Two hundred microliters of DNA-free water containing almost 400 mites, 3 individuals of E. kuehniella or 10 mm2 fungal suspension was placed into 2.0 ml conical-bottom screw-cap tubes (MagNA Lyser Green Beads, Rochediagnostics GmbH, Germany) containing 1.4 mm ceramic beads and 400 μl of lysis buffer from the NucleoSpin Plant II kit (Macherey-Nagel, Germany). The tubes were shaken in a MagNA Lyser Instrument (Roche Applied Science®, Germany) three times for ten seconds at the maximum speed, with one cooling minute in the cooling block. The tubes were then heated in a boiling water bath for 10 min. The samples were placed on ice for 10 min, followed by centrifugation for 2 min at 6000 ×g. DNA was then purified with NucleoSpin Plant II kit according to the manufacturer's instructions. The DNA concentration of each extract was determined by a dosage program (160 nm) with a spectrophotometer (ND-1000 Nanodrop, Thermo Fisher Scientific, USA).
สองร้อยสารละลายน้ำดีเอ็นเอฟรีที่มีเกือบ 400 ไร 3 บุคคลของอี kuehniella หรือ 10 mm2 เชื้อราระงับถูกวางลง 2.0 มล. กรวยล่างหลอดสกรูฝา (Magna Lyser เขียวลูกปัด, Rochediagnostics GmbH, เยอรมนี) ที่มี 1.4 มิลลิเมตร ลูกปัดเซรามิกและ 400 ไมโครลิตรของ buffer สลายจากชุด NucleoSpin พืช II (Macherey-แจคกี้, เยอรมนี) หลอดสะเทือนสะท้านใน Magna Lyser เครื่องดนตรี (โรชวิทยาศาสตร์ประยุกต์®, เยอรมนี) สามครั้งเป็นเวลาสิบวินาทีที่ความเร็วสูงสุดที่มีการระบายความร้อนหนึ่งนาทีในบล็อกระบายความร้อน หลอดที่ถูกความร้อนแล้วในการอาบน้ำในน้ำเดือดนาน 10 นาที กลุ่มตัวอย่างที่ถูกวางไว้บนน้ำแข็งเป็นเวลา 10 นาทีตามด้วยการปั่นแยกเป็นเวลา 2 นาทีที่ 6000 ×กรัม ดีเอ็นเอบริสุทธิ์แล้วกับชุด NucleoSpin พืชที่สองตามคำแนะนำของผู้ผลิต ความเข้มข้นของดีเอ็นเอของสารสกัดแต่ละคนถูกกำหนดโดยโปรแกรมปริมาณ (160 นาโนเมตร) ที่มี Spectrophotometer (ND-1000 Nanodrop, เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์, สหรัฐอเมริกา)
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)