2.6. Dot ELISA with recombinant hex

2.6. Dot ELISA with recombinant hexon protein
Detection of antibodies to FAdV-4 in serum sample by Dot
ELISA was done as described earlier (Roy and Venugopalan, 1999;
Manoharan et al., 2004) with modifications. In short, the recombinant
hexon antigen of FAdV-4 (50 ng/l) was separately spotted at
1 l volume onto nitrocellulose membrane immunocomb strips.
The antigen spotted combs were incubated at 37 ◦C for 1 h in a
humid chamber. After 1 h of incubation the combs were washed
three times with PBST and incubated for 60 min in blocking buffer.
The combs were again washed three times with PBST and then incubated
at 37 ◦C for 45 min with sera samples from the field or sera
sample collected from experimentally vaccinated birds at a dilution
of 1:25, 1:50, 1:100, 1:200 and 1:400 in serum dilution buffer. After
incubating with sera sample the strips were washed three times in
PBST and incubated at 37 ◦C for 30 min with anti-chicken IgY HRPO
conjugate diluted 1:500 in conjugation dilution buffer. After washing,
the combs were exposed to the substrate (5 mg of DAB in 10 ml
of distilled water and 10 l of hydrogen peroxide) for 10 min. The
enzymatic reaction was stopped by washing the combs with tap
water. The positive reaction was indicated by the appearance of a
brown dot.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. dot ELISA กับ recombinant hexon โปรตีนการตรวจหาแอนติบอดี FAdV 4 ในตัวอย่างซีรั่มโดยจุดทำ ELISA ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Roy และ Venugopalan, 1999Manoharan et al. 2004) มีการปรับเปลี่ยน ในระยะสั้น การควบรวมhexon antigen ของ FAdV-4 (50 ng/l) ถูกด่างที่แยกต่างหากปริมาตร 1 ลิตรลงบนแผ่นไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน immunocombAntigen พบหวีได้รับการกกที่ 37 ◦C สำหรับ 1 ชั่วโมงในการห้องชื้น หลังจาก 1 ชั่วโมงของการกกไข่ หวีถูกล้างสามเท่ากับ PBST และรับการกก 60 นาทีในบัฟเฟอร์บล็อกการหวีอีก ซัก 3 เท่ากับ PBST และได้รับการกกแล้วที่ 37 ◦C สำหรับ 45 นาทีตัวอย่างร่าจากฟิลด์หรือร่าเก็บตัวอย่างจากนกที่ทดลองฉีดวัคซีนที่เจือจางที่1:25, 1:50, 1: 100, 1: 200 และ 1: 400 ในบัฟเฟอร์การเจือจางซีรั่ม หลังจากincubating กับร่าอย่างแถบถูกล้าง 3 ครั้งในPBST และรับการกกที่ ◦C 37 30 นาทีป้องกันไก่ IgY HRPOสังยุคเจือจาง 1: 500 ในบัฟเฟอร์เจือจางผัน หลังจากซักผ้าหวีได้สัมผัสกับพื้นผิว (5 มิลลิกรัม DAB 10 mlน้ำกลั่น และไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 10 l) สำหรับ 10 นาทีหยุดปฏิกิริยาเอนไซม์ซักหวีที่แตะน้ำ ปฏิกิริยาเชิงบวกระบุ โดยลักษณะของการจุดสีน้ำตาล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 dot ELISA กับ recombinant hexon โปรตีน
การตรวจหาแอนติบอดีเพื่อ FAdV-4 ในกลุ่มตัวอย่างซีรั่มโดย dot
ELISA ที่ได้กระทำตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (รอยและ Venugopalan 1999;
Manoharan et al, 2004.) มีการปรับเปลี่ยน ในระยะสั้น recombinant
แอนติเจน hexon ของ FAdV-4 (50 ng / L) เป็นด่างแยกที่
1 ปริมาณ L ลงบนแผ่นเมมเบรน immunocomb nitrocellulose.
แอนติเจนเห็นหวีถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ◦Cเป็นเวลา 1 ชั่วโมงใน
ห้องชื้น หลังจาก 1 ชั่วโมงของการบ่มหวีถูกล้าง
สามครั้งด้วย PBST และบ่มเป็นเวลา 60 นาทีในการปิดกั้นกันชน.
หวีถูกล้างอีกครั้งสามครั้งด้วย PBST แล้วบ่ม
ที่อุณหภูมิ 37 ◦Cเป็นเวลา 45 นาทีกับตัวอย่างซีรั่มจากสนามหรือซีรั่ม
ตัวอย่าง ที่เก็บได้จากการฉีดวัคซีนทดลองนกที่เจือจาง
ของ 1:25 1:50, 1: 100 1: 200 และ 1: 400 ในซีรั่มบัฟเฟอร์เจือจาง หลังจาก
บ่มด้วยตัวอย่างซีรั่มแถบถูกล้างสามครั้งใน
PBST และบ่มที่อุณหภูมิ 37 ◦Cเป็นเวลา 30 นาทีกับการป้องกันไก่így HRPO
ผันเจือจาง 1: 500 ในการผันบัฟเฟอร์เจือจาง หลังจากล้าง
หวีได้สัมผัสกับพื้นผิว (5 มิลลิกรัมแต้มใน 10 มล.
น้ำกลั่นและ 10 ลิตรของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์) เป็นเวลา 10 นาที
ปฏิกิริยาเอนไซม์ก็หยุดโดยการล้างหวีด้วยการแตะ
น้ำ ปฏิกิริยาบวกระบุโดยลักษณะของ
จุดสีน้ำตาล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 dot ELISA ด้วย Hexon รีคอมบิแนนท์โปรตีนการตรวจหาแอนติบอดีในซีรั่ม fadv-4 ตัวอย่างโดยจุดวิธีทำตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( รอยและ venugopalan , 1999 ;manoharan et al . , 2004 ) กับการปรับเปลี่ยน ในสั้น รีคอมบิแนนท์Hexon แอนติเจนของ fadv-4 ( 50 กรัม / ลิตร ) เป็นจุดที่แยก1 ลิตรปริมาณไนโตร immunocomb บนเยื่อแผ่นเห็นหวีเป็นชนิดบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ใน◦ห้องชื้น หลังจาก 1 ชั่วโมงของการบ่มคอมบ์สถูกล้างครั้งที่สามกับ pbst บ่มนาน 60 นาที ในบล็อกบัฟเฟอร์การหวีอีกรอบซัก 3 ครั้ง กับ pbst แล้วบ่ม37 ◦องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 นาที มีตัวอย่าง ( สนามหรือเซราการเก็บตัวอย่างจากการทดลองวัคซีนที่เจือจาง นกของ 1 : 25 : 50 , 100 , 1:200 1 : 400 , และในซีรั่มในบัฟเฟอร์ หลังจากไข่กับเซราตัวอย่างแผ่นถูกล้าง 3 ครั้งpbst บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ◦ hrpo ต่อต้านไก่ igyคือการเจือจาง 1 : 500 ( บัฟเฟอร์ หลังจากอาบน้ำเสร็จการหวีได้รับสารอาหาร ( 5 มิลลิกรัมของป้ายใน 10 มล.น้ำกลั่นและ 10 ลิตร ) นาน 10 นาที และไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ปฏิกิริยาของเอนไซม์ที่ถูกหยุดโดยการล้างหวีกับแตะน้ำ ปฏิกิริยาบวกถูกระบุโดยลักษณะของจุดสีน้ำตาล