Trypsin activity assayAmidase activ

Trypsin activity assay
Amidase activity was measured according to the method of Erlanger,
Kokowsky, and Cohen (1961), modified by Benjakul, Visessanguan,
and Thummaratwasik (2000), using BAPNA as a
substrate. An aliquot of the trypsin solution (200 ll), with an
appropriate dilution, was added to the pre-incubated reaction mixture
containing 1000 lL of 0.5 mM BAPNA in reaction buffer (0.1 M
glycine–NaOH, pH 9.5) and 200 lL of distilled water. The mixture
was incubated for 10 min at 60 C. The enzymatic reaction was terminated
by adding 200 lL of 30% acetic acid, and centrifuged at
8000g for 3 min at room temperature. Trypsin activity was measured
by the absorbance at 410 nm due to p-nitroaniline released.
Trypsin amidase activity was calculated using the following
formula:

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดสอบกิจกรรมทริปซินAmidase กิจกรรมที่วัดตามวิธีการของ ErlangerKokowsky และโคเฮน (1961), แก้ไข โดย Benjakul, Visessanguanและ Thummaratwasik (2000), ใช้ BAPNA เป็นการพื้นผิว เป็นส่วนลงตัวของโซลูชั่นทริปซิน (200 จะ), มีการเจือจางที่เหมาะสม ถูกเพิ่มส่วนผสมปฏิกิริยาก่อน incubatedประกอบด้วย 1000 จะ 0.5 มม. BAPNA ในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา (0.1 Mglycine-NaOH, pH 9.5) และ 200 จะของน้ำกลั่น ส่วนผสมถูก incubated สำหรับ 10 นาทีที่ 60 c ปฏิกิริยาเอนไซม์ในระบบถูกยกเลิกโดยการเพิ่ม 200 จะ 30% กรดน้ำส้ม และ centrifuged ที่g 8000 สำหรับ 3 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ทริปซินกิจกรรมที่วัดโดย absorbance ที่ 410 nm เนื่องจากออก nitroaniline pทริปซิน amidase กิจกรรมถูกคำนวณโดยใช้ต่อไปนี้สูตร:

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรมทดสอบ trypsin
Amidase กิจกรรมวัดตามวิธีการของเลน
Kokowsky และโคเฮน (1961) แก้ไขโดยเบญจกุล, Visessanguan,
และ Thummaratwasik (2000) โดยใช้ BAPNA
เป็นสารตั้งต้น aliquot ของการแก้ปัญหา trypsin (200 LL)
โดยมีการลดสัดส่วนที่เหมาะสมเพิ่มขึ้นผสมปฏิกิริยาก่อนบ่มที่มี
1,000 LL 0.5 มิลลิ BAPNA ในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา (0.1 M
glycine-NaOH ค่า pH 9.5) และ 200 LL ของกลั่น น้ำ ส่วนผสมที่ถูกบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 60 องศาเซลเซียส
ปฏิกิริยาของเอนไซม์ถูกยกเลิกโดยการเพิ่ม 200 LL 30% กรดอะซิติกและหมุนเหวี่ยงที่ 8000G เป็นเวลา 3 นาทีที่อุณหภูมิห้อง กิจกรรม trypsin วัดโดยการดูดกลืนแสงที่410 นาโนเมตรเนื่องจากการพี nitroaniline ออก. กิจกรรม trypsin amidase ที่คำนวณได้ใช้ต่อไปนี้สูตร:

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรมในทริป
amidase กิจกรรมได้ตามวิธีการของเอร์แลเงอร์
, kokowsky และโคเฮน ( 1961 ) , แก้ไขโดยเฉพาะ visessanguan
, , และ thummaratwasik ( 2000 ) , การใช้ bapna เป็น
พื้นผิว เป็นส่วนลงตัวของการแช่ในสารละลาย ( 200 จะ ) มีการเจือจางที่เหมาะสม
, เพิ่มก่อนบ่มปฏิกิริยาผสม
1000 จะ 0.5 มม. bapna ในบัฟเฟอร์ ( 0.1 M
ปฏิกิริยาไกลซีน ( NaOH , pH 9.5 ) และ 200 จะกลั่นน้ำ ส่วนผสม
ถูกบ่มสำหรับ 10 นาทีที่ 60  C . ปฏิกิริยาเอนไซม์ถูกยกเลิก
โดยเพิ่ม 200 จะ 30 % กรดไฟฟ้าที่
8000g สำหรับ 3 นาทีที่อุณหภูมิห้อง กิจกรรมทริปวัด
โดยการดูดกลืนแสงที่ 410 nm เนื่องจาก p-nitroaniline ปล่อยตัว
กิจกรรมทริป amidase คำนวณโดยใช้สูตรดังต่อไปนี้
: