Isopropyl-B-d-thiogalactopyranoside

Isopropyl-B-d-thiogalactopyranoside (IPTG; 1 mM final concentration,
Bangalore Genei, India) was added to log phase cultures
of E. coli BL21 DE3 pLys S cells transformed with pRSET B recombinant
plasmid for expression of His6 fusion recombinant hexon
protein. The optimum expression of protein was found out by
pilot expression. Optimum expression of protein was 4–5 h after
IPTG induction. At this point cells were harvested by centrifugation
(3000 × g for 10 min at 4 ◦C) and pellet was collected. The
pellet was resuspended in 20 ml of binding buffer (Bangalore Genie,
India; Cat No. PC-137) and after 3 cycles of freezing and thawing
the expressed protein was taken for purification. The recombinant
histidine tagged hexon protein was purified by affinity chromatography
containing Ni-NTA (Bangalore Genie, Bangalore, India; Cat
No. PC-137). The recombinant histidine tagged fusion protein was
eluted with elution buffer of different pH as per the manufacture’s
manual. The purity ofthe eluted protein was analysed on SDS-PAGE
(Fig. 4), characterized by Western Blot (Fig. 5), quantified using
spectrophotometer (Warberg and Christian, 1941) and used in both
ELISA and Dot ELISA

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Isopropyl-B-d-thiogalactopyranoside (IPTG ความเข้มข้นสุดท้าย 1 มม.เพิ่มสู่วัฒนธรรมเฟส Genei บังกาลอร์ อินเดีย)ของ E. coli BL21 DE3 pLys S เซลล์เปลี่ยนกับ pRSET B recombinantplasmid สำหรับนิพจน์ของ hexon recombinant ฟิวชั่น His6โปรตีนที่มี พบการแสดงออกที่เหมาะสมของโปรตีนออกโดยนำร่องนิพจน์ 4-5 ชม.หลังจากแก้ไขนิพจน์ที่เหมาะสมของโปรตีนเหนี่ยวนำ IPTG จุดนี้ เซลล์เก็บเกี่ยว โดยการหมุนเหวี่ยง(3000 × g 10 นาทีที่ 4 ◦C) และเก็บเม็ด การเม็ดถูก resuspended ใน 20 ml ของบัฟเฟอร์ผูก (บังกาลอร์ Genieประเทศอินเดีย หมายเลขแมว PC-137) และหลัง จาก 3 รอบแช่แข็ง และละลายโปรตีนแสดงถูกนำสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ การควบรวมติดแท็ก histidine hexon โปรตีนบริสุทธิ์ โดย chromatography ความสัมพันธ์ประกอบด้วย Ni NTA (บังกาลอร์ Genie บังกาลอร์ อินเดีย แมวไม่ใช่ PC-137) โปรตีนฟิวชั่น recombinant histidine แท็กคือeluted กับบัฟเฟอร์ชะค่า ph แตกต่างกันตามการผลิตด้วยตนเอง คือวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ของโปรตีน eluted ใน SDS-หน้า(รูป 4), โดยตะวันตกซับ (รูป 5) วัดโดยใช้สเปค (Warberg และคริสเตียน 1941) และใช้ทั้งในELISA และจุด ELISA

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Isopropyl-BD-thiogalactopyranoside (IPTG 1 มิลลิเข้มข้นสุดท้าย,
บังกาลอร์ Genei อินเดีย) ถูกเพิ่มเข้าสู่ระบบเฟสวัฒนธรรม
ของเซลล์ E. coli BL21 DE3 plys S เปลี่ยนกับ pRSET B recombinant
พลาสมิดสำหรับการแสดงออกของ His6 ฟิวชั่น hexon recombinant
โปรตีน การแสดงออกที่เหมาะสมของโปรตีนที่ถูกค้นพบโดย
การแสดงออกของนักบิน การแสดงออกที่เหมาะสมของโปรตีนเป็น 4-5 ชั่วโมงหลังจาก
IPTG เหนี่ยวนำ ณ จุดนี้เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยง
(3000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 ◦C) และเม็ดถูกเก็บรวบรวม
เม็ดถูก resuspended ใน 20 มล. ของการผูกบัฟเฟอร์ (บังกาลอร์ Genie,
อินเดียแมวฉบับ PC-137) และหลังจาก 3 รอบของการแช่แข็งและละลาย
โปรตีนที่ถูกนำสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ recombinant
ฮิสติดีนติดแท็ก hexon โปรตีนบริสุทธิ์โดยโครมาความสัมพันธ์
ที่มี Ni-NTA (บังกาลอร์ Genie บังกาลอร์, อินเดียแมว
ฉบับ PC-137) recombinant ฮิสติดีนติดแท็กโปรตีนถูก
ชะด้วยบัฟเฟอร์ชะค่า pH แตกต่างกันตามการผลิตของ
คู่มือ ความบริสุทธิ์ ofthe โปรตีนชะวิเคราะห์ในระบบ SDS-PAGE
(รูปที่. 4) โดดเด่นด้วยดวงตะวัน (รูปที่ 5.) ปริมาณการใช้
spectrophotometer (Warberg และคริสเตียน, 1941) และใช้ทั้ง
วิธี ELISA และ Dot ELISA

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

isopropyl-b-d-thiogalactopyranoside ( โปรตีน 1 มิลลิเมตรสุดท้ายสมาธิบังกาลอร์ genei , อินเดีย ) คือการเพิ่มบันทึกวัฒนธรรม ระยะที่ของ E . coli BL21 DE3 plys s เซลล์แปลง ด้วย prset บีแนนท์พลาสมิดสำหรับการแสดงออกของยีน Hexon his6 ฟิวชั่นโปรตีน การแสดงออกที่เหมาะสมของโปรตีนถูกพบโดยการแสดงออกของนักบิน การแสดงออกของโปรตีนที่ 4 – 5 H หลังการเหนี่ยวนำโปรตีน . ณจุดนี้เซลล์ถูกเก็บเกี่ยวโดยการปั่นเหวี่ยง( 3000 × G สำหรับ 10 นาทีที่ 4 ◦ C ) และเม็ดถูกเก็บ ที่การผลิต resuspended 20 ml รวมบัฟเฟอร์ ( จินนี่อินเดียอินเดีย แมวไม่ pc-137 ) และหลังจาก 3 รอบของการแช่แข็งและละลายแสดงโปรตีนถูกทำให้บริสุทธิ์ การรีคอมบิแนนท์โพสต์เมื่อ Hexon โปรตีนบริสุทธิ์โดยขี้รังแคที่ประกอบด้วยชั้น NTA ( บังกาลอร์ จีนี่ บังกาลอร์ , อินเดีย ; แมวไม่ pc-137 ) เมื่อรีคอมบิแนนท์โปรตีน คือ การโพสต์ตัวอย่างสารประกอบบัฟเฟอร์ pH ที่แตกต่างกันที่มีต่อกำลังการผลิตคู่มือ ความบริสุทธิ์ของตัวอย่างในการศึกษาวิเคราะห์โปรตีน( รูปที่ 4 ) , ลักษณะโดย Western blot ( รูปที่ 5 ) , วัดโดยใช้Spectrophotometer ( คริสเตียน และ warberg 1941 ) และ ใช้ ทั้ง ในวิธี dot ELISA และ