AbstractPalmitoylation, the posttra

Abstract
Palmitoylation, the posttranslational thioester-linked modification of a 16-carbon saturated fatty acid onto the cysteine residue of a protein, has garnered considerable attention due to its implication in a multitude of disease states. The signature DHHC motif (Asp-His-His-Cys) identifies a family of protein acyltransferases (PATs) that catalyze the S-palmitoylation of target proteins via a two-step mechanism. In the first step, autopalmitoylation, palmitate is transferred from palmitoyl-CoA to the PAT, creating a palmitoyl:PAT intermediate and releasing reduced CoA. The palmitoyl moiety is then transferred to a protein substrate in the second step of the reaction. We have developed an in vitro, single-well, fluorescence-based enzyme assay that monitors the first step of the PAT reaction by coupling the production of reduced CoA to the reduction of NAD+ using the α-ketoglutarate dehydrogenase complex. This assay is suitable for determining PAT kinetic parameters, elucidating lipid donor specificity and measuring PAT inhibition by 2-bromopalmitate. Finally, it can be used for high-throughput screening (HTS) campaigns for modulators of protein palmitoylation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทคัดย่อPalmitoylation, posttranslational thioester เชื่อมโยงปรับเปลี่ยนของ 16 คาร์บอนอิ่มตัวกรดไขมันบนตกค้าง cysteine โปรตีน ได้รวบรวมความสนใจมากเนื่องจากเป็นปริยายในหลากหลายของอเมริกาโรค สาระสำคัญการ DHHC ลายเซ็น (Asp-พระพระ-Cys) ระบุครอบครัวของ acyltransferases โปรตีน (PATs) ที่สถาบัน palmitoylation S ของโปรตีนเป้าหมายผ่านกลไกสองขั้นตอน ในขั้นแรก autopalmitoylation, palmitate ถูกโอนย้ายจาก palmitoyl CoA ไป สร้าง palmitoyl:PAT เป็นกลาง และปล่อยลด CoA แล้วมีการโอนย้าย palmitoyl moiety โปรตีนพื้นผิวในขั้นตอนสองของปฏิกิริยา เราได้พัฒนาเป็นการเพาะเลี้ยง เดี่ยวดี วิเคราะห์เอนไซม์ fluorescence ตามที่ตรวจสอบขั้นตอนแรกของปฏิกิริยา PAT โดย coupling ผลิต ลด CoA ลดและดาว์นโหลด + ใช้ dehydrogenase α-ketoglutarate ซับซ้อน ทดสอบนี้เหมาะสำหรับกำหนดพารามิเตอร์ PAT เดิม ๆ elucidating specificity บริจาคไขมัน และวัด PAT ยับยั้ง โดย 2-bromopalmitate สุดท้าย มันสามารถถูกใช้สำหรับแคมเปญการคัดกรอง (เมอร์) อัตราความเร็วสูงสำหรับข้อของโปรตีน palmitoylation

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อ
Palmitoylation, posttranslational ปรับเปลี่ยน thioester เชื่อมโยงของกรดไขมันอิ่มตัว 16 คาร์บอนบนตกค้าง cysteine ​​ของโปรตีนได้รับความสนใจเป็นอย่างมากเนื่องจากความหมายในความหลากหลายของโรค บรรทัดฐาน DHHC ลายเซ็น (ASP-His-His-Cys) ระบุครอบครัวของโปรตีน acyltransferases (ตบ) ที่กระตุ้น S-palmitoylation ของโปรตีนเป้าหมายผ่านทางกลไกสองขั้นตอน ในขั้นตอนแรก autopalmitoylation, palmitate จะถูกโอนจาก Palmitoyl-CoA จะ PAT สร้าง Palmitoyl: PAT กลางและปล่อย CoA ลดลง ครึ่ง Palmitoyl จะถูกโอนไปแล้วตั้งต้นโปรตีนในขั้นตอนที่สองของการเกิดปฏิกิริยา เรามีการพัฒนาในหลอดเดียวดีทดสอบเอนไซม์เรืองแสงตามที่ตรวจสอบขั้นตอนแรกของการเกิดปฏิกิริยา PAT โดยการแต่งงานการผลิตลดลง CoA การลดลงของ NAD + ใช้α-ketoglutarate dehydrogenase ซับซ้อน การทดสอบนี้เหมาะสำหรับการกำหนดค่าพารามิเตอร์การเคลื่อนไหว PAT, แจ่มชัดจำเพาะไขมันบริจาคและการวัดการยับยั้ง PAT 2-bromopalmitate ในที่สุดก็สามารถนำมาใช้ในการคัดกรองสูง throughput (HTS) สำหรับแคมเปญ modulators ของโปรตีน palmitoylation

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

palmitoylation นามธรรม , ไทโอเ เทอร์ posttranslational เชื่อมโยงการ 16 คาร์บอนกรดไขมันบนกากของกรดอะมิโนโปรตีน ได้รับความสนใจมาก เนื่องจากอาการของโรคในฝูงของอเมริกาลายเซ็น dhhc แม่ลาย ( ASP ของเขา CYS ) ระบุว่าครอบครัวของ acyltransferases โปรตีน ( Pats ) ที่ช่วยกระตุ้น s-palmitoylation ของโปรตีนเป้าหมายผ่านกลไกสองขั้นตอน ในขั้นตอนแรก autopalmitoylation palmitate , โอนจาก palmitoyl COA ให้แพท สร้าง palmitoyl : แพทกลางและปล่อยลดลง COA .การ palmitoyl กึ่งหนึ่งจะโอนให้กับ โปรตีนที่ใช้ในขั้นตอนที่สองของการเกิดปฏิกิริยา เรามีการพัฒนาในหลอดเดียว คือ การใช้เอนไซม์วิเคราะห์ที่ตรวจสอบขั้นตอนแรกของแพท ปฏิกิริยาโดย coupling การผลิตลดลง COA เพื่อลดและใช้แอลฟา ketoglutarate dehydrogenase ซับซ้อนวิธีนี้เหมาะสำหรับการหาค่าพารามิเตอร์จลน์อธิบายแพท , แพท ยับยั้งไขมันผู้บริจาคความจำเพาะและวัดโดย 2-bromopalmitate . สุดท้าย มันสามารถใช้สำหรับการช่วย ( HTS ) แคมเปญ palmitoylation
modulators ของโปรตีน