Human B cell Burkit Lymphoma Rajice

Human B cell Burkit Lymphoma Raji
cells (purchased from Pasteur Institute of Iran)
were cultured in RPMI-1640 medium
containing 10% calf serum. Then the cells were
maintained at 37° C in a 5% CO2 air incubator
and with passage every day. Cell culture was
done under sterille conditions and below
laminar-hood. With removal of Raji cells from
flask stock through the use of trypan blue 0.4%
in a suspension of Raji cells,viability was more
than 97% (viability (%)= live cells/live cells
and dead cells x 100).
The other steps were the removal of 75µl
(15000 cell) from the suspension, transfering it
to 96-well plates. Then 10µl of different Zn
concentrations (10 nM -500µM) were added to
all wells except the controls. Under below
laminar-hood and sterille conditions, the plates
were shaken and mixed well. Then the cells
were maintained at 37° C in a 5% CO2 air
incubator. At the end of incubation times (12-
72h), viability and cell proliferation were
determined using both the trypan blue
exclusion dye and MTT assay2
. Also, cell
morphology was evaluated by Wright-Gimsa
staining.
Cytotoxic assay by MTT reduction
This was carried out using the MTTassay
described by Mosmann et al (11). According to
the test principles, the assay was based on the
clevage of the tetrazolium salt (MTT), in the
presence of an electron coupling reagent,by
active mitochondria.The water-insoluble
formazan salt produced has to be solubilized in
an additional step. Cells grown in a 96-well
plate, were incubated with the MTT solution
for approximately 4 hours. After the incubation
period, a water-insoluble formazan dye was
quantitaed using a spectorphotometer (ELISA
reader).The revealed absorbance was directly
correlated to the cell number.
Procedure
After the end-points of incubation time
(12-72 hours) at 37° C and 5% CO2, the Raji
cells were loaded with 10 freshly prepared and
Millipore filtered MTT (5mg/ml PBS) and
incubated for 4 hours at 25° C. After 4 hours of
incubation to each well, 100 µl of isopropanol
were added, and the O.D (optimal density) of
product was evaluated in an ELISA reader at
540 nm wevelengh after 15 minutes

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มนุษย์ B เซลล์ Raji คอลลา Burkitเซลล์ (ซื้อจากสถาบันปาสเตอร์ของอิหร่าน)มีอ่างใน RPMI 1640ประกอบด้วยเซรั่มลูก 10% จากนั้น เซลล์ได้รักษาที่ 37° C ในการบ่มเพาะวิสาหกิจอากาศ CO2 5%และกับ passage ทุกวัน เพาะเลี้ยงเซลล์ได้ภาย ใต้เงื่อนไข sterille และด้านล่างlaminar-ฮูด ด้วยการกำจัดเซลล์ Raji จากหุ้นหนาวโดยใช้ trypan blue 0.4%ในการระงับเซลล์ Raji ชีวิตมีมากขึ้นกว่า 97% (ชีวิต (%) =เซลล์สดเซลล์/สดกเซลล์ตาย x 100)ขั้นตอนอื่น ๆ ก็เอา 75µl(15000 เซลล์) จากการระงับ โอนได้การดี 96 แผ่น แล้ว 10µl ของ Zn ที่แตกต่างกันความเข้มข้น (10 nM-500µM) ถูกเพิ่มเข้าไปบ่อทั้งหมดยกเว้นตัวควบคุม ภายใต้ด้านล่างเงื่อนไข laminar ฮูดและ sterille แผ่นเขย่า และผสมกัน แล้วเซลล์ถูกจัดเก็บอยู่ที่ 37° C ในอากาศ 5% CO2บ่มเพาะวิสาหกิจ ที่สุดของคณะทันตแพทยศาสตร์เวลา (12-72 h), ชีวิตและเซลล์การงอกได้กำหนดโดยใช้ทั้งการ trypan blueแยกสีและ MTT assay2. ยัง เซลล์สัณฐานวิทยาถูกประเมิน โดยไรท์ Gimsaย้อมสีทดสอบ cytotoxic โดยลด MTTนี้ถูกดำเนินการโดยใช้การ MTTassayอธิบายโดย Mosmann et al (11) ตามที่หลักการทดสอบ การวิเคราะห์เป็นไปตามclevage tetrazolium เกลือ (MTT), ในการสถานะของอิเล็กตรอนการ coupling รีเอเจนต์ โดยmitochondria ทำงานอยู่ ไม่ละลายน้ำเกลือ formazan ที่ผลิตได้จะ solubilized ในขั้นตอนเพิ่มเติม เซลล์ที่โตใน 96-ดีแผ่น มี incubated ด้วยโซลูชัน MTTประมาณ 4 ชั่วโมง หลังจากที่คณะทันตแพทยศาสตร์ระยะเวลา ย้อม formazan ไม่ละลายน้ำได้quantitaed spectorphotometer (ELISA โดยใช้อ่าน) Absorbance ที่เปิดเผยได้โดยตรงcorrelated กับจำนวนเซลล์ขั้นตอนการหลังจาก end-points เวลาฟักตัว(12-72 ชั่วโมง) ที่ 37° C และ 5% CO2, Rajiเซลล์ถูกโหลด ด้วยสดเตรียม 10 และมากกรอง MTT (5mg/ml PBS) และincubated 4 ชั่วโมงที่ 25 องศาเซลเซียส หลังจาก 4 ชั่วโมงคณะทันตแพทยศาสตร์ไปละดี 100 µl ของ isopropanolเพิ่ม และ O.D (ความหนาแน่นสูงสุด) ของผลิตภัณฑ์ถูกประเมินในการอ่าน ELISA ที่540 nm wevelengh หลังจาก 15 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

B เซลล์ของมนุษย์ Burkit
มะเร็งต่อมน้ำเหลืองราจีเซลล์(ซื้อจากสถาบันปาสเตอร์อิหร่าน)
เพาะเลี้ยงในอาหาร RPMI-1640
ที่มีลูกวัวซีรั่ม 10% จากนั้นเซลล์ที่ถูกเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในศูนย์บ่มเพาะ CO2 อากาศ 5% และมีเนื้อเรื่องทุกวัน การเพาะเลี้ยงเซลล์ได้ทำภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้ sterille และเครื่องดูดควัน-ราบเรียบ กับการกำจัดของเซลล์ราจีจากหุ้นขวดผ่านการใช้ Trypan สีฟ้า 0.4% ในการระงับของเซลล์ราจีที่มีชีวิตได้มากขึ้นกว่า 97% (มีชีวิต (%) = เซลล์สด / เซลล์สดและเซลล์ที่ตายแล้วx 100). ขั้นตอนอื่น ๆ มีการกำจัดของ75μl (15,000 เซลล์) จากการระงับการโอนมันจะแผ่น96 หลุม จากนั้น10μlของสังกะสีที่แตกต่างกันมีความเข้มข้น (10 นาโนเมตร-500μM) ถูกเพิ่มเข้าไปในหลุมทั้งหมดยกเว้นการควบคุม ภายใต้ด้านล่างเครื่องดูดควัน-ราบเรียบและเงื่อนไข sterille, จานถูกเขย่าและเข้ากันดี จากนั้นเซลล์ที่ถูกเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน 5% CO2 อากาศศูนย์บ่มเพาะ ในตอนท้ายของเวลาการบ่ม (12 72H) ที่มีศักยภาพและเพิ่มจำนวนเซลล์ที่ถูกกำหนดโดยใช้ทั้งสีฟ้าTrypan สีย้อมและการยกเว้น MTT assay2 นอกจากนี้เซลล์สัณฐานถูกประเมินโดยไรท์ Gimsa ย้อมสี. การทดสอบพิษจากการลดลง MTT นี้ได้รับการดำเนินการโดยใช้ MTTassay อธิบายโดย Mosmann et al, (11) ตามหลักการการทดสอบการทดสอบที่ถูกขึ้นอยู่กับclevage เกลือ tetrazolium นี้ (MTT) ในการปรากฏตัวของสารอิเล็กตรอนมีเพศสัมพันธ์โดยไม่ละลายน้ำที่ใช้งานmitochondria.The เกลือ formazan ผลิตจะต้องมีการละลายในขั้นตอนเพิ่มเติม เซลล์ที่ปลูกใน 96 หลุมแผ่นถูกบ่มกับการแก้ปัญหาMTT ประมาณ 4 ชั่วโมง หลังจากบ่มระยะเวลาสี formazan ไม่ละลายน้ำได้ quantitaed ใช้ spectorphotometer (ELISA อ่าน) เปิดเผยการดูดกลืนแสงได้โดยเริ่มต้นได้โดยตรงความสัมพันธ์กับจำนวนเซลล์. ขั้นตอนหลังจากที่จุดสิ้นสุดของเวลาการบ่ม(12-72 ชั่วโมง) ที่ 37 ° ซีและ CO2 5% ที่ราจีเซลล์เต็มไปด้วย10 ที่เตรียมสดใหม่และคกรองMTT (5mg / ml พีบีเอส) และบ่มเป็นเวลา4 ชั่วโมง 25 องศาเซลเซียสหลังจาก 4 ชั่วโมงของการบ่มแต่ละดี100 ไมโครลิตรของ isopropanol ถูกเพิ่ม และ OD (ความหนาแน่นดีที่สุด) ของสินค้าที่ได้รับการประเมินในการอ่านวิธีELISA ที่540 นาโนเมตร wevelengh หลังจาก 15 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บี - เซลล์มะเร็งต่อมน้ำเหลืองของ burkit ราจิ
เซลล์ ( ซื้อจากสถาบันปาสเตอร์ของอิหร่าน )

rpmi-1640 เพาะเลี้ยงในอาหารที่มี 10% คาล์ฟซีรั่ม แล้วเซลล์ก็ไว้ที่ 37 องศา C
5% CO2 Incubator อากาศ
และมีเดินทุกวัน การเพาะเลี้ยงเซลล์ได้

และกระทำภายใต้เงื่อนไข sterille ด้านล่างแบบฮูด กับการกำจัดราจิเซลล์จาก
ขวดหุ้นผ่านการใช้ไตรแพนสีฟ้า 0.4%
ในเซลล์แขวนลอยของราจิ ความมีชีวิตได้มากขึ้น
กว่า 97% ( ความมีชีวิต ( % ) = เซลล์สด / สดเซลล์ที่ตายแล้วและเซลล์
x 100 ) .
ขั้นตอนอื่น ๆ คือ การกำจัด 75 µ L
( 15 , 000 เซลล์ ) จากการย้ายมัน
96 ด้วยแผ่น แล้ว 10 µลิตรความเข้มข้นของ Zn
แตกต่างกัน ( 10 nm - 500 µ M )

ทุกคนยกเว้นเพิ่มบ่อควบคุม ภายใต้เครื่องดูดควันแบบเงื่อนไขด้านล่าง

sterille , แผ่นสั่นสะเทือนและผสมดี จากนั้นเซลล์
ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 37 °องศาเซลเซียส 5% CO2 ในอากาศ
ตู้ฟักไข่ ในตอนท้ายของการบ่มครั้ง ( 12 -
72h ) ความมีชีวิตและเซลล์ proliferation )
หาได้โดยใช้ทั้งไตรแพนสีฟ้า
ยกเว้นสีและ MTT assay2

นอกจากนี้ เซลล์
สัณฐานวิทยาที่ประเมินโดยไรท์ gimsa

3
staining พิษโดยการลดการใช้ยา mttassay
อธิบายโดย mosmann et al ( 11 ) ตาม
หลักการทดสอบ การทดสอบตาม
clevage ของ tetrazolium เกลือ ( MTT ) ในสถานะของอิเล็กตรอนคู่

) ที่ใช้โดยงานที่ ไม่ละลายน้ำ
ปฏิบัติการเกลือที่ผลิตได้จะสร้างใน
ขั้นตอนเพิ่มเติม เซลล์ที่โตในจาน 96 ดี

ถูกบ่มกับ MTT โซลูชันประมาณ 4 ชั่วโมงหลังจากระยะฟักตัว
, ย้อมปฏิบัติการไม่ละลายน้ำคือ
quantitaed ใช้ spectorphotometer ( ELISA
อ่าน ) พบการดูดกลืนแสงโดยตรง มีความสัมพันธ์กับจำนวนเซลล์
.

หลังจากขั้นตอนที่จุดสิ้นสุดของระยะเวลา
( 12-72 ชั่วโมง ) ที่อุณหภูมิ 37 องศา C และคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ ราจิ
cells โหลด 10 การเตรียมสดและ
( 5 mg / ml มิลลิกรอง MTT พีบีเอส )
4 ชั่วโมงและบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาหลังจาก 4 ชั่วโมง
บ่มกัน 100 µ L ของไอโซโพรพานอล
เพิ่ม , และ o . D ( ความหนาแน่นที่เหมาะสมของผลิตภัณฑ์ที่ประเมินใน

อ่าน ELISA ที่ 540 nm wevelengh หลังจาก 15 นาที