2.3. Chromatography and mass spectr

2.3. Chromatography and mass spectrometry assays
Chromatographic fractionation of H. lunatus venom was
performed using high performance liquid chromatography
(HPLC). Briefly, 1 mg of crude venom was applied to
a reverse phase column. The column used in this assay was
a Shimadzu-Pack CLC-ODS C18 (6  150 mm) eluted at
1 mL/min with a linear gradient of 0.1% TFA in water and
acetonitrile, solutions A and B, respectively. After column
equilibration the venom fractions were separated with
a linear gradient from solution A to 60% solution B, running
for 60 min.
Fractions were then subjected to MALDI-TOF-TOF analyses.
MS analysis was performed using a MALDI-TOF-TOF
AutoFlex III (Bruker Daltonics) instrument in positive/
reflector mode controlled by the FlexControl software.
Instrument calibration was achieved by using Peptide
Calibration Standard IV (Bruker Daltonics) as a reference
and using sinapinic acid as a matrix. The peak was spotted
to MTP AnchorChip 400/384 (Bruker Daltonics) targets
using standard protocols for the dried droplet method.
2.4. Immunological studies
2.4.1. Immunization protocols
Adult New Zealand female rabbits were used for the
production of anti-H. lunatus and anti-T. serrulatus venom
antibodies. After collection of pre-immune sera, the
animals received an initial subcutaneous injection of 100 mg
of whole venom in complete Freund’s adjuvant (day 1).
Three booster injections were made subcutaneously 14, 21
and 28 days later with a lower dose (50 mg) in incomplete
Freund’s adjuvant. The animals were bled one week after
the last injection.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. chromatography และมวล assays spectrometryแยกส่วน chromatographic ของ H. lunatus พิษได้ใช้ chromatography เหลวประสิทธิภาพสูง(HPLC) สั้น ๆ 1 มิลลิกรัมของพิษน้ำมันถูกนำไปใช้กับคอลัมน์ย้อนกลับขั้นตอน คอลัมน์ที่ใช้ในการทดสอบนี้ได้C18 CLC ODS Shimadzu แพ็ค (6 150 mm) eluted ที่1 mL/min ด้วยการไล่ระดับสีแบบเส้นตรงของ 0.1% TFA ในน้ำ และacetonitrile โซลูชั่นที่ A และ B ตามลำดับ หลังจากคอลัมน์equilibration เศษพิษถูกคั่นด้วยไล่เส้นจาก A โซลูชันโซลูชัน 60% B ทำงานใน 60 นาทีส่วนอยู่ภายใต้การวิเคราะห์ MALDI TOF TOF แล้วทำการวิเคราะห์ MS ใช้ MALDI-TOF-TOFเครื่องมือ AutoFlex III (Bruker Daltonics) ในบวก /โหมดหรือถูกควบคุม โดยซอฟต์แวร์ FlexControlสอบเทียบเครื่องมือสำเร็จโดยเพปไทด์ปรับเทียบมาตรฐาน IV (Bruker Daltonics) เป็นการอ้างอิงและใช้กรด sinapinic เป็นเมทริกซ์ การเป็นด่างเพื่อเป้าหมาย MTP AnchorChip 400/384 (Bruker Daltonics)ใช้โพรโทคอลมาตรฐานสำหรับวิธีหยดแห้ง2.4. ระเบียบศึกษา2.4.1 การรับวัคซีนโพรโทคอลกระต่ายหญิงนิวซีแลนด์ผู้ใหญ่ใช้สำหรับการผลิตของ H. ป้องกัน lunatus และการยอมรับต่อต้าน พิษ serrulatusแอนตี้กัน หลังจากคอลเลกชันของภูมิคุ้มกันก่อนที่จะ การสัตว์ได้รับฉีดใต้ต้นของ 100 มิลลิกรัมของพิษทั้งหมดในการประเมินของ Freund สมบูรณ์ (1 วัน)ทำการฉีดบูสเตอร์สาม subcutaneously 14, 21และ 28 วันหลังจากที่ มีปริมาณต่ำ (50 มิลลิกรัม) ในสมบูรณ์Freund ของประเมิน คราวที่แล้วหนึ่งสัปดาห์หลังจากถูกสัตว์การฉีดครั้งสุดท้าย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 โครมาและการตรวจมวลสาร
แยก Chromatographic พิษ H. lunatus ได้รับการ
ดำเนินการโดยใช้ของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง
(HPLC) สั้น ๆ 1 มิลลิกรัมพิษน้ำมันดิบถูกนำไปใช้กับ
คอลัมน์เฟสย้อนกลับ คอลัมน์ที่ใช้ในการทดสอบครั้งนี้มี
Shimadzu-Pack CLC-C18 ODS (6? 150 มิลลิเมตร) ชะที่
1 มิลลิลิตร / นาทีกับลาดเชิงเส้นของ 0.1% TFA ในน้ำและ
acetonitrile โซลูชั่น A และ B ตามลำดับ หลังจากที่คอลัมน์
สมดุลเศษส่วนพิษถูกแยกออกด้วย
ลาดเชิงเส้นจากสารละลาย 60% วิธีการแก้ปัญหา B วิ่ง
60 นาที.
เศษส่วนนั้นก็ยัดเยียดให้ MALDI-TOF-TOF วิเคราะห์.
วิเคราะห์ MS ได้รับการดำเนินการโดยใช้ MALDI-TOF-TOF
Autoflex III? (Bruker Daltonics) เครื่องมือในเชิงบวก /
โหมดสะท้อนควบคุมโดย flexControl? ซอฟแวร์.
สอบเทียบเครื่องมือวัดก็ประสบความสำเร็จโดยใช้เปปไทด์
การสอบเทียบมาตรฐาน IV (Bruker Daltonics) เป็นข้อมูลอ้างอิง
และการใช้กรด Sinapinic เป็นเมทริกซ์ สูงสุดก็เห็น
จะ MTP AnchorChip? 400/384 (Bruker Daltonics) เป้าหมาย
โดยใช้โปรโตคอลมาตรฐานสำหรับวิธีการหยดแห้ง.
2.4 การศึกษาภูมิคุ้มกัน
2.4.1 โปรโตคอลการฉีดวัคซีน
สำหรับผู้ใหญ่นิวซีแลนด์กระต่ายหญิงถูกนำมาใช้สำหรับ
การผลิตของการต่อต้าน-H lunatus และ anti-T พิษ serrulatus
แอนติบอดี หลังจากที่คอลเลกชันของซีรั่มก่อนภูมิคุ้มกันของร่างกาย
สัตว์ที่ได้รับการฉีดใต้ผิวหนังเริ่มต้น 100 มิลลิกรัม
พิษทั้งในแบบเสริม Freund สมบูรณ์ (วันที่ 1).
สามฉีดบูสเตอร์ที่ถูกสร้างขึ้นใต้ผิวหนัง 14, 21
และ 28 วันต่อมามีปริมาณที่ลดลง (50 มิลลิกรัม ) ในที่ไม่สมบูรณ์
แบบเสริม Freund ของ สัตว์ที่ถูกเลือดหนึ่งสัปดาห์หลังจาก
การฉีดที่ผ่านมา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 โครมาโตกราฟีแมส ) และโครม (
.
) สีเงินพิษมันใช้ liquid chromatography
สมรรถนะสูง ( HPLC ) . สั้น ๆ , 1 mg ของดิบพิษใช้
กลับเฟส คอลัมน์ คอลัมน์ที่ใช้ในการทดสอบนี้คือการ c18 clc-ods แพ็ค Shimadzu ( 6  150 มม. ) ตัวอย่างที่
1 มิลลิลิตรต่อนาที มีความลาดชันเชิงเส้นของระดับ 0.1% ในน้ำและ
ไนโซลูชั่น A และ B ตามลำดับ หลังจากคอลัมน์
equilibration พิษเศษส่วนแยกกันกับ
ลาดเชิงเส้นจากโซลูชั่น 60 % สารละลาย B วิ่ง

( 60 นาที ) จากนั้นภายใต้การวิเคราะห์ maldi-tof-tof .
การวิเคราะห์ MS มีการใช้ maldi-tof-tof
autoflex III  ( บรูกเกอร์ ดอลโทนิก ) เครื่องมือบวก /
โหมดควบคุมโดย flexcontrol สะท้อนแสง
 ซอฟต์แวร์การสอบเทียบเครื่องมือสําเร็จ โดยใช้มาตรฐานการสอบเทียบเปปไทด์
4 ( บรูกเกอร์ ดอลโทนิก ) เป็นการอ้างอิง
และใช้ sinapinic กรดเป็นเมทริกซ์ ยอดเป็นด่าง
กับ MTP anchorchip  400 / 384 ( บรูกเกอร์ ดอลโทนิก ) เป้าหมาย
โดยใช้โปรโตคอลมาตรฐานสำหรับวิธีหยดแห้ง .
2.4 . ภูมิคุ้มกันวิทยาการศึกษา
เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . ภูมิคุ้มกันโปรโตคอล
ผู้ใหญ่หญิงชาวนิวซีแลนด์ได้ใช้
กระต่ายการผลิตและ anti-h. สีเงิน anti-t. serrulatus พิษ
แอนติบอดี หลังจากที่คอลเลกชันก่อนภูมิคุ้มกันเซรา
สัตว์ได้รับการเริ่มต้นการฉีดใต้ผิวหนัง 100 มก
ทั้งพิษในสมบูรณ์ Freund เป็นผู้ช่วย ( วันที่ 1 )
3 Booster ฉีดได้ subcutaneously 14 , 21 และ 28 วันต่อมา
ที่มีขนาดต่ำ ( 50 มิลลิกรัม ) ไม่สมบูรณ์
Freund เป็นผู้ช่วยสัตว์มีเลือดออกหลังจากหนึ่งสัปดาห์
ฉีดครั้งสุดท้าย