This procedure was approved by the

This procedure was approved by the Institutional Committee
for Care and Handling of Experimental Animals of the Universidad
de Costa Rica (CICUA # 19–06). Sprague-Dawley rats
(220 g  20 g), which were obtained from LEBi1 (Laboratorio de
ensayos biolo´ gicos, Universidad de Costa Rica), were anesthetized
with CO2 and sacrificed by decapitation. The liver tissue of each rat
was obtained and homogenized in phosphate-buffered saline (PBS
0.01 M, pH 7.2) using Ultraturrax T-25 equipment (Ika-Labortechnik,
Staufen, Germany) to obtain a 20% tissue suspension. The suspension
was centrifuged at 9000  g for 15 min to reduce the suspended
solids. Seventy-five microliters of different concentrations of the
polyphenol extracts (5.4–171 mg/mL) were added to 0.75 mL of liver
supernatant and incubated for 30 min at 37 8C. Subsequently,
oxidative stress was induced with TBHP at a final concentration of
1.7 mM and incubated for 1 h at 37 8C. Finally, TBARS were measured
as the end products of lipid peroxidation.
TBARS were assayed according to Uchiyama and Mihara
(1978). Briefly, 0.25 mL of liver homogenate, 0.25 mL of 35% TCA
and 0.25 mL of Tris–HCl buffer (50 mM, pH 7.4) were mixed and
incubated for 10 min at room temperature. Then, 0.5 mL of 0.75%
TBA was added and heated at 100 8C for 45 min. After cooling,
0.5 mL of 70% TCA was added, and the solution was mixed and
centrifuged at 2500  g for 15 min. The absorbance of the
supernatant was measured at 532 nm. The TBARS concentration
was calculated as described previously, and the results were
expressed as nmol MDA/g liver tissue. MDA concentrations were
plotted against the sample concentration to calculate the IC50.
The assay was performed using liver tissue from 5 rats. To
establish the basal level of lipid peroxidation, MDA levels without
TBPH were assessed in each liver homogenate. Sample blanks were
prepared for each experiment. Samples were tested in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กระบวนการนี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการสถาบันการดูแลและจัดการสัตว์ทดลองของ Universidadเดอคอสตาริก้า (CICUA #19-06) หนู Sprague Dawley(220 กรัม 20 กรัม), ซึ่งได้รับมาจาก LEBi1 (Laboratorio deensayos biolo´ gicos, Universidad de คอสตาริกา), ได้ด้วยมี CO2 และเสียสละ โดย decapitation เนื้อเยื่อตับของหนูแต่ละรับ และ homogenized ในบัฟเฟอร์ฟอสเฟตเกลือ (PBS0.01 M ค่า pH 7.2) โดยใช้อุปกรณ์ Ultraturrax T-25 (สควิด-LabortechnikStaufen เยอรมนี) เพื่อระงับเนื้อเยื่อ 20% ระบบกันสะเทือนถูกเหวี่ยงที่ 9000 กรัม 15 นาทีลดการระงับของแข็ง Microliters เจ็ดสิบห้าของความเข้มข้นแตกต่างกันของการเพิ่มสารสกัดจากฟีนอ (5.4-171 mg/mL) 0.75 มล.ของตับsupernatant และได้รับการกก 30 นาทีที่ 37 8C. ต่อมาความเครียดออกซิเดชันถูกเหนี่ยวนำ ด้วย TBHP ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ1.7 มิลลิเมตร และได้รับการกก 1 ชั่วโมงที่ 37 8C. ในที่สุด มีการวัดค่า TBARSเป็นผลิตภัณฑ์ที่สิ้นสุดของ peroxidation ของไขมันTBARS ที่ assayed Uchiyama และมิ(1978) สั้น ๆ 0.25 mL ของตับ homogenate, 0.25 mL 35% TCAและรวม 0.25 mL ของบัฟเฟอร์ทริ – HCl (50 มม. ค่า pH 7.4) และได้รับการกกสำหรับ 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง 0.75% แล้ว 0.5 mLTBA เพิ่ม และ 8C 100 สำหรับ 45 นาที หลังจากทำความเย็น0.5 mL 70% TCA เพิ่ม และการแก้ไขที่ถูกผสม และเหวี่ยงที่ 2500 g 15 นาที Absorbance ของการมีวัด supernatant ที่ 532 nm ความเข้มข้น TBARSคำนวณตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ และผลลัพธ์ได้แสดงเป็นนาโนโมลเนื้อเยื่อตับเตอร์ MDA/g มีความเข้มข้นเตอร์ MDAการวางแผนกับความเข้มข้นตัวอย่างการคำนวณ IC50การทดสอบทำโดยใช้เนื้อเยื่อของตับจากหนู 5 ถึงสร้างระดับแรกเริ่มการ peroxidation ของไขมัน ระดับเตอร์ MDATBPH ได้รับการประเมินในแต่ละ homogenate ตับ มีช่องว่างตัวอย่างเตรียมไว้สำหรับแต่ละการทดลอง ตัวอย่างที่ทดสอบลข้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขั้นตอนนี้ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการของสถาบันการดูแลและการจัดการสัตว์ทดลองของเอกอัครราชทูตเดอคอสตาริกา ( cicua # 19 – 06 ) หนู Sprague ดอว์ลีย์( 220 กรัม 20 กรัม ซึ่งได้จาก lebi1 ( laboratorio เดอensayos biolo ใหม่ gicos , Universidad de Costa Rica ถูกวางยาสลบ )กับ CO2 และเสียสละโดยการตัดหัว . เนื้อเยื่อของตับในหนูและได้รับในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS บดเกลือ0.01 M pH 7.2 ) การใช้อุปกรณ์ t-25 ultraturrax labortechnik ( อิกะ ,Staufen , เยอรมนี ) ได้รับการระงับเนื้อเยื่อเป็น 20% ระงับคือระดับที่ 9000 กรัม 15 นาทีเพื่อลดชั่วคราวของแข็ง เจ็ดสิบห้าตัวเลขของระดับความเข้มข้นของโพลีฟีนอล สารสกัด ( 5.4 ) 171 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) และ 0.75 ml ของตับนำโดย 30 นาทีที่ 37 8C ภายหลังความเครียดออกซิเดชันถูกชักจูงด้วย tbhp ที่ความเข้มข้นสุดท้าย1.7 มิลลิเมตร และบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 8C สุดท้าย โดยวัดเป็นวัดเป็นผลิตภัณฑ์จากการเกิด lipid peroxidationโดยวัดเป็นปริมาณตามอูชิยาม่า และค้นหา( 1978 ) สั้น ๆ , 0.25 ml ตับปริมาณ 0.25 ml 35 % TCAและ 0.25 มิลลิลิตร หรือบัฟเฟอร์ ( 50 มม. ) กรดไฮโดรคลอริก pH 7.4 ) ผสมบ่มเป็นเวลา 10 นาที ที่อุณหภูมิห้อง แล้ว 0.5 ml 0.75 %TBA เพิ่มและความร้อนที่ 100 8C 45 นาที หลังเย็น0.5 ml 70% บริษัทก็เพิ่ม และสารละลายผสมและระดับที่ 2 , 500 กรัม เป็นเวลา 15 นาที มีการดูดกลืนแสงของน่าน เป็นวัดที่ 532 นาโนเมตร ปกติที่ความเข้มข้นคำนวณตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ และผลลัพธ์คือแสดงเป็น ? MDA / กรัมเนื้อเยื่อตับ ความเข้มข้นน้ำตาลวางแผนกับตัวอย่างของการคำนวณ ic50 .วิเคราะห์การใช้เยื่อจากตับ 5 หนู เพื่อสร้างระดับแรกเริ่มของการเกิด lipid peroxidation ระดับโดยไม่ต้องน้ำตาล ,tbph มีการประเมินในแต่ละตับอน . ช่องว่างคือตัวอย่างเตรียมไว้สำหรับแต่ละการทดลอง ตัวอย่างทดสอบทั้งสามใบ