2.4. Phytase assayPhytase activity

2.4. Phytase assay
Phytase activity was measured in terms of inorganic ortophosphate released from the phytic acid by phytase, using a modification of the method of Fiske and Subbarow (Fiske & Subbarow, 1925). A reaction mixture containing 150 mL of cell-free supernatant, cellular crude protein extract and 600 mL of substrate (3 mmol/ L Na-phytate in 0.2 mol/L Na-acetate buffer, pH 4.0) was incubated at 37 C. After 30, 60, 90,120 and 180 min, the reaction was stopped adding 750 mL of 5% (v/v) trichloroacetic acid (Sigma). The released inorganic phosphate was measured by adding 750 mL of colour reagent prepared daily by mixing four volumes of 1.5% ( w/v ) ammonium molybdate (Sigma) in a 5.5% (v/v) sulphuric acid solution (Carlo Erba Reagenti, Milan, Italy) and one volume of a 2.7 % (w/v) ferrous sulphate (Sigma) solution. The absorbance was measured at 700 nm. One U of phytase activity was defined as the amount of enzyme (contained in the initial volume of a stationaryphase culture of ca. 9.0 log CFU/mL of medium) required to liberate 1 mmol/L of phosphate per min at pH 4.0 and 37 C. The specific phytase activity was defined as U per mg of protein.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. โอสเตบิลวิเคราะห์กิจกรรมโอสเตบิลถูกวัดนินทรีย์ ortophosphate ออกจากกรดไฟติก โดยใช้การเปลี่ยนแปลงวิธีการฟิกส์และ Subbarow (ฟิกส์และ Subbarow, 1925) โอสเตบิล ส่วนผสมปฏิกิริยาที่ประกอบด้วย 150 มล.สารสกัดโปรตีนเซลล์ฟรี supernatant เซลลูลาร์ และ 600 มิลลิลิตรของพื้นผิว (3 mmol / L Na-phytate ในบัฟเฟอร์ acetate นา 0.2 mol/L ค่า pH 4.0) incubated ที่ 37 c หลังจาก 30, 60, 90,120 และ 180 นาที ปฏิกิริยาถูกหยุดเพิ่ม 750 มล.ของ 5% (v/v) trichloroacetic กรด (Sigma) ฟอสเฟตอนินทรีย์ที่ออกโดยวัดจากการเพิ่ม 750 มล.ของสารสีไว้ ด้วยผสมสี่ปริมาณ 1.5% (w/v) แอมโมเนีย molybdate (Sigma) ใน 5.5% (v/v) ซัลฟูริกกรดโซลูชัน (Carlo Erba Reagenti มิลาน อิตาลี) และไดรฟ์ข้อมูลหนึ่งของโซลูชันซัลเฟตเหล็ก (Sigma) 2.7% (w/v) ค่าที่ถูกวัดที่ 700 nm กำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ (มีอยู่ในปริมาณเริ่มต้นของวัฒนธรรม stationaryphase ของ ca. 9.0 ล็อก CFU/mL ของกลาง) จำเป็นต้องปลดปล่อย 1 mmol/L ของฟอสเฟตต่อนาทีที่ pH 4.0 และ 37 C. U หนึ่งกิจกรรมโอสเตบิล กิจกรรมโอสเตบิลเฉพาะถูกกำหนดเป็น U ต่อมิลลิกรัมโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 phytase ทดสอบ
กิจกรรม phytase วัดในแง่ของ ortophosphate นินทรีย์ปล่อยออกมาจากกรดไฟติกโดย phytase โดยใช้การปรับเปลี่ยนวิธีการและ Fiske Subbarow (Fiske & Subbarow, 1925) ที่ ส่วนผสมที่มีปฏิกิริยา 150 มิลลิลิตรใสปราศจากเซลล์, สารสกัดจากโปรตีนของเซลล์และ 600 มิลลิลิตรของพื้นผิว (3 มิลลิโมล / ลิตรนาไฟเตทใน 0.2 mol / L นาอะซิเตตบัฟเฟอร์ค่า pH 4.0) ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสหลังจาก 30 , 60, 90,120 และ 180 นาทีปฏิกิริยาก็หยุดเพิ่ม 750 มล 5% (v / v) กรดไตรคลอโร (ซิกม่า) ปล่อยฟอสเฟตอนินทรีวัดโดยการเพิ่ม 750 มลสารสีเตรียมทุกวันโดยการผสมสี่เล่ม 1.5% (w / v) โมลิบแอมโมเนียม (Sigma) ใน 5.5% (v / v) สารละลายกรดซัลฟูริก (Carlo Erba Reagenti, มิลาน อิตาลี) และปริมาณหนึ่งของ 2.7% (w / v) เฟอรัสซัลเฟต (ซิกม่า) วิธีการแก้ปัญหา ค่าการดูดกลืนวัดที่ 700 นาโนเมตร หนึ่งของกิจกรรม U phytase ถูกกำหนดเป็นจำนวนเงินของเอนไซม์ (ที่มีอยู่ในปริมาณเริ่มต้นของวัฒนธรรม stationaryphase ของแคลิฟอร์เนีย 9.0 log CFU / mL ของกลาง) ที่จำเป็นเพื่อปลดปล่อย 1 มิลลิโมล / ลิตรของฟอสเฟตต่อนาทีที่ pH 4.0 และ 37 C . กิจกรรม phytase เฉพาะถูกกำหนดเป็น U ต่อมิลลิกรัมโปรตีน