The use of gel electrophoresis for

The use of gel electrophoresis for quantitative studies of DNA-protein interactions is described. This rapid and simple technique involves separation of free DNA from DNA-protein complexes based on differences in their electrophoretic mobilities in polyacrylamide gels. Under favorable conditions both unbound DNA and DNA associated with protein can be quantified.

This gel method is applied to the study of the E. coli lactose operon regulatory system. At ionic strengths in the physiological range, the catabolite activator protein (CAP) is shown to form a long-lived complex with the wild type lac promoter, but not with a CAP-insensitive mutant. Formation of a stable “open” or “melted-in” complex of RNA polymerase with the wild type promoter requires the participation of CAP and cyclic AMP. Further, it is demonstrated that even when pre-formed in the presence of CAP-cAMP, the polymerase-promoter open complex becomes unstable if CAP is then selectively removed.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อธิบายการใช้ electrophoresis เจศึกษาเชิงปริมาณของดีเอ็นเอโปรตีนโต้ตอบ เทคนิคนี้ง่าย และรวดเร็วเกี่ยวข้องกับการแยกดีเอ็นเอฟรีจากโปรตีนดีเอ็นเอคอมเพล็กซ์ตามความแตกต่างใน mobilities ของพวกเขาด้วยใน polyacrylamide gels ภายใต้เงื่อนไขอัน ผูกดีเอ็นเอและดีเอ็นเอที่เกี่ยวข้องกับโปรตีนสามารถสามารถ quantifiedเจลวิธีนี้ใช้กับการศึกษาของระบบกำกับดูแล operon แล็กโทส E. coli ที่แข็ง ionic ในช่วงสรีรวิทยา โปรตีน activator catabolite (CAP) จะแสดงในรูปแบบคอมเพล็กซ์ long-lived มีโปรโมเตอร์ลัคป่าชนิด แต่ไม่ มี mutant หมวกซ้อน ก่อตัวของคอมเพล็กซ์ที่ "เปิด" หรือ "หลอมใน" ความมั่นคงของอาร์เอ็นเอพอลิเมอเรสกับโปรโมเตอร์ชนิดป่าต้องมีส่วนร่วมของ CAP และ cyclic AMP เพิ่มเติม แสดงที่แม้ก่อนเกิดขึ้นในต่อหน้าของค่าย CAP คอมเพล็กซ์เปิดพอลิเมอเรสโปรโมเตอร์ไม่เสถียรถ้า CAP ได้แล้วเลือกเอา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ใช้เจลอิเล็กสำหรับการศึกษาเชิงปริมาณของการมีปฏิสัมพันธ์ดีเอ็นเอโปรตีนอธิบายไว้ เทคนิคนี้อย่างรวดเร็วและง่ายที่เกี่ยวข้องกับการแยกดีเอ็นเอฟรีจากคอมเพล็กซ์ดีเอ็นเอโปรตีนอยู่บนพื้นฐานของความแตกต่างในการเลื่อนชั้นทางอิเล็คของพวกเขาในเจลอะคริเลต ภายใต้เงื่อนไขที่ดีทั้งดีเอ็นเอไม่ได้ผูกไว้และดีเอ็นเอที่เกี่ยวข้องกับโปรตีนสามารถ quantified. วิธีการเจลนี้ถูกนำไปใช้เพื่อการศึกษาของเชื้อ E. coli แลคโตส Operon ระบบการกำกับดูแล ที่จุดแข็งของอิออนอยู่ในช่วงทางสรีรวิทยา, โปรตีนกระตุ้นแค (CAP) จะแสดงในรูปแบบที่ซับซ้อนระยะยาวกับป่าประเภทก่อการครั่ง แต่ไม่ได้มีการกลายพันธุ์ CAP ตาย การก่อตัวของคงที่ "เปิด" หรือ "ละลายใน" ที่ซับซ้อนของ rna โพลิเมอร์กับโปรโมเตอร์ป่าประเภทต้องมีส่วนร่วมของ CAP และวงจร AMP ต่อไปก็จะแสดงให้เห็นว่าแม้ในขณะที่เกิดขึ้นก่อนในการปรากฏตัวของ CAP-ค่ายโพลีเมอ-ก่อการซับซ้อนเปิดจะไม่เสถียรถ้า CAP จะถูกนำการคัดเลือก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การใช้เจลสำหรับปริมาณการศึกษาปฏิสัมพันธ์โปรตีนดีเอ็นเอจะอธิบาย เทคนิคนี้ง่ายและรวดเร็วที่เกี่ยวข้องกับการแยกดีเอ็นเอดีเอ็นเอโปรตีนเชิงซ้อน ฟรี จาก บนพื้นฐานของความแตกต่างในรูปแบบ mobilities ในโพลีอะคริลาไมด์เจล ภายใต้เงื่อนไขที่ดีทั้งจับกับดีเอ็นเอและดีเอ็นเอที่เกี่ยวข้องกับโปรตีนสามารถ quantified .

เจลใช้วิธีการนี้เพื่อการศึกษาของ E . coli แล็กโตส โอเพอรอนจำกัดระบบ ที่อิออนจุดแข็งในช่วงทางสรีรวิทยา , catabolite กระตุ้นโปรตีน ( หมวก ) แสดงรูปแบบซับซ้อนจีรัง มีป่าประเภทแลค โปรโมเตอร์ แต่ไม่ใช่กับหมวกตายด้านกลายพันธุ์การพัฒนาที่มั่นคง " เปิด " หรือ " ละลาย " ที่ซับซ้อนของอาร์เอ็นเอพอลิเมอเรสกับผู้สนับสนุน ประเภทป่า ต้องการการมีส่วนร่วมของหมวกและวงจรแอมป์ ต่อไปจะแสดงให้เห็นว่า แม้เมื่อก่อนขึ้นในการแสดงตนของค่ายหมวก ผู้สนับสนุนการเปิดที่ซับซ้อนไม่สม่ำเสมอ ถ้าหัวหน้าแล้วเลือกออก