2.5. Species identification and Fla

2.5. Species identification and Fla-typing using PCR methodologies

Campylobacter DNA was isolated using the GenElute™ Bacterial Genomic DNA Kit according to manufacturer's instructions for Gram negative bacteria (Sigma-Aldrich, UK). The PCR methodology was based on conditions previously described by Linton et al. (1997) for species identification and by Elvers et al. (2008) for FlaA SVR-typing. The oligonucleotides were purchased from Eurofins (Ebersberg, Germany) and consisted of the primers HIP400F (5′-GAAGAGGGTTTGGGTGGTG-3′) and HIP1134R (5′-AGCTAGCTTCGCATAATAACTTG-3′) targeting the C. jejuni hippuricase gene, CC18F (5′-GGTATGATTTCTACAAAGCGAG-3′) and CC51R (5′-ATAAAAGACTATCGTCGCGTG-3′) specific for the C. coli aspartokinase gene, and FLA4R (5′-GGATTTCGTATTAACACAAATGGTGC-3′) and FLA625R (5′-CAAG[AT]CCTGTTCC[AT]ACTGAAG) for the Campylobacter flaA gene. To determine the Fla type of the Campylobacter isolates, the PCR products were purified using the Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System (Promega, Southampton, UK) and the DNA sequenced using the Eurofins MWG Value Read service.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5. ชนิดและ Fla พิมพ์โดยใช้วิธี PCRดีเอ็นเอ Campylobacter ถูกแยกโดยใช้การ GenElute™แบคทีเรียออกชุดดีเอ็นเอตามคำแนะนำของผู้ผลิตสำหรับแบคทีเรียกรัมลบ (Sigma Aldrich, UK) วิธี PCR ตามเงื่อนไขที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ โดย Linton et al. (1997) สำหรับการระบุสายพันธุ์ และโดย Elvers et al. (2008) สำหรับการพิมพ์ FlaA SVR Oligonucleotides ที่ซื้อจาก Eurofins (อันดับ เยอรมัน) และประกอบด้วยไพรเมอร์ HIP400F (5 ′-GAAGAGGGTTTGGGTGGTG-3′) และ HIP1134R (5 ′-AGCTAGCTTCGCATAATAACTTG-3′) กำหนดเป้าหมาย C. jejuni ยีน hippuricase, CC18F (5 ′-GGTATGATTTCTACAAAGCGAG-3′) และ CC51R (5 ′-ATAAAAGACTATCGTCGCGTG-3′) เฉพาะสำหรับ C. coli ยีน aspartokinase และ FLA4R (5 ′-GGATTTCGTATTAACACAAATGGTGC-3′) และ FLA625R (5′-CAAG[AT]CCTGTTCC[AT]ACTGAAG) สำหรับยีน flaA Campylobacter เพื่อกำหนดชนิด Fla ของ Campylobacter แยก ผลิตภัณฑ์ PCR ได้บริสุทธิ์โดยใช้ Wizard®เอสวีเจและ PCR ล้างระบบ (Promega แมนเชสเตอร์ สหราชอาณาจักร) และดีเอ็นเอที่เรียงลำดับโดยใช้บริการ Eurofins MWG ค่าอ่าน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 บัตรประจำตัวชนิดและ FLA-พิมพ์โดยใช้วิธี PCR

Campylobacter ดีเอ็นเอที่แยกได้โดยใช้ GenElute ™แบคทีเรีย DNA ของยีนชุดตามคำแนะนำของผู้ผลิตสำหรับแบคทีเรียแกรมลบ (Sigma-Aldrich สหราชอาณาจักร) วิธี PCR ก็ขึ้นอยู่กับเงื่อนไขที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดยลินตัน, et al (1997) ในการจำแนกชนิดและโดย Elvers et al, (2008) สำหรับ FlaA SVR-พิมพ์ oligonucleotides ที่ซื้อมาจาก Eurofins (Ebersberg, เยอรมนี) และประกอบไปด้วยไพรเมอร์ HIP400F (5'-GAAGAGGGTTTGGGTGGTG-3) และ HIP1134R (5'-AGCTAGCTTCGCATAATAACTTG-3 ') กำหนดเป้าหมายยีน hippuricase C. jejuni, CC18F (5'- GGTATGATTTCTACAAAGCGAG-3) และ CC51R (5'-ATAAAAGACTATCGTCGCGTG-3 ') ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ C. coli aspartokinase ยีนและ FLA4R (5'-GGATTTCGTATTAACACAAATGGTGC-3) และ FLA625R (5'-CAAG [at] CCTGTTCC [at] ACTGAAG) สำหรับยีน Campylobacter flaA เพื่อกำหนดประเภทของฟลอริด้า Campylobacter แยกผลิตภัณฑ์ PCR ที่ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยใช้Wizard®เอเจลและ PCR สะอาดขึ้นระบบ (Promega, Southampton, UK) และดีเอ็นเอลำดับขั้นตอนการใช้บริการ Eurofins MWG อ่านค่า