Sti1p and Cpr7p are not required fo

Sti1p and Cpr7p are not required for the formation of Sup35p-containing SDS-resistant polymers

Sti1p and Cpr7p are co-chaperones that modulate the ATPase activity of the Hsp70 (Ssa) and Hsp90 (Hsp82) chaperones in yeast (Loovers et al., 2007; Richter et al., 2003; Song and Masison, 2005; Wegele et al., 2003) but are also known to interact with the C-terminus of Hsp104 (Abbas-Terki et al., 2001). In the case of Hsp104, it remains to be established whether Sti1p and Cpr7p contribute to the chaperone activity of this AAA+ ATPase, although deletion of the C-terminal sequence of Hsp104, which is recognized by the co-chaperones, does not impair Hsp104 activity (Mackay et al., 2008). The Hsp70 (Ssa) chaperones do make a significant contribution to [PSI+] propagation (Allen et al., 2005, Chernoff et al., 1999, Jones and Masison, 2003, Loovers et al., 2007, Newnam et al., 1999) and Sti1p and Cpr7p might be expected to contribute to prion propagation indirectly through this chaperone. However, [PSI+] is propagated normally in strains lacking one or both of these Hsp70/Hsp90 co-chaperones (Jones et al., 2004). We therefore examined whether they were required for efficient elimination of [PSI+] by Hsp104 overexpression.

A series of G600-derived [PSI+] strains (Table 1) carrying either the individual sti1Δ and cpr7Δ knock-outs or the sti1Δ cpr7Δ double knock-out were studied. We confirmed that the [PSI+] phenotype was stably maintained in these strains, as was [PSI+] elimination by growth on 5 mM GdnHCl (Figure 2A). Several rounds of subculturing of these strains on YEPD medium (>40 generations) did not result in the appearance of prion-free [psi−] cells. Furthermore, analysis of the aggregation state of Sup35p in each of these strains and in the STI1+CPR7+ control strain revealed that for both the sti1Δ and the cpr7Δ strains, Sup35p was only detected in the high molecular weight pellet fraction, similar to the G600 parent strain (Figure 2B). In the sti1Δ cpr7Δ strain a small amount of soluble Sup35p was routinely detected, although this did not result in any significant change in the white Ade+ nonsense suppression phenotype of this strain. All four strains examined also contained SDS-resistant polymers of Sup35p (Figure 2C), which are characteristic of [PSI+] strains (Kryndushkin et al., 2003). Consequently, the lack of either or both Sti1p and Cpr7p does not lead to a defect in [PSI+] propagation in glucose-grown cells, in the nature or size of the SDS-resistant Sup35p polymers formed in these cells, indicating that, whatever role they play in modulating Hsp104 activity, that activity is not essential for [PSI+] propagation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Sti1p และ Cpr7p ไม่ถูกต้องสำหรับการก่อตัวของโพลิเมอร์ที่ประกอบด้วย Sup35p SDS ทนมีครูร่วมที่ปรับกิจกรรม ATPase ของ Hsp70 Sti1p และ Cpr7p (Ssa) และ Hsp90 ครู (Hsp82) ในยีสต์ (Loovers et al. 2007 ริกเตอร์ et al. 2003 เพลงและ Masison, 2005 Wegele et al. 2003) แต่สามารถโต้ตอบกับ terminus C ของ Hsp104 (อับบาส Terki et al. 2001) ในกรณีของ Hsp104 มันยังคงเป็นการจัดตั้งว่า Sti1p และ Cpr7p ที่นำไปสู่กิจกรรมพี่เลี้ยงของนี้ AAA + ATPase แม้ว่าการลบลำดับขั้ว C ของ Hsp104 ซึ่งเป็นที่ยอมรับ โดยครูร่วม การทำกิจกรรม Hsp104 (แมคเคย์ et al. 2008) การ Hsp70 (Ssa) ครูทำผลงานสำคัญการเผยแพร่ [PSI +] (อัลเลน et al. 2005 เขตเชอร์นอฟ et al. 1999 โจนส์และ Masison, 2003, Loovers et al. 2007, Newnam et al. 1999) และ Sti1p และ Cpr7p อาจจะคาดหวังจะนำไปสู่การแพร่กระจายโดยอ้อมผ่านพี่เลี้ยงนี้พรีออน อย่างไรก็ตาม, [PSI +] จะแพร่กระจายโดยปกติในสายพันธุ์ที่ขาดอย่างใดอย่างหนึ่งหรือทั้งสองอย่างนี้ครูร่วม Hsp70/Hsp90 (Jones et al. 2004) เราจึงตรวจสอบว่าพวกเขามีความจำเป็นสำหรับประสิทธิภาพกำจัด [PSI +] โดยการแสดงออกของ Hsp104ชุดของมา G600 [PSI +] สายพันธุ์ (ตารางที่ 1) ดำเนินการละ sti1Δ และ cpr7Δ น็อคเอาท์หรือ sti1Δ cpr7Δ คู่เคาะออกมาที่มีศึกษา เรายืนยันว่า กนิ [PSI +] แก้ไขสามารถยังคงอยู่ในสายพันธุ์เหล่านี้ เป็นการตัดออก [PSI +] โดยเติบโตใน 5 มม GdnHCl (รูป 2A) หลายรอบของ subculturing ของสายพันธุ์เหล่านี้บน YEPD ปานกลาง (> 40 รุ่น) ผลลักษณะของเซลล์ฟรีพรีออน [psi−] ไม่ นอกจากนี้ รวมสถานะของ Sup35p ในแต่ละสายพันธุ์เหล่านี้ และ STI1 + CPR7 + สายพันธุ์ควบคุมวิเคราะห์เปิดเผยว่า สำหรับการ sti1Δ และสายพันธุ์ cpr7Δ, Sup35p เท่าพบในโมเลกุลสูงเม็ดเศษส่วน คล้ายกับสายพันธุ์หลัก G600 (รูปที่ 2B) ในสายพันธุ์ cpr7Δ sti1Δ Sup35p ละลายน้ำจำนวนเล็กน้อยเป็นประจำตรวจพบ แม้ว่านี้ผลไม่เปลี่ยนแปลงที่สำคัญใด ๆ ในการขาว Ade + เรื่องไร้สาระปราบปรามกนิของสายพันธุ์นี้ ทั้งหมดสี่สายพันธุ์การตรวจสอบยังประกอบด้วยโพลิเมอร์ทน SDS ของ Sup35p (รูปที่ 2C), ซึ่งเป็นลักษณะของ [PSI +] สายพันธุ์ (Kryndushkin et al. 2003) ดังนั้น การขาด ทั้ง Sti1p และ Cpr7p ไม่นำไปสู่ข้อบกพร่องใน [PSI +] การเผยแพร่ ในโตน้ำตาลในเซลล์ ในธรรมชาติหรือขนาดของ Sup35p SDS ทนที่โพลิเมอร์ที่เกิดขึ้นในเซลล์เหล่านี้ เพื่อระบุว่า บทบาทสิ่งที่พวกเขาเล่นในการปรับ Hsp104 กิจกรรม กิจกรรมที่ไม่จำเป็นสำหรับการเผยแพร่ [PSI +]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Sti1p และ Cpr7p ไม่จำเป็นสำหรับการก่อตัวของ Sup35p ที่มีส่วนผสมของโพลีเมอระบบ SDS-ทน

Sti1p และ Cpr7p ร่วมครูใหญ่ที่ปรับกิจกรรม ATPase ของ Hsp70 (SSA) และ HSP90 (Hsp82) ครูใหญ่ในยีสต์ (Loovers et al., 2007 ; ริกเตอร์ et al, 2003;. เพลงและการ Masison 2005;.. Wegele, et al, 2003) แต่ยังเป็นที่รู้จักกันในการโต้ตอบกับ C-ปลายทางของ Hsp104 (อับบาส-Terki, et al, 2001) ในกรณีของ Hsp104 ก็ยังคงที่จะจัดตั้งขึ้นว่า Sti1p และ Cpr7p มีส่วนร่วมในกิจกรรมพี่เลี้ยงนี้ AAA + ATPase แม้ว่าการลบลำดับ C-ขั้ว Hsp104 ซึ่งเป็นที่ยอมรับโดยร่วมครูใหญ่, ไม่ทำให้เสียกิจกรรม Hsp104 (แมคเคย์ et al., 2008) Hsp70 (SSA) ครูใหญ่ทำให้ความสำคัญไปที่ [PSI +] การขยายพันธุ์ (อัลเลน et al., 2005 Chernoff et al., 1999 โจนส์และ Masison 2003 Loovers et al., 2007 Newnam, et al., 1999 ) และ Sti1p และ Cpr7p อาจจะมีการคาดว่าจะนำไปสู่การขยายพันธุ์พรีออนทางอ้อมผ่านพี่เลี้ยงนี้ อย่างไรก็ตาม [PSI +] จะแพร่กระจายได้ตามปกติในสายพันธุ์ที่ขาดหนึ่งหรือทั้งสองเหล่านี้ Hsp70 / HSP90 ร่วมครูใหญ่ (Jones et al., 2004) ดังนั้นเราจึงตรวจสอบว่าพวกเขาจำเป็นต้องใช้ในการกำจัดที่มีประสิทธิภาพของ [PSI +] โดย Hsp104 แสดงออก.

ชุดของ G600 มา [PSI +] สายพันธุ์ (ตารางที่ 1) การดำเนินการอย่างใดอย่างหนึ่งsti1Δบุคคลและcpr7Δลึกหนาบางเคาะหรือsti1Δcpr7Δคู่เคาะออก การศึกษา เรายืนยันว่า [PSI +] ฟีโนไทป์ก็ยังคงแน่นแฟ้นในสายพันธุ์เหล่านี้เป็นได้ [PSI +] การกำจัดโดยการเจริญเติบโตในวันที่ 5 มิลลิ GdnHCl (รูปที่ 2A) หลายรอบของการถ่ายเชื้อของสายพันธุ์เหล่านี้บนกลาง YEPD (> 40 ชั่วอายุ) ไม่ได้ผลในการปรากฏตัวของเซลล์พรีออนฟรี [psi-] ที่ นอกจากนี้การวิเคราะห์ของรัฐรวมตัวของ Sup35p ในแต่ละสายพันธุ์เหล่านี้และใน STI1 + สายพันธุ์ควบคุม CPR7 + เปิดเผยว่าสำหรับทั้งsti1Δและสายพันธุ์cpr7Δ, Sup35p พบเฉพาะในโมเลกุลส่วนน้ำหนักเม็ดสูงคล้ายกับผู้ปกครองซุง G600 ความเครียด (รูปที่ 2B) ในsti1Δcpr7Δสายพันธุ์ขนาดเล็กจำนวนมากที่ละลายน้ำได้ Sup35p ถูกตรวจพบเป็นประจำแม้ว่านี่จะไม่ได้ผลในการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญใด ๆ ในสีขาว Ade + ไร้สาระปราบปรามฟีโนไทป์ของสายพันธุ์นี้ ทั้งสี่สายพันธุ์ที่ตรวจสอบยังมีโพลีเมอระบบ SDS-ทน Sup35p (รูป 2C) ซึ่งเป็นลักษณะของ [PSI +] สายพันธุ์ (Kryndushkin et al., 2003) ดังนั้นการขาดอย่างใดอย่างหนึ่งหรือทั้งสอง Sti1p และ Cpr7p ไม่นำไปสู่ข้อบกพร่องใน [PSI +] การขยายพันธุ์ในเซลล์กลูโคสที่ปลูกในธรรมชาติหรือขนาดของระบบ SDS-ทนโพลีเมอ Sup35p ที่เกิดขึ้นในเซลล์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่าสิ่งที่บทบาท พวกเขาเล่นในเลตกิจกรรม Hsp104 กิจกรรมที่ไม่ได้เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับ [PSI +] การขยายพันธุ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และ sti1p cpr7p ไม่จำเป็นสำหรับการก่อตัวของ sup35p ที่มี SDS และป้องกันและมี sti1p cpr7p Co ผู้ดูแลที่ปรับผลของกิจกรรมของยีน ( SSA ) และประมาณ ( hsp82 ) ผู้ดูแลในยีสต์ ( loovers et al . , 2007 ; ริกเตอร์ et al . , 2003 ; เพลงและ masison , 2005 ; wegele et al . , 2003 ) แต่เป็นที่รู้จักกันเพื่อโต้ตอบกับ c-terminus ของ hsp104 ( Abbas terki et al . , 2001 ) ในกรณีของ hsp104 มันยังคงที่จะจัดตั้งขึ้นและไม่ว่า sti1p cpr7p มีส่วนร่วมกับกิจกรรมนี้ AAA + ATPase พี่เลี้ยงแม้ว่าการลบลำดับซึ่งของ hsp104 ซึ่งได้รับการยอมรับโดย บริษัท คนติดตาม ไม่ส่งผลต่อกิจกรรม hsp104 ( Mackay et al . , 2008 ) โดยยีน ( SSA ) ผู้ดูแลทำให้ประโยชน์ [ PSI + ] ขยายพันธุ์ ( Allen et al . , 2005 , เชอร์นอฟ et al . , 1999 , โจนส์ และ masison , 2003 , loovers et al . , 2007 , newnam et al . , 1999 ) และ sti1p และ cpr7p อาจคาดหวังที่จะมีส่วนร่วมในการแพร่ prion โดยทางอ้อมผ่านพี่เลี้ยงนี้ อย่างไรก็ตาม , [ + ] คือปกติ PSI จำนวนสายพันธุ์ ขาดอย่างใดอย่างหนึ่งหรือทั้งสองของเหล่านี้ประมาณ 70 / Co ผู้ดูแล ( Jones et al . , 2004 ) เราจึงตรวจสอบว่าพวกเขาจำเป็นสำหรับการมีประสิทธิภาพของ PSI [ + ] โดย hsp104 overexpression .ชุด g600 PSI ได้ [ + ] สายพันธุ์ ( ตารางที่ 1 ) แบกทั้งบุคคลและ sti1 Δ cpr7 Δเคาะลึกหนาบางหรือ sti1 Δ cpr7 Δคู่น็อคเอาท์ได้ เรายืนยันว่า [ + ] + PSI เป็นอย่างถาวรรักษาในสายพันธุ์เหล่านี้ คือ [ PSI + ] ตัด โดยการเติบโตใน 5 มม. gdnhcl ( รูปที่ 2A ) หลายรอบของการของสายพันธุ์เหล่านี้ในอาหารเลี้ยงเชื้อ medium ( > 40 รุ่น ) ไม่พบการปรากฏตัวของพรีออน PSI ฟรี [ − ] เซลล์ นอกจากนี้ การวิเคราะห์การเกาะกลุ่มของรัฐ sup35p ในแต่ละสายพันธุ์เหล่านี้ และใน sti1 + cpr7 + ควบคุมความเครียด พบว่า ทั้ง sti1 Δและสายพันธุ์Δ cpr7 sup35p , เท่านั้นที่ตรวจพบในระดับโมเลกุลเม็ดเศษ คล้ายกับ g600 พ่อแม่สายพันธุ์ ( รูปที่ 2B ) ในสายพันธุ์ sti1 Δ cpr7 Δจำนวนเล็ก ๆของปริมาณ sup35p ถูกตรวจพบ แม้ว่านี้ไม่ได้ส่งผลในการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญใด ๆในสีขาวเอด + ไร้สาระ + การปราบปรามของสายพันธุ์นี้ ทั้งหมด 4 สายพันธุ์ที่ตรวจยังมี SDS ทนพอลิเมอร์ของ sup35p ( รูปที่ 2 ) ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของ PSI [ + ] สายพันธุ์ ( kryndushkin et al . , 2003 ) ดังนั้น การขาดอย่างใดอย่างหนึ่ง หรือทั้งสอง sti1p cpr7p และไม่ก่อให้เกิดข้อบกพร่องใน [ PSI + ] เผยแพร่กลูโคสที่ปลูกเซลล์ในลักษณะหรือขนาดของ SDS ทน sup35p พอลิเมอร์ที่เกิดขึ้นในเซลล์เหล่านี้ แสดงให้เห็นว่า ไม่ว่าบทบาทพวกเขาเล่นใน hsp104 ของกิจกรรม กิจกรรมที่ไม่จำเป็นสำหรับ [ PSI + ] การขยายพันธุ์ .