2.2.1.2. PCR amplification and puri

2.2.1.2. PCR amplification and purification. Polymerase Chain Reaction
(PCR) amplifications were performed with little modification
as previously described by Beasley and Saris (2004). Genomic DNA
was extracted using a method mentioned above and then, used as
the template for PCR. In this study,16S rDNA forward (AGA GTT TGA
TCC TGG CTC AG) and reverse (CCG TCA ATT CCT TTG AGT TT)
primer pairs were used for the amplification (Beasley & Saris,
2004). PCR amplifications were performed in a ThermoCycler
(Bio-Rad®, USA) in 0.2 mL reaction tubes each with 50 mL reaction
mixtures composed of the 0.2 mM primer, 0.1 mM dNTP mix (Fermentas
®, Finland), 1 reaction buffer, 2.5 mM MgCl2, 0.025 u Taq
polymerase (Promega®, USA) and 3.0 mL extracted bacterial
genomic DNA. After achieving the initial denaturation procedure
(95 C, 2 min), the reaction was subjected to 35 cycles of 95 C for
45 s, 57 C for 45 s and 72 C for 2 min, and a final elongation
procedure of 72 C for 7 min for the amplification. The PCR products
were analyzed on 1% agarose gel electrophoresis, stained in
ethidium bromide solution and visualized under UV light

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2.1.2 การ PCR ขยายและทำให้บริสุทธิ์ ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสAmplifications (PCR) ได้ดำเนินการกับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยอธิบายไว้ว่า ก่อนหน้านี้ ทาง Beasley Saris (2004) Genomic DNAถูกแยกโดยใช้วิธีดังกล่าวข้างต้น และใช้แล้ว เป็นแม่แบบสำหรับ PCR ในการศึกษานี้ 16S rDNA ไปข้างหน้า (AGA GTT TGAไทยคันทรีคลับ TGG CTC AG) และย้อน (CCG TCA ATT CCT TTG AGT TT)ใช้รองพื้นคู่สำหรับขยาย (Beasley และ Saris2004) ดำเนินใน ThermoCycler PCR amplifications(® Bio Rad สหรัฐอเมริกา) ใน 0.2 mL ปฏิกิริยาท่อด้วยปฏิกิริยา 50 mLส่วนผสมประกอบด้วยสีรองพื้น 0.2 mM, 0.1 mM dNTP ผสม (Fermentas®, ฟินแลนด์), บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 1, 2.5 mM MgCl2, 0.025 u Taqพอลิเมอเรส (Promega ® สหรัฐอเมริกา) และ 3.0 mL สกัดแบคทีเรียgenomic DNA หลังจากบรรลุขั้นตอน denaturation เริ่มต้น(95 C, 2 นาที), ปฏิกิริยาถูกยัดเยียดให้รอบ 35 ของ C 95 ในs, 57 C 45 45 s และ C 72 นาที 2 และ elongation ขั้นสุดท้ายขั้นตอน C 72 สำหรับ 7 นาทีสำหรับการขยาย ผลิตภัณฑ์ PCRได้วิเคราะห์บน 1% agarose เจ electrophoresis สีในโซลูชันโบรไมด์ ethidium และแสง UV visualized ภายใต้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2.1.2 ขยาย PCR และการทำให้บริสุทธิ์ วิธี Polymerase chain reaction
(PCR) เครื่องขยายเสียงได้รับการดำเนินการกับการเปลี่ยนแปลงเล็ก ๆ น้อย ๆ
ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดยบีสลีย์และ Saris (2004) ดีเอ็นเอ
ที่ถูกสกัดโดยใช้วิธีการดังกล่าวข้างต้นแล้วนำมาใช้เป็น
แม่แบบสำหรับ PCR ในการศึกษานี้ 16S rDNA ไปข้างหน้า (AGA GTT TGA
TCC TGG CTC AG) และย้อนกลับ (CCG TCA ATT CCT TTG AGT TT)
คู่ไพรเมอร์ถูกนำมาใช้สำหรับการขยาย (บีสลีย์และ Saris,
2004) การขยาย PCR ได้ดำเนินการใน thermocycler
(Bio-Rad®สหรัฐอเมริกา) ใน 0.2 มิลลิลิตรหลอดปฏิกิริยาแต่ละคนมี 50 มลปฏิกิริยา
ผสมประกอบด้วยไพรมิลลิ 0.2, 0.1 มิลลิผสม dNTP (Fermentas
®, ฟินแลนด์), 1? บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 2.5 มิลลิ MgCl2, 0.025 ยู Taq
polymerase (Promega®สหรัฐอเมริกา) และ 3.0 มิลลิลิตรสกัดแบคทีเรีย
ดีเอ็นเอ หลังจากที่ประสบความสำเร็จในขั้นตอนการเริ่มต้น denaturation
(95 องศาเซลเซียส 2 นาที), ปฏิกิริยาถูกยัดเยียดให้ 35 รอบ 95? C เป็นเวลา
45 วินาที, 57 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีและยืดตัวสุดท้าย
ขั้นตอนของ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 นาทีสำหรับการขยาย ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์
ถูกนำมาวิเคราะห์ในวันที่ 1% เจลอิเล็ก agarose เปื้อนใน
การแก้ปัญหา ethidium bromide และมองเห็นภายใต้แสงยูวี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2.1.2 . และการขยายเชื้อบริสุทธิ์ Polymerase chain reaction ( PCR ) amplifications
) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย
ก่อนหน้านี้เป็นอธิบายโดยบีสลี่ย์และ saris ( 2004 )
ดีเอ็นเอถูกสกัดโดยใช้วิธีการดังกล่าวข้างต้นแล้ว ใช้เป็น
แม่แบบสำหรับ PCR ในการศึกษา 16S rDNA ไปข้างหน้า ( AGA gtt TGA
TCC tgg CTC AG ) และกลับ ( ccg TCA ATT CCT ทีทีจี agt TT )
ไพรเมอร์คู่ถูกใช้สำหรับการขยาย ( บีสลี่ย์& saris
, 2004 ) PCR amplifications แสดงในเทอมอไซเคล ์
( ไบโอ ราด® , USA ) 0.2 ml หลอดละ 50 มิลลิลิตรปฏิกิริยาปฏิกิริยา
ผสมประกอบด้วย 0.2 มม. รองพื้น ผสม dntp 0.1 มม. ( fermentas
® , ฟินแลนด์ ) , 1  ปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ , MgCl2 2.5 มม. , 0.025 u
( promega ®แท็กใช้ , สหรัฐอเมริกา ) และ 3.0 มิลลิลิตรสกัดดีเอ็นเอจากแบคทีเรีย
.หลังจากการเริ่มต้นกระบวนการ (
( 95  C 2 นาที ) , ปฏิกิริยาภายใต้ 35 รอบ 95  C
45 S 57  C เป็นเวลา 45 และ 72  C เป็นเวลา 2 นาที และสุดท้ายการยืดตัว
ขั้นตอน 72  C 7 นาทีสำหรับการเพิ่มปริมาณ . ผลิตภัณฑ์ PCR
วิเคราะห์บน 1% เจลอิเลคโตรโฟรีซีส เปื้อนในสารละลายโบรไมด์
คู่และภาพปรากฏการณ์ภายใต้แสงยูวี