Cell culture and induction of recom

Cell culture and induction of recombinant protein
expression
Cells were grown in f/2 medium under standard conditions
as described elsewhere (Apt et al. 1999) with either
0.9 mM NO3
- or 1.5 mM NH4
+ as the nitrogen source.
For in vivo localization studies on GFP fusion proteins
transfectants were grown in media containing NO3
- to
induce recombinant protein expression. After 3 days,
clones were analyzed by confocal laser scanning microscopy.
PhaA/phaB/phaC co-transfectants were first
determined to have genomic integration by colony PCR
for all three sequences. Subsequently, positive colonies
were grown in liquid culture containing NH4
+ and
allowed to reach exponential phase, whereupon they
were transferred to NO3
- containing medium for varying
time periods. For visualization of PHB granules, cells
were induced for 5 days and analyzed by electron and
confocal microscopic analyses, respectively. For confocal
microscopy, cells were pre-incubated with the lipophilic
dye Nile Red (0.5 μg/ml) for 24 h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การเพาะเลี้ยงเซลล์และเหนี่ยวนำของโปรตีน

แสดงออกเซลล์ถูกปลูกในเอฟ / 2 กลางภายใต้เงื่อนไขมาตรฐาน
ตามที่อธิบายไว้ (ฉลาด et al, 1999.) กับทั้ง
0.9 มม. NO3
- หรือ 1.5 มม. NH4
เป็นแหล่งไนโตรเจน
ในร่างกายเพื่อการศึกษาท้องถิ่นที่โปรตีนฟิวชั่น gfp
transfectants ถูกปลูกในสื่อที่มี NO3
-
ที่จะเหนี่ยวนำให้เกิดการแสดงออกของโปรตีน หลังจาก 3 วัน
โคลนที่ถูกวิเคราะห์โดย confocal เลเซอร์สแกนกล้องจุลทรรศน์.
phaa / phab / phac ร่วม transfectants-เป็นคนแรก
มุ่งมั่นที่จะมีการรวมกลุ่มจีโนมโดยอาณานิคม pcr
สำหรับทั้งสามลำดับ ต่อมาอาณานิคมบวก
มีปลูกอยู่ในวัฒนธรรมที่มีของเหลวและ NH4

ได้รับอนุญาตให้เข้าถึงขั้นตอนการชี้แจงครั้นแล้วพวกเขา
ถูกย้ายไป NO3
- มีสื่อกลางในการที่แตกต่างกัน
ช่วงเวลาสำหรับการแสดงของเม็ด PHB เซลล์
ถูกเหนี่ยวนำให้เป็นเวลา 5 วันและวิเคราะห์โดยอิเล็กตรอนและกล้องจุลทรรศน์ confocal
วิเคราะห์ตามลำดับ เพื่อ confocal
กล้องจุลทรรศน์เซลล์ถูกก่อนบ่ม lipophilic
แม่น้ำไนล์สีแดง (0.5 mg / ml) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัฒนธรรมและการเหนี่ยวนำของ recombinant โปรตีนของเซลล์
นิพจน์
เซลล์ถูกปลูกใน f/2 ภายใต้เงื่อนไขมาตรฐาน
ดังที่อื่น (ฉลาด et al. 1999) พร้อม
0.9 มม. NO3
- หรือ 1.5 มม. NH4
เป็นแหล่งไนโตรเจน
สำหรับการศึกษาในสัตว์ทดลองแปล GFP ฟิวชั่นโปรตีน
transfectants ได้พัฒนาสื่อที่ประกอบด้วย NO3
- ถึง
นิพจน์ recombinant โปรตีนที่ก่อให้เกิดการ หลังจาก 3 วัน,
โคลนถูกวิเคราะห์ โดยเลเซอร์ confocal สแกน microscopy.
PhaA/phaB/phaC transfectants บริษัทได้ก่อน
กำหนดให้รวม genomic โดยอาณานิคม PCR
ลำดับสามทั้งหมด ในเวลาต่อมา อาณานิคมบวก
ได้เติบโตในวัฒนธรรมของเหลวประกอบด้วย NH4
และ
ได้ถึงระยะเนน whereupon พวกเขา
ถูกโอนย้ายไป NO3
- มีขนาดกลางสำหรับแตกต่างกัน
ช่วง สำหรับการแสดงภาพประกอบเพลงของ PHB เม็ด เซลล์
เกิดวันที่ 5 และวิเคราะห์ โดยอิเล็กตรอน และ
วิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์ confocal ตามลำดับ สำหรับ confocal
microscopy เซลล์ได้ล่วงหน้า incubated กับ lipophilic
สีแดงแม่น้ำไนล์ (0.5 μg/ml) ใน 24 ชม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เตาแม่เหล็กไฟฟ้าและวัฒนธรรมเซลล์ของโปรตีน poxvaccine

ซึ่งจะช่วยการแสดงออกทางความคิดเห็นเซลล์ได้เติบโตในขนาดกลาง F / 2 ตามเงื่อนไขมาตรฐาน
เช่นที่อธิบายไว้ในที่อื่นๆ( APT et al . 1999 )พร้อมด้วยทั้ง
0.9 มม.ไม่มี 3
- - หรือ 1.5 มม. NH 4
ไนโตรเจนที่เป็นแหล่ง.
สำหรับในการแปลเอกสารข้อมูลเกี่ยวกับการศึกษาไปยังสถานี Vivo gfp ในการผสมผสานโปรตีน
transfectants ได้เติบโตในสื่อที่มีไม่มี 3
- -
ซึ่งจะช่วยในการทำให้โปรตีน poxvaccine แสดงออก. หลังจากผ่านไป 3 วัน
โคลนก็วิเคราะห์โดยการตรวจวิเคราะห์สารเคมีการสแกนเลเซอร์ confocal .
phaa / phab / phac ร่วม - transfectants
ซึ่งจะช่วยเป็นครั้งแรกกำหนดให้มีการประกอบ genomic โดยอาณานิคม pcr
สามลำดับทั้งหมด ต่อมาในเชิงบวกอาณานิคม
ได้เติบโตในวัฒนธรรมผสมน้ำยาทำความสะอาดที่มี NH 4

และได้รับอนุญาตให้เข้าถึงยังขั้นตอนอย่างต่อเนื่ององค์การสหประชาติ
ซึ่งจะช่วยพวกเขาก็จะพาท่านไปส่งยังไม่มี 3
- มีขนาดกลางหลากหลายช่วงเวลา
สำหรับการแสดง ภาพ ของ อนุภาค ความหอม phb เซลล์
ซึ่งจะช่วยได้ก่อขึ้นสำหรับ 5 วันและมีการวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์ขนาดเล็กซึ่ง
confocal และบัตรเดบิตตามลำดับ สำหรับการตรวจวิเคราะห์สารเคมี confocal
เซลล์เป็นก่อน - incubated พร้อมด้วย lipophilic
สีย้อม Nile สีแดง( 0.5 ไมโครกรัม/มล.)เป็นเวลา 24 ชั่วโมง