PCR-based clinical and forensic tes

PCR-based clinical and forensic tests often have low sensitivity or even false-negative results caused by potent PCR inhibitors found in blood and soil. It is widely accepted that purification of target DNA before PCR is necessary for successful amplification. In an attempt to overcome PCR inhibition, enhance PCR amplification, and simplify the PCR protocol, we demonstrate improved PCR-enhancing cocktails containing nonionic detergent, l-carnitine, d-(+)-trehalose, and heparin. These cocktails, in combination with two inhibitor-resistant Taq mutants, OmniTaq and Omni Klentaq, enabled efficient amplification of exogenous, endogenous, and high-GC content DNA targets directly from crude samples containing human plasma, serum, and whole blood without DNA purification. In the presence of these enhancer cocktails, the mutant enzymes were able to tolerate at least 25% plasma, serum, or whole blood and as high as 80% GC content templates in PCR reactions. These enhancer cocktails also improved the performance of the novel Taq mutants in real-time PCR amplification using crude samples, both in SYBR Green fluorescence detection and TaqMan assays. The novel enhancer mixes also facilitated DNA amplification from crude samples with various commercial Taq DNA polymerases.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดสอบทางคลินิก และนิติเวชใช้ PCR มักจะมีความไวต่ำหรือผลเป็นลบเท็จที่เกิดจากสารยับยั้ง PCR มีศักยภาพที่พบในเลือดและดิน เป็นที่ยอมรับกันอย่างแพร่หลายทำให้บริสุทธิ์ของเป้าหมายดีเอ็นเอก่อน PCR จำเป็นสำหรับการขยายความสำเร็จ ในความพยายามที่จะเอาชนะยับยั้ง PCR เพิ่มปลัก และทำให้โพรโทคอล PCR เราสาธิตการปรับปรุงพัฒนา PCR ค็อกเทลที่ประกอบด้วยผงซักฟอก nonionic, l-คาร์นีทีน d- (+) -trehalose และเฮ ค๊อกเทลเหล่านี้ กับสองทนยับยั้ง Taq กลายพันธุ์ OmniTaq และ Omni Klentaq เปิดใช้งานการขยายประสิทธิภาพ ของภายนอก ภายนอก GC สูงเนื้อหาดีเอ็นเอเป้าหมาย และจากตัวอย่างน้ำมันดิบประกอบ ด้วยพลาสมา เซรั่ม เลือดไม่บริสุทธิ์ดีเอ็นเอโดยตรง ในค็อกเทลนี้เพิ่ม เอนไซม์กลายพันธุ์ได้มีการยอมรับอย่างน้อย 25% พลา เซรั่ม หรือเลือด และสูงถึง 80% GC แม่แบบเนื้อหาในปฏิกิริยา PCR ค็อกเทลเพิ่มเหล่านี้ยังปรับปรุงประสิทธิภาพของการกลายพันธุ์ Taq นวนิยายในปลักแบบเรียลไทม์โดยใช้ตัวอย่างน้ำมันดิบ ทั้ง ในการตรวจจับสารเรืองแสง SYBR Green และ TaqMan assays ผสมเพิ่มนวนิยายยังอำนวยขยายดีเอ็นเอจากตัวอย่างน้ำมันดิบ polymerases Taq DNA พาณิชย์ต่าง ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PCR-based ทดสอบทางคลินิกและทางนิติเวชมักจะมีความไวต่ำหรือแม้กระทั่งผลการเท็จเชิงลบที่เกิดจากการที่มีศักยภาพมี inhibitor พบในเลือดและดิน เป็นที่ยอมรับกันอย่างกว้างขวางว่าการทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอเป้าหมายก่อน PCR เป็นสิ่งที่จำเป็นสำหรับการขยายที่ประสบความสำเร็จ ในความพยายามที่จะเอาชนะการยับยั้ง PCR เพิ่มขยาย PCR และลดความซับซ้อนของโปรโตคอล PCR เราแสดงให้เห็นถึงการปรับปรุง PCR-เพิ่มเครื่องดื่มค็อกเทลที่มีส่วนผสมของสารลดแรงตึงผงซักฟอก, L-Carnitine, D - (+) - ทรีฮาโลและเฮ เครื่องดื่มค็อกเทลเหล่านี้ในการรวมกันกับสองยับยั้งการกลายพันธุ์ที่ทน Taq, OmniTaq และ Omni Klentaq เปิดการใช้งานที่มีประสิทธิภาพของเครื่องขยายเสียงภายนอกภายนอกและสูง GC ​​เป้าหมายดีเอ็นเอเนื​​้อหาโดยตรงจากตัวอย่างน้ำมันดิบที่มีพลาสม่าของมนุษย์, เซรั่มและเลือดทั้งหมดโดยไม่บริสุทธิ์ดีเอ็นเอ ในการปรากฏตัวของเครื่องดื่มค็อกเทลเพิ่มเหล่านี้เอนไซม์กลายพันธุ์ก็สามารถที่จะทนต่อพลาสม่าอย่างน้อย 25%, เซรั่มหรือเลือดและสูงที่สุดเท่าที่ 80% แม่แบบเนื้อหา GC ปฏิกิริยา PCR เหล่านี้เครื่องดื่มค็อกเทลเพิ่มยังมีการปรับปรุงประสิทธิภาพการทำงานของการกลายพันธุ์ Taq นวนิยายในแบบ real-time PCR ขยายโดยใช้ตัวอย่างน้ำมันดิบทั้งใน SYBR การตรวจสอบการเรืองแสงสีเขียวและการตรวจ TaqMan นวนิยายเพิ่มการอำนวยความสะดวกนอกจากนี้ยังผสมดีเอ็นเอจากตัวอย่างดิบต่าง ๆ Taq พาณิชย์ดีเอ็นเอ polymerases

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จากการทดสอบทางคลินิกและทางนิติวิทยาศาสตร์ ซึ่งมักจะมีความไวต่ำ หรือ ผลทางลบแม้เท็จเกิดจาก inhibitors PCR เริ่มพบในเลือดและดิน เป็นที่ยอมรับกันอย่างกว้างขวางว่า การทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอเป้าหมายก่อน ซึ่งเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับความสำเร็จขยาย . ในความพยายามที่จะเอาชนะ PCR PCR และเพิ่มขยายและลดความซับซ้อนของ PCR ขั้นตอน เราแสดงให้เห็นถึงการปรับปรุงวิธี PCR เพิ่มค็อกเทลที่มีประจุผงซักฟอก , แอลคาร์นิทีน , D - ( + ) - การ และเฮ . ค็อกเทลเหล่านี้ในการรวมกันกับสองยับยั้งป้องกันได้ดีและสายพันธุ์ omnitaq Omni klentaq , เปิดขยายประสิทธิภาพสูงภายในและภายนอก , GC , ปริมาณดีเอ็นเอเป้าหมายโดยตรงจากตัวอย่างดิบที่มีพลาสม่ามนุษย์เลือดและเลือดทั้งหมดโดยไม่บริสุทธิ์ดีเอ็นเอ ในการแสดงตนของค็อกเทลเสริมเหล่านี้กลายพันธุ์สามารถอดทนอย่างน้อย 25% พลาสม่า , เซรั่ม , หรือทั้งเลือดและสูงถึง 80 % GC เนื้อหาแม่แบบในปฏิกิริยา PCR ค็อกเทลเสริมเหล่านี้ยังมีการปรับปรุงประสิทธิภาพของสายพันธุ์ใหม่ในการขยาย PCR แบบเรียลไทม์ โดยใช้แท็กตัวอย่างดิบทั้งในการตรวจสอบและ taqman SYBR กรีน ) . การเพิ่มจํานวน ( นวนิยายผสมดีเอ็นเอจากตัวอย่างดิบด้วย polymerases ดีเอ็นเอได้ดีทางการค้าต่าง ๆ