2.2. Experimental design and sampli

2.2. Experimental design and sampling
Before the experiment, tilapia (n = 120, 28.6 ± 1.5 g body mass)
were randomly divided into one of four groups in triplicate (Ctr0, Cd0,
Cd1.25, Cd2.5), in 200-L recirculating tanks with the same water and
photoperiod conditions as used in the stock tanks.
After one week of acclimation, the fish were fasted for 24 h, anesthetized
with 2-phenoxyethanol (0.5 mL/L), weighed and injected intraperitoneally
with cadmium solutions (1.25 and 2.5 mg Cd kg−1 body
mass in the form of CdCl2 in 0.9% NaCl) or vehicle alone (0.9% NaCl) as
a sham control (Cd0) and returned to the aquaria. The Ctr0 group was
not subjected to any treatment and was used to evaluate possible manipulation
effects.
At days 1, 4 and 7, ten animals per treatment were anesthetized with
2-phenoxyethanol (1 mL L−1 water) and blood was collected by caudal
puncture using heparinized needles and syringes. Plasma was separated
by centrifugation (3 min at 10,000 g) and aliquots were immediately
frozen in liquid nitrogen and stored at −80 °C. Fish were euthanized
by decapitation and from each, small pieces from the posterior portion
of the kidney and the gill arches were taken using fine-point scissors.
The tissues were placed in SEI buffer (300 mM sucrose/20 mM EDTA/
50 mM imidazole, pH 7.5), and frozen at −80 °C for later Na+/K+-
ATPase activity measurement. Livers were excised and their wet mass
was obtained to calculate the hepatosomatic index (HSI). Larger samples
of gill and kidney were taken, and frozen directly in liquid nitrogen
and stored at −80 °C for Cd concentration determination, immunoblotting,
and for assessing oxidative stress parameters. Additionally, a
sample of white muscle was taken to analyze the percentage of water
in this tissue.
During the experiment no mortality was observed and the described
experiments complied with the European Guidelines (86/609/EU) for
the correct use of laboratorial animals.
2.3. Analytical techniques
2.3.1. Muscle water content, condition factor (K), hepatosomatic index
Muscle water content was determined by subtracting the dry mass
of the sample (70 °C for 2 days) from the initial wet mass and dividing
the product by the initial wet mass.
Condition was determined according to Abowei et al. (2009).K=
100 M/L3
, where K = condition factor; M = fish mass (g); and L =
length of fish (cm).
The hepatosomatic index (HSI) was calculated according to Barton
et al. (2002). HSI = (Liver mass (g) / Body mass (g)) × 100.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. ทดลองออกแบบและการสุ่มตัวอย่างก่อนทดลอง นิล (n = 120, 28.6 ± 1.5 g มวลในร่างกาย)ถูกสุ่มแบ่งออกเป็นสี่กลุ่มใน triplicate (Ctr0, Cd0 อย่างใดอย่างหนึ่งCd1.25, Cd2.5), ในถัง recirculating 200 L น้ำเดียวกัน และเงื่อนไขช่วงแสงที่ใช้ในถังหุ้นหลังจากหนึ่งสัปดาห์ของ acclimation ปลาก็อดใน 24 h ด้วยมี 2-phenoxyethanol (0.5 mL/L), น้ำหนัก และฉีด intraperitoneallyด้วยโซลูชั่นแคดเมียม (1.25 และ 2.5 มิลลิกรัมต่อซีดี kg−1 ร่างกายโดยรวมในแบบฟอร์มของ CdCl2 ใน 0.9% NaCl) หรือรถคนเดียว (0.9% NaCl) เป็นเป็นควบคุม (Cd0) และส่งกลับไปอควาเรีย กลุ่ม Ctr0ไม่ต้องรักษาใด ๆ และใช้ในการประเมินการจัดการได้ผลกระทบในวันที่ 1, 4 และ 7 สัตว์สิบต่อการรักษาได้ด้วยด้วย2-phenoxyethanol (1 mL น้ำ L−1) และเลือดถูกรวบรวม โดย caudalเจาะโดยใช้เข็มฉีดยาและเข็ม heparinized มีแยกพลาสมาโดย centrifugation (3 นาทีที่ 10000 g) และ aliquots ได้ทันทีแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว และเก็บไว้ที่ −80 องศาเซลเซียส ปลาที่ euthanizedโดย decapitation และจาก เล็กชิ้นจากส่วนหลังของไตและอาร์เชสเหงือกได้นำใช้กรรไกรปรับจุดเนื้อเยื่อถูกเก็บไว้ในบัฟเฟอร์อีไอ (300 mM ซูโครส/20 mM EDTA /50 mM อิมิดาโซล pH 7.5), และแช่แข็งที่ −80 ° C สำหรับนาหลัง + /mts K + -การประเมินกิจกรรม ATPase มี excised livers และมวลของน้ำกล่าวในการคำนวณดัชนี hepatosomatic (HSI) ตัวอย่างขนาดใหญ่เหงือกและไตถูกถ่าย และแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่ −80 ° C สำหรับการกำหนดความเข้มข้นซี immunoblottingและประเมินความเครียด oxidative พารามิเตอร์ นอกจากนี้ การตัวอย่างของกล้ามเนื้อสีขาวถูกนำไปวิเคราะห์เปอร์เซ็นต์ของน้ำในเนื้อเยื่อนี้ในระหว่างการทดลองตายไม่ถูกตรวจสอบและอธิบายการทดลองปฏิบัติตามหลักการแนวทางยุโรป (86/609/EU) สำหรับการใช้ที่ถูกต้องของสัตว์ laboratorial2.3 การวิเคราะห์ทางเทคนิค2.3.1 การกล้ามเนื้อน้ำเนื้อหา เงื่อนไขตัวคูณ (K), ดัชนี hepatosomaticปริมาณน้ำกล้ามเนื้อถูกตามลบมวลแห้งของตัวอย่าง (70 ° C สำหรับ 2 วัน) จากต้นเปียกโดยรวม และหารผลิตภัณฑ์จากมวลน้ำเบื้องต้นเงื่อนไขที่ถูกกำหนดตาม Abowei et al. (2009) K =100 M/L3ที่ K =ปัจจัยเงื่อนไข M =มวลของปลา (g); และ L =ความยาวของปลา (ซม.)มีคำนวณดัชนี hepatosomatic (HSI) ตามบาร์ตันal. ร้อยเอ็ด (2002) HSI = (ตับมวล (g) / มวล (g) ในร่างกาย) × 100

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 การออกแบบการทดลองและการสุ่มตัวอย่าง
ก่อนการทดลองเลี้ยงปลานิล (n = 120, 28.6 ± 1.5 กรัมมวลกาย)
ที่ถูกแบ่งเป็นหนึ่งในสี่ของกลุ่มเพิ่มขึ้นสามเท่า (Ctr0, Cd0,
Cd1.25, Cd2.5) ในหมุนเวียน 200-L รถถังที่มีน้ำเดียวกันและ
สภาพแสงที่ใช้ในถังเก็บ.
หลังจากหนึ่งสัปดาห์ของการปรับตัวปลาที่ถูกอดอาหารเป็นเวลา 24 ชั่วโมง, อสัญญี
กับ 2 Phenoxyethanol (0.5 มิลลิลิตร / ลิตร) ชั่งน้ำหนักและเข้า intraperitoneally
กับการแก้ปัญหาแคดเมียม (1.25 และ 2.5 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม Cd-1 ร่างกาย
มวลในรูปแบบของ CdCl2 ใน 0.9% NaCl) หรือยานพาหนะเพียงอย่างเดียว (โซเดียมคลอไรด์ 0.9%) ในขณะที่
การควบคุมเสแสร้ง (Cd0) และกลับไปที่ตู้ กลุ่ม Ctr0 ก็
ไม่ได้ภายใต้การรักษาใด ๆ และถูกนำมาใช้ในการประเมินการจัดการที่เป็นไปได้
ผลกระทบ.
ในวันที่ 1, 4 และ 7 สิบสัตว์ต่อการรักษาได้รับการดมยาสลบกับ
2 Phenoxyethanol (1 มิลลิลิตร L-1 น้ำ) และเลือดที่เก็บรวบรวมโดยหาง
โดยใช้เข็มเจาะ heparinized และเข็มฉีดยา พลาสม่าถูกแยกออก
โดยการหมุนเหวี่ยง (3 นาทีที่ 10,000 กรัม) และ aliquots ทันทีที่ถูก
แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส ปลาถูก euthanized
โดยศีรษะและจากแต่ละชิ้นเล็ก ๆ จากส่วนหลัง
ของไตและเหงือกถูกนำมาใช้กรรไกรปรับจุด.
เนื้อเยื่อถูกวางไว้ในบัฟเฟอร์ SEI (300 มิลลิซูโครส / 20 มิลลิ EDTA /
50 มิลลิ imidazole, ค่า pH 7.5) และแช่แข็งที่ -80 องศาเซลเซียสเป็นเวลาต่อมานา k + + / -
ATPase วัดกิจกรรม ตับถูกตัดและมวลเปียกของพวกเขา
ได้รับในการคำนวณดัชนีตับ (HSI) กลุ่มตัวอย่างขนาดใหญ่
ของเหงือกและไตถูกนำและแช่แข็งโดยตรงในไนโตรเจนเหลว
และเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสสำหรับการกำหนดความเข้มข้นของแคดเมียม immunoblotting,
และพารามิเตอร์สำหรับการประเมินความเครียดออกซิเดชัน นอกจากนี้
ตัวอย่างของกล้ามเนื้อสีขาวถูกนำไปวิเคราะห์เปอร์เซ็นต์ของน้ำ
ในเนื้อเยื่อนี้.
ในระหว่างการทดลองการตายไม่เป็นที่สังเกตและอธิบาย
การทดลองปฏิบัติตามแนวทางยุโรป (86/609 / EU) สำหรับ
การใช้งานที่ถูกต้องของสัตว์ที่ห้องปฏิบัติการ
2.3 เทคนิคการวิเคราะห์
2.3.1 กล้ามเนื้อปริมาณน้ำปัจจัยสภาพ (K) ดัชนีตับ
ปริมาณน้ำกล้ามเนื้อถูกกำหนดโดยการลบมวลแห้ง
ของกลุ่มตัวอย่าง (70 ° C เป็นเวลา 2 วัน) จากมวลเปียกเริ่มต้นและการแบ่ง
ผลิตภัณฑ์โดยมวลเปียกเริ่มต้น.
สภาพเป็น กำหนดตาม Abowei et al, (2009) .K =
100 M / L3
ที่ K = ปัจจัยสภาพ; M = มวลปลา (g); และ L =
ความยาวของปลา (ซม.)
ดัชนีตับ (HSI) ที่คำนวณได้ตามบาร์ตัน
et al, (2002) HSI = (มวลตับ (g) / มวลกาย (ช)) × 100

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การทดลองและสุ่ม
ก่อนการทดลอง ปลานิล ( n = 120 , 28.6 ± 1.5 กรัม มวลร่างกาย )
ถูกแบ่งออกเป็นสี่กลุ่มหนึ่งของทั้งสามใบ ( ctr0 cd0 cd1.25 cd2.5
, , , ) 200-l หมุนเวียนในถังที่มีน้ำเดียวกันและเงื่อนไขที่ใช้ในช่วง

สต็อกถัง หลังจากหนึ่งสัปดาห์ของ acclimation , ปลาอดอาหาร 24 ชั่วโมง วางยาสลบด้วย 2-phenoxyethanol (
0ลิตร 5 ml ) หนัก และก็ฉีดพบ
ด้วยโซลูชั่น ( 1.25 และ 2.5 มิลลิกรัมแคดเมียมซีดีกก− 1 ตัว
มวลชนในรูปแบบของ cdcl2 ใน 0.9% NaCl ) หรือรถคนเดียว ( 0.9% NaCl )
ควบคุม Sham ( cd0 ) และกลับวาเรีย . กลุ่ม ctr0 คือ
ไม่ได้ภายใต้การรักษาใด ๆและถูกใช้ในการประเมินผลการจัดการ

ที่เป็นไปได้ วันที่ 1 , 4 และ 7 , 10 ต่อ การวางยาสลบด้วย
) สัตว์2-phenoxyethanol ( 1 มิลลิลิตร L − 1 น้ำ ) และเลือดเพื่อเจาะกลุ่มระดับ
โดยใช้เข็มและเข็มฉีดยา ระดับน้ำแยก
โดยการเหวี่ยงแยก ( 3 นาทีที่ 10 , 000 กรัม ) และส่วนที่หารลงตัวได้ทันที
แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวที่อุณหภูมิ 80 องศา และบริษัท เวสเทิร์น ปลา euthanized
โดยการตัดหัวและจากแต่ละชิ้นเล็กจาก
ส่วนด้านหลังของไตและเหงือกโค้งถ่ายโดยใช้กรรไกรจุดก็ได้
เนื้อเยื่ออยู่ในเซบัฟเฟอร์ ( 300 มม. ซูโครส / 20 mM EDTA /
อิมิดาโซล 50 มม. pH 7.5 ) , และแช่แข็งที่อุณหภูมิ 80 องศา C −ในภายหลัง na / k -
ATPase กิจกรรมการวัด ตับถูกตัดและมวลของพวกเขาเปียก
ได้คำนวณดัชนี hepatosomatic ( HSI ) ตัวอย่างของเหงือกและไตใหญ่
ถูกถ่ายและแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวโดยตรง
เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 80 องศา C −สำหรับการหาความเข้มข้น ) , ซีดี , และการประเมินค่า
ความเครียดออกซิเดชัน นอกจากนี้
ตัวอย่างกล้ามเนื้อขาวถูกวิเคราะห์ร้อยละของน้ำในเนื้อเยื่อนี้
.
ในระหว่างการทดลองไม่พบการตายและอธิบาย
การทดลองปฏิบัติตามแนวทางของยุโรป ( 86 / 609 / EU )
การใช้งานที่ถูกต้องของสัตว์โดย .
2.3 เทคนิคการวิเคราะห์
2.3.1 . ปริมาณน้ำที่กล้ามเนื้อ องค์ประกอบภาพ ( K ) , hepatosomatic ดัชนี
กล้ามเนื้อปริมาณน้ำถูกกำหนดโดยการลบแห้ง
ของตัวอย่าง ( 70 ° C เป็นเวลา 2 วัน ) จากมวลเปียกเริ่มต้นและหาร
ผลิตภัณฑ์มวลเปียกเริ่มต้น .
สภาพถูกกำหนดตาม abowei et al . ( 2552 ) . k =
100 M / L3
,โดยที่ k = เงื่อนไขปัจจัย ; m = ปลามวล ( g ) ; และ L = ความยาวของปลา ( ซม. )
.
ดัชนี hepatosomatic ( HSI ) คำนวณได้จากบาร์ตัน
et al . ( 2002 ) - = ( มวล / มวลร่างกายตับ ( กรัม ) ( กรัม ) × 100