร์ต (ที่ซื้อมาจากร้านค้าปลีกในเชิงพาณิชย์,
เจนีวา, NY) 104 โคโลนี / กรัมโยเกิร์ตของปอร์จาก ให้
เอ็ม circinelloides แยก SEPTA ยางกาว (Thermo Fisher Scientific
อิงค์อินเดียแนโพลิ) ได้รับการแก้ไขไปด้านบนฟอยล์และ inoculumwas ส่ง
ผ่านทางเข็มผ่านการฆ่าเชื้อ Cupswere บ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสจนผลิต CO2
เป็นที่ตรวจพบอย่างเห็นได้ชัด.
2.3 เส้นใยฉีดวัคซีนสินค้าขั้นตอน
ในการทดลองทั้งหมดรายงานการเจริญเติบโตระยะเส้นใยในเชิงพาณิชย์
โยเกิร์ตที่มีอยู่ซื้อมาจากร้านค้าปลีก (เจนีวานิวยอร์ก) ใน
850.5 กรัม (32 ออนซ์) หน่วยและ 30 กรัมโยเกิร์ตถูกย้ายไปแต่ละ
ถุง Stomacher โยเกิร์ตได้รับเชื้อด้วยเอ็ม circinelloides (ประมาณ
104 โคโลนี / กรัมโยเกิร์ต) หดหายและโอนโดยน้ำหนัก
ลงในถุง Stomacher ผ่านการฆ่าเชื้อ ตัวอย่างโยเกิร์ตที่ถูกเก็บไว้ใช้ออกซิเจนที่
อุณหภูมิการเก็บรักษาที่กำหนด (4 ° C, 15 ° C และ 25 ° C) สำหรับการเจริญเติบโตของ
การศึกษา ข้อมูลทั้งหมดเปรียบเทียบอัตราการเจริญเติบโตของต่างๆเมตร circinelloides ไอโซเลท
(รูปที่ 1). ที่ถูกเก็บรวบรวมจากโยเกิร์ตบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C.
2.4 เฟสยีสต์ผลิตภัณฑ์การฉีดวัคซีน
การเจริญเติบโตของยีสต์เหมือนถูกชักนำโดยการฉีดวัคซีนของการระงับ hypha / สปอร์
เข้ามาในแพคเกจที่ปิดสนิทโยเกิร์ตที่มีองค์ประกอบ headspace
เพียงพอที่จะทำให้เกิดการสลับก้านที่อธิบายไว้ใน
มาตรา 2.2 เงื่อนไขเหล่านี้เลียนแบบใกล้ชิดที่สุดผลิตภัณฑ์จริง
เงื่อนไขและได้รับอนุญาตให้ปริมาณ compositional ช่องว่างเหนือของเหลว
การเปลี่ยนแปลงในการศึกษาความท้าทาย สำหรับการศึกษาความท้าทายเชื้อ
ถูกบันทึกอยู่ในหางนมที่มีแบคทีเรียกรดแลคติก (LAB) นี้ได้รับการ
โอนไปแล้วถุงภัณฑ์อ่อน (Amcor จำกัด Hawthorne,
วิกตอเรียออสเตรเลีย) และความร้อนปิดผนึก กระเป๋าถูกบ่มที่ 42 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ2.1 . เชื้อจุลินทรีย์การ associatedm . circinelloides สายพันธุ์ที่แยก fromspoiled โยเกิร์ตและสองคลินิกไอโซเลทอย่างไม่เห็นแก่ตัวโดยโจเซฟไฮต์เมิ่นที่มหาวิทยาลัยดุ๊ก ( Durham , NC ) เมตร circinelloides สายพันธุ์3615 NRRL , 3627were เอเซีย และได้รับของ fromusda วิจัยการเกษตรรวมบริการ ( ตารางที่ 1 ) ทั้งหมดยังคงเป็นเชื้อแช่แข็งหุ้นวัฒนธรรมและชุบบนอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ( เบคตอนดิกคินสันและ บริษัท , Franklin Lakes , NJ ) ปรับ pH 3.5 ก่อนใช้ในการทดลอง โดยเตรียมแผ่นซึ่งมี .ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง และจะระงับ ) /sporangiospores ในเปปโตนน้ำ ( เบคตอนดิกคินสันและ บริษัท , แฟรงคลิน ,ทะเลสาบ , NJ ) หรือนมไขมันต่ำ ขึ้นอยู่กับการทดลองเซลล์ยีสต์ เช่น ที่ใช้ในการสร้างความร้อนทำลายข้อมูลเตรียมไว้โดย streaking เมตร ปรับ circinelloides บน PDA จานถูกบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C เป็นเวลาอย่างน้อย 48 ชั่วโมงใน gaspack anaerobic ( เบคตอนไห ,ดิกคินสันและ บริษัท Franklin Lakes , NJ ) กลุ่มทั่วไปและลักษณะรูปร่างของเซลล์สังเกตได้ดังต่อไปนี้ 1 . ต่อไปนี้การสกัดจากgaspack ถัง โอ่ง ยีสต์ เช่น เซลล์ได้ทันที ใช้ความร้อนการทำลายของการทดลอง2.2 . การใส่เชื้อโยเกิร์ตถ้วยเวลาที่จำเป็นสำหรับ circinelloides เมตรสามารถผลิตต่าง ๆCO2 เพียงพอที่จะเป็นตัวเป็นตนเสียโยเกิร์ตถ้วยถูกกำหนดโดยการฉีดวัคซีนโยเกิร์ตถ้วยเดียวที่ให้บริการ ( ซื้อจากร้านค้าปลีกพาณิชย์เจนีวา , นิวยอร์ก ) กับ 104 CFU / กรัมโยเกิร์ตของ sporangiospores จากได้รับเมตร circinelloides ไอโซเลท ( เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ของกาวยางอิงค์ , Indianapolis , ใน ) ถูกแก้ไขเพื่อฟอยล์ด้านบนและ inoculumwas ส่งผ่านทางเข็มปลอดเชื้อ cupswere อุณหภูมิ 25 ° C จนถึงการผลิตก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์คือมองเห็นได้2.3 ผลิตภัณฑ์เส้นใยเชื้อระยะทุกการทดลองในรายงานการเจริญเติบโตระยะที่เส้นใยในเชิงพาณิชย์ของโยเกิร์ตที่ซื้อจากร้านค้าปลีก ( เจนีวา นิวยอร์ก )850.5 g ( 32 ออนซ์ ) หน่วยและ 30 กรัมของโยเกิร์ตถูกย้ายแต่ละกระเป๋าแผงประดับหน้าอก . โยเกิร์ตเป็นเชื้อที่มี circinelloides ( ประมาณม.104 CFU / กรัมโยเกิร์ต ) , บดและการโอนโดยน้ำหนักเป็นถุงแผงประดับหน้าอกที่เป็นหมัน ตัวอย่างที่ถูก aerobically โยเกิร์ตเขตอุณหภูมิกระเป๋า ( 4 ° C , 15 ° C , และ 25 ° C ) สำหรับการเจริญเติบโตการศึกษา ข้อมูลเปรียบเทียบอัตราการเจริญเติบโต ของเชื้อต่าง ๆ circinelloides ม.( รูปที่ 1 ) ถูกเก็บจากโยเกิร์ต อุณหภูมิ 25 องศา2.4 . ระยะเชื้อยีสต์ ผลิตภัณฑ์ยีสต์ เช่น การกระตุ้นด้วยการฉีดวัคซีนของไฮฟา / สปอร์แขวนลอยในโยเกิร์ต ซึ่งมีองค์ประกอบปิดผนึกชุดเฮดสเปซเพียงพอที่จะทำให้เปลี่ยนตามที่อธิบายไว้ในลักษณะมาตรา 2.2 . เงื่อนไขเหล่านี้เป็นจริง mimicked ผลิตภัณฑ์อย่างใกล้ชิดที่สุดเงื่อนไขและการอนุญาตสำหรับปริมาณของส่วนประกอบเฮดสเปซการเปลี่ยนแปลงในความท้าทายการศึกษา การศึกษาเชื้อที่ท้าทายเติมหางกะทิที่มีแบคทีเรียผลิตกรดแลกติก ( Lab ) นี้คือแล้วโอนไปยังกรดบรรจุถุง ( AMCOR จำกัด , Hawthorne ,วิคตอเรีย , ออสเตรเลีย ) และความร้อนปิดผนึก ถุงอุณหภูมิ 42 องศา C สำหรับ