แดง::: Assam for Polyphenoloriderse

แดง::: Assam for Polyphenoloriderse ACTivity. Polyphenoloxidase activity in HLS was measured spectrophotomctrically using L-DOPA as its substratc loxi oup) following the method of Adachi et al. (17) with a slight modification as mM previously described, except that an appropriate amount of a 50 mM HEPES buffer(pH 7.8) containing 5 mM MgCl2 and 5 mM CaCl2 was mL. mL. replaced by a L-ERT solution and p-amidinophenyl methanesulfonyl ance fluoride hydrochloride(p-APMSF). A 50 L aliquot of HLS was used in the assay system. The final concentration of the inhibitor added to the ng a action system was l mM
แดงๆ. Assay of peptidase activity was conducted using peptidyl-MCA as the substrate according to Morita et al. 120) as oxy achi cited by Adachi et al. (17) with some modifications. A 150 L portion of mph thc HLS was mixcd with 2235 AL of 50 mM HEPES(pH 7.8) containing 5 mM MgCI2 and 5 mM CaCl, and then the mixture was preincubated at of The room temperature for 10 min A 15 HL of 10 mM synthetic was added to initiate the reaction and it was terminated after 30 minincubation at 37 °C by adding 600HL of 50% acetic acid. An appropriate amount of the HEPES buffer was replaced by the solutions of LERT and p-APMSF The final concentration of the inhibitor added to the reaction system up) was 1 mM. Fluorescent assays wcrcdctcrmincd at 380 nm and 460 nm, using a Shimadzu model RF-1500 fluorescence spectrophoto- meter. The amount of the substrate hydrolyzed was calculated from the nga, value of 7-amino-4-methylcoumann(AMC standard solutions. Tocheck whether equal volumes of proteins were loaded in all samples, protein concentrations of the HLS were determined by the dye-binding method Bradford, using a Bio-Rad protein assay kit. For a calibration curve. con bovine serum albumin was used as a protein standard. l-a RT-PCR Analysis. Gene expressions of proPO from HLS treated with NAV and the control were quantified following the same protocol of the RT-PCR analysis as previously described. The final and concentration of the inhibitor added to the reaction system was l mM
แดงๆๆ:: Statissical Analyses. Microsoft Excel 2007 was used to calculate the PO means and standard deviation for all multiple measurements as well as for to generate graphs. Significant differences between the mean values were determined by one-way ANOVA. The level of significance setting nd a 0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แดง::: อัสสัมสำหรับกิจกรรม Polyphenoloriderse กิจกรรม Polyphenoloxidase HLS เป็นวัด spectrophotomctrically ใช้ L-DOPA เป็นของ oup loxi substratc) ตามวิธีการของอา et al. (17) ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยของคมม.ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ยกเว้นว่าจำนวนเงินเหมาะสมของบัฟเฟอร์ (pH 7.8) ประกอบด้วย 50 มม. HEPES MgCl2 5 มม.และ 5 มม. CaCl2 เป็น mL mL. แทน โดยทุก ๆ คนคง L โซลูชันและ p amidinophenyl methanesulfonyl ance ฟลูออไรด์ hydrochloride(p-APMSF) ส่วนลงตัว 50 ลิตรของ HLS ถูกใช้ในระบบการทดสอบ ความเข้มข้นสุดท้ายของการยับยั้งลงฉบับระบบดำเนินการแก้ไขมม. l แดง ๆ ทดสอบกิจกรรม peptidase ดำเนินการใช้ peptidyl MCA เป็นพื้นผิวตามโมะริตะร้อยเอ็ด 120) เป็น achi oxy ที่อ้างถึงโดยอา et al. (17) มีปรับเปลี่ยนบางอย่าง ส่วน 150 L ของ mph thc HLS เป็น mixcd ด้วย 2235 AL 50 มม. HEPES(pH 7.8) ที่ประกอบด้วย MgCI2 5 มม. และ 5 มม. CaCl และส่วนผสมแล้วก็ preincubated ที่อุณหภูมิห้อง 10 นาที 15 A HL 10 มม.สังเคราะห์ถูกเริ่มปฏิกิริยา และมันถูกยกเลิกหลังจาก minincubation 30 ที่ 37 ° C โดยเพิ่ม 600 HL ของ 50% กรดนี้ จำนวนเงินที่เหมาะสมของบัฟเฟอร์ HEPES ถูกแทนที่ ด้วยโซลูชันของ LERT และ p-APMSF ความเข้มข้นสุดท้ายยับยั้งที่เพิ่มลงในระบบปฏิกิริยาขึ้น) คือ 1 มม. Wcrcdctcrmincd assays ฟลูออเรสเซนต์ที่ 380 nm และ 460 nm, Shimadzu ใช้รุ่น spectrophoto เรืองแสง RF-1500 เมตร คำนวณปริมาณของสารตั้งต้นไลซ์จากพังงา ค่าของ 7-อะมิโน-4-methylcoumann(AMC standard solutions. Tocheck ว่าเท่ากับปริมาณของโปรตีนที่ถูกโหลดในตัวอย่างทั้งหมด ความเข้มข้นของโปรตีนของ HLS ที่ดำเนินการ โดยวิธีการผูกย้อมแบรดฟอร์ด ใช้ชุดทดสอบโปรตีน Bio-ล้อ สำหรับเส้นโค้งของการสอบเทียบ มีใช้คอนวัว serum albumin เป็นโปรตีนมาตรฐาน วิเคราะห์ l a RT-PCR แสดงออกของยีนของสนอเวลาจาก HLS รับการนำทางและการควบคุมถูกวัดตามโพรโทคอเดียวกันวิเคราะห์ RT-PCR ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ สุดท้ายและความเข้มข้นของสารยับยั้งที่เพิ่มลงในระบบปฏิกิริยาถูกมม. l แดงๆ ๆ:: Statissical วิเคราะห์ Microsoft Excel 2007 ถูกใช้ในการคำนวณหมายถึง PO และส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสำหรับหลายการประเมินเป็นอย่างดีเป็นการสร้างกราฟ ความแตกต่างกันระหว่างค่าเฉลี่ยถูกกำหนด โดยทางเดียว ANOVA ความสำคัญของระดับการตั้ง nd 0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

::: แดงอัสสัมในกิจกรรมที่ Polyphenoloriderse กิจกรรมพอลีฟีนใน HLS วัด spectrophotomctrically ใช้ L-DOPA เป็น oup substratc loxi ของมัน) ต่อไปนี้วิธีการของ Adachi et al, (17) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยเป็นมิลลิอธิบายไว้ก่อนหน้ายกเว้นว่าในปริมาณที่เหมาะสมของบัฟเฟอร์ขนาด 50 มม HEPES (pH 7.8) ที่มี 5 มิลลิ MgCl2 และ 5 มิลลิ CaCl2 เป็นมิลลิลิตร มล แทนที่ด้วยโซลูชั่นที่ L-ERT และ P-amidinophenyl methanesulfonyl ance ไฮโดรคลอไรลูออไรด์ (P-APMSF) 50 L หารของ HLS ถูกใช้ในการทดสอบระบบ ความเข้มข้นสุดท้ายของการยับยั้งที่เพิ่มให้กับระบบในการดำเนิน ng เป็น L มิลลิ
แดงๆ การทดสอบของกิจกรรม peptidase ถูกดำเนินการโดยใช้ peptidyl เอ็มเป็นสารตั้งต้นตามโมริตะ, et al 120) เป็น Oxy Achi โดยอ้าง Adachi, et al (17) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง ส่วน 150 ลิตรไมล์ต่อชั่วโมง THC HLS ถูก mixcd กับ 2235 อัลขนาด 50 มม HEPES (pH 7.8) ที่มี 5 มิลลิ MgCI2 และ 5 มิลลิแคลเซียมคลอไรด์และจากนั้นส่วนผสมที่ถูก preincubated ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที 15 HL 10 มิลลิเมตร สังเคราะห์ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อเริ่มต้นการเกิดปฏิกิริยาและมันถูกยกเลิกหลังจาก 30 minincubation ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสโดยการเพิ่ม 600HL ของกรดอะซิติก 50% ในปริมาณที่เหมาะสมของบัฟเฟอร์ HEPES ถูกแทนที่ด้วยโซลูชั่นของเลิศและ P-APMSF ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของการยับยั้งการเพิ่มระบบการเกิดปฏิกิริยาขึ้นไป) 1 มิลลิ ตรวจ Fluorescent wcrcdctcrmincd ที่ 380 นาโนเมตรและ 460 นาโนเมตรโดยใช้ Shimadzu รุ่น RF-1500 เรืองแสง spectrophoto- เมตร ปริมาณของสารตั้งต้นไฮโดรไลซ์ที่คำนวณได้จากพังงาค่าของ 7-Amino-4-methylcoumann (สารละลายมาตรฐานบบส. tocheck ไม่ว่าจะเป็นปริมาณที่เท่ากันของโปรตีนที่ถูกโหลดในทุกตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีนของ HLS ถูกกำหนดโดยสีย้อมที่มีผลผูกพัน วิธีการแบรดฟอโดยใช้ชุด Bio-Rad โปรตีนทดสอบ. สำหรับการสอบเทียบโค้ง. Con วัวซีรั่มอัลบูมิถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐานโปรตีน. La RT-PCR วิเคราะห์. การแสดงออกของยีนของ proPO จาก HLS รับการรักษาด้วย NAV และการควบคุมที่ถูกวัดดังต่อไปนี้ โปรโตคอลเดียวกันของการวิเคราะห์ RT-PCR ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้. สุดท้ายและความเข้มข้นของสารยับยั้งการเพิ่มระบบปฏิกิริยาคือ L มิลลิ
แดงๆ ๆ :: วิเคราะห์ Statissical. Microsoft Excel 2007 ถูกนำมาใช้ในการคำนวณวิธี PO และค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสำหรับทุกหลาย วัดเช่นเดียวกับการสร้างกราฟ. ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างค่าเฉลี่ยได้รับการพิจารณาโดยทางเดียว ANOVA. ระดับความสำคัญการตั้งค่า ND 0.05