The porcine intestinal epithelium i

The porcine intestinal epithelium is a primary target for mycotoxin deoxynivalenol (DON) and
lipopolysaccharides (LPS). Although epithelial cells are exposed to these toxins mainly from the luminalchyme
compartment an exposure from the blood side resulting from systemic absorption cannot be
excluded. Thus, we investigated the effect of DON and LPS, alone or combined, on porcine intestinal
epithelial cells IPEC-J2 on a transcriptional, translational and functional level when administered either
from apical or basolateral.
IPEC-J2 cells were cultured on 12-well inserts in complete medium at 5% CO2 and 39 C and subjected to
following treatments: control (CON), 2000 ng/mL DON, 1 mg/mL LPS or DON + LPS for 72 h, either from
apical or basolateral. Transepithelial electrical resistance (TEER), protein and IL-8 content were measured
and microarray analysis, qRT-PCR (IL-8, zonula occludens-1 ZO-1, b-actin), Western Blot (ZO-1, b-actin)
and immunofluorescence (ZO-1) were performed. Data of at least three independent experiments were
analysed with ANOVA and Dunnett’s post hoc test.
Basolateral DON resulted in significantly lower cell counts (p < 0.05) with larger cells (p < 0.01),
whereas apical DON reduced total (p < 0.001) and specific protein content (IL-8 content CON vs. DON:
2378 pg/3 mL vs. 991 pg/3 mL; p < 0.001). Transcripts of ß-actin and ZO-1 were significantly upregulated
in response to DON, irrespective of direction, whereas IL-8 mRNA remained unaffected. However, ZO-1
spatial distribution in the tight junction and its function (TEER) were detrimentally affected by
basolateral DON only. In conclusion, direction of DON exposure affected IPEC-J2 differently on a
translational and functional level, but was mainly inconsequential on a transcriptional level.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Epithelium ลำไส้ช่วงเป็นเป้าหมายหลักสำหรับพิษจากเชื้อรา deoxynivalenol (ดอน) และlipopolysaccharides (LPS) แม้ว่า epithelial เซลล์จะสัมผัสกับสารพิษเหล่านี้ส่วนใหญ่มาจาก luminalchymeช่องแสงจากด้านเลือดที่เกิดจากระบบดูดซึมไม่ได้แยกออก ดังนั้น เราตรวจสอบผลของดอนและ LPS เพียงอย่างเดียว หรือ รวม ในช่วงลำไส้epithelial เซลล์ J2 IPEC ในระดับ transcriptional, translational และทำงานเมื่อจัดการอย่างใดอย่างหนึ่งจากปลายยอด หรือ basolateralเซลล์ IPEC J2 อ่างบน 12 ดีแทรกอยู่ในสื่อสมบูรณ์ 5% CO2 และ 39 C และต้องต่อการรักษา: ควบคุม (แอร์), 2000 ng/mL ดอน 1 mg/mL LPS หรือดอน + LPS สำหรับ h 72 จากปลายยอด หรือ basolateral วัดความต้านทานไฟฟ้า Transepithelial (TEER), โปรตีน และ IL-8 เนื้อหาและวิเคราะห์ microarray, qRT PCR (IL-8, zonula occludens-1 ZO-1 แอกตินบี), เวสเทิร์นทำลาย (ZO-1, b-แอกติน)และดำเนิน immunofluorescence (ZO-1) มีข้อมูลการทดลองที่ 3 อิสระanalysed กับการวิเคราะห์ความแปรปรวนและของ Dunnett ทดสอบ post hocดอน Basolateral ให้ต่ำจำนวนเซลล์ (p < 0.05) มีเซลล์ขนาดใหญ่ (p < 0.01),ในขณะที่ดอนปลายยอดลดลงทั้งหมด (p < 0.001) และโปรตีนเฉพาะ (IL-8 เนื้อหาเทียบกับคอนดอน:2378 pg/3 mL เทียบกับ 991 pg/3 mL พี < 0.001) ใบแสดงผลของแอกตินบาทและ ZO-1 ถูกมาก upregulatedตอบ ดอนบกของทิศทาง ในขณะที่ mRNA IL-8 ยังคงยก อย่างไรก็ตาม ZO-1กระจายในเชื่อมต่อแน่นและหน้าที่ (TEER) ได้รับผลกระทบโดย detrimentallybasolateral ดอนเท่านั้น เบียดเบียน ทิศทางของแสงดอนผล IPEC J2 แตกต่างกันในการระดับการทำงาน และ translational แต่นั้นขึ้นเป็นส่วนใหญ่ในระดับ transcriptional

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เยื่อบุผิวลำไส้หมูเป็นเป้าหมายหลักสำหรับสารพิษจากเชื้อรา deoxynivalenol (DON) และ
lipopolysaccharides (LPS) แม้ว่าเซลล์เยื่อบุผิวมีการสัมผัสกับสารพิษเหล่านี้ส่วนใหญ่มาจาก luminalchyme ช่องเปิดรับแสงจากด้านในเลือดที่เกิดจากการดูดซึมของระบบไม่สามารถได้รับการยกเว้น ดังนั้นเราจึงตรวจสอบผลกระทบของ DON และ LPS คนเดียวหรือรวมกันในสุกรลำไส้เซลล์เยื่อบุผิวIPEC-J2 ในการถอดรหัส, แปลและระดับการทำงานเมื่อผู้ทั้งจากปลายหรือbasolateral. เซลล์ IPEC-J2 มาเลี้ยงบนแทรก 12 ดี ในสื่อที่สมบูรณ์ CO2 5% และ 39 ซีและยัดเยียดให้? การรักษาต่อไปนี้: การควบคุม (CON) 2,000 นาโนกรัม / มิลลิลิตร DON 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร LPS หรือ DON + LPS 72 ชั่วโมงทั้งจากปลายหรือbasolateral ความต้านทานไฟฟ้า Transepithelial (Teer) โปรตีนและ IL-8 การวัดและการวิเคราะห์microarray, qRT-PCR (IL-8, zonula occludens-1 ZO-1, B-โปรตีน) ดวงตะวัน (ZO-1, B-โปรตีน ) และอิมมูโน (ZO-1) ได้ดำเนินการ ข้อมูลอย่างน้อยสามทดลองที่เป็นอิสระได้รับการวิเคราะห์ด้วย ANOVA และ Dunnett ทดสอบเฉพาะกิจโพสต์. Basolateral DON ผลในการลดลงจำนวนเซลล์ (p <0.05) กับเซลล์ที่มีขนาดใหญ่ (p <0.01) ขณะที่ยอด DON ลดลงรวม (p <0.001) และ ปริมาณโปรตีนที่เฉพาะเจาะจง (IL-8 เนื้อหา CON กับ DON: 2378 pg / 3 มิลลิลิตรเทียบกับ 991 pg / มิลลิลิตร 3; p <0.001) ใบรับรองผลการเรียนของ SS-โปรตีนและ ZO-1 ถูก upregulated อย่างมีนัยสำคัญในการตอบสนองDON โดยไม่คำนึงถึงทิศทางในขณะที่ mRNA IL-8 ยังคงได้รับผลกระทบ อย่างไรก็ตาม ZO-1 กระจายเชิงพื้นที่ในชุมแน่นและฟังก์ชั่น (Teer) ได้รับผลกระทบโดยพอได้basolateral DON เท่านั้น สรุปได้ว่าทิศทางของการเปิดรับผลกระทบ DON IPEC-J2 ที่แตกต่างกันในการแปลและระดับการทำงานแต่ก็ไม่สำคัญส่วนใหญ่ในระดับการถอดรหัส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เยื่อบุผิวลำไส้สุกรเป็นเป้าหมายหลักสำหรับ deoxynivalenol สารพิษจากเชื้อรา ( ดอน ) และ
lipopolysaccharides ( หล่อลื่น ) ถึงแม้ว่าเซลล์เยื่อสัมผัสกับสารพิษเหล่านี้ส่วนใหญ่มาจาก luminalchyme
ช่องมีแสงจากด้านข้าง เลือดที่เกิดจากการดูดซึม systemic ไม่สามารถ
แยกออก ดังนั้นเราจึงได้ทำการศึกษาผลของ ดอน และ สเปรย์หล่อลื่น คนเดียวหรือรวมกันบน
ลำไส้สุกรในเซลล์เยื่อ ipec-j2 particle แปล , และการทำงานระดับเมื่อยเหมือนกัน
จากยอด หรือ basolateral .
ipec-j2 เซลล์เพาะเลี้ยงบนดีแทรกในสื่อสมบูรณ์ที่ 5% CO2 และ 39  C และภายใต้
ต่อไปนี้รักษา ควบคุม ( CON ) 2000 ng / ml ดอน , LPS 1 mg / ml หรือ ก็สเปรย์หล่อลื่นสำหรับ 72 ชั่วโมง ทั้งจาก
ยอดหรือ basolateral .ต้านทานไฟฟ้า transepithelial ( เตี้ย ) , โปรตีนและ 8 วัด และการวิเคราะห์เนื้อหา
, ( 8 ) , ข้าพเจ้า zonula occludens-1 zo-1 b-actin Western blot , ) , ( zo-1 b-actin
, D ) และ ( zo-1 ) การวิจัย ข้อมูลอย่างน้อย 3 การทดลอง คือ วิเคราะห์ข้อมูลด้วยการวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) และอิสระ
Dunnett โพสต์ hoc test .
basolateral ก็มีผลในการลดเซลล์นับอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( P < 0.05 ) กับเซลล์ขนาดใหญ่ ( p < 0.01 ) ส่วนยอดไม่ลด
( p < 0.001 ) และโปรตีนที่เฉพาะเจาะจง ( 8 เนื้อหา con กับดอน :
2183 pg / 3 ml . 991 PG / 3 มล. ; p < 0.001 ) ประวัติของß - actin และ zo-1 อย่างมีนัยสำคัญในการตอบสนองไม่ upregulated
โดยไม่คำนึงถึงทิศทาง ส่วนนี้อาจยังคงได้รับผลกระทบอย่างไรก็ตาม zo-1
การกระจายทางพื้นที่ในชุมทางคับและหน้าที่ ( เตี้ย ) ส่งผลกระทบโดย
basolateral ก็เท่านั้น สรุป ทิศทางของแสงที่ได้รับผลกระทบไม่ ipec-j2 แตกต่างกันบน
แปลและการทำงานระดับ แต่ส่วนใหญ่เล็กน้อยในระดับลอง .