2.1.1. Sample preparationThe cells

2.1.1. Sample preparation
The cells are seeded the day before analysis in 96-well plates at
5–20  103 cells in 100 ll per well. After induction of cell death,
50 ll of cell supernatant is transferred to a new 96-well plate for
the LDH assay (see below), while the original 96-well plate is used
for the MTT assay at a pre-defined time. After adding 20 ll of MTT
solution (prepared as a 5 mg/ml stock solution in PBS and used at
500 lg/ml) to the cells in each well, the plate is incubated in a CO2
incubator at 37 C for 4–6 h. Then 80 ll of SDS–HCl buffer (10% SDS
and 0.01 N HCl) is added to each well and incubation is continued
for 6–8 h at 37 C to dissolve the formazan crystals. Finally, absorbance
is measured at 595 nm (put reference filter at 655 nm) in a
plate reader. Alternatively, one can use commercially available
assays based on XTT, MTS or WST, and follow the manufacturer’s
instructions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1.1. ตัวอย่างเซลล์มี seeded วันก่อนที่จะวิเคราะห์ใน 96-ดีแผ่นที่5 – 20 103 เซลล์ใน 100 จะต่อดี หลังจากการเหนี่ยวนำของเซลล์ตาย50 ของ supernatant เซลล์จะถูกโอนย้ายไปแผ่น 96 ดีใหม่สำหรับใช้ทดสอบ LDH (ดูด้านล่าง), ในขณะที่แผ่น 96 ดีเดิมสำหรับทดสอบ MTT ในเวลาที่กำหนดไว้ล่วงหน้า หลังจากเพิ่ม 20 ll ของ MTTโซลูชั่น (เตรียมไว้เป็นการแก้ปัญหาสินค้าคงคลัง 5 mg/ml ใน PBS และใช้lg 500/มล) เซลล์ในแต่ละดี จานเป็น incubated ใน CO2incubator ที่ 37 C สำหรับ h 4 – 6 80 แล้วจะบัฟเฟอร์ SDS – HCl (10% SDSและ 0.01 N HCl) จะถูกเพิ่มเข้าไปแต่ละบ่อและบ่มต่อไปสำหรับ 6-8 h ที่ 37 C การละลายผลึก formazan สุดท้าย absorbanceวัดที่ 595 nm (ใส่กรองอ้างอิงที่ 655 นาโนเมตร) ในการอ่านแผ่น หรือ หนึ่งสามารถใช้ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์assays XTT, MTS หรือ WST และปฏิบัติตามของผู้ผลิตคำแนะนำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1.1 การเตรียมตัวอย่าง
เซลล์ที่มีเมล็ดวันก่อนการวิเคราะห์ในแผ่น 96 หลุมที่
5-20? 103 เซลล์ใน 100 LL ต่อดี หลังจากที่เหนี่ยวนำการตายของเซลล์,
50 LL ของสารละลายเซลล์ถูกโอนไปยังจาน 96 ช่องใหม่สำหรับ
การทดสอบ LDH (ดูด้านล่าง) ในขณะที่เดิมแผ่น 96 ดีถูกนำมาใช้
สำหรับการทดสอบ MTT ในเวลาที่กำหนดไว้ล่วงหน้า หลังจากเพิ่ม 20 LL ของ MTT
การแก้ปัญหา (จัดทำขึ้นเป็น 5 mg / แก้ปัญหามลหุ้นในพีบีเอสและใช้ใน
500 LG / ml) ไปยังเซลล์ในแต่ละดีแผ่นถูกบ่มใน CO2
ศูนย์บ่มเพาะที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสสำหรับ 4-6 ชั่วโมง จากนั้น 80 LL ของบัฟเฟอร์ SDS-HCl (SDS 10%
และ 0.01 N HCl) จะถูกเพิ่มในแต่ละดีและบ่มเป็นอย่างต่อเนื่อง
6-8 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสที่จะละลายผลึก formazan ในที่สุดการดูดกลืนแสง
เป็นวัดที่ 595 นาโนเมตร (ใส่ตัวกรองการอ้างอิงที่ 655 นาโนเมตร) ใน
เครื่องอ่านแผ่น อีกทางเลือกหนึ่งที่สามารถใช้งานเชิงพาณิชย์ที่มี
การวิเคราะห์บนพื้นฐานของ xtt, เอ็มทีเอหรือ WST และปฏิบัติตามของผู้ผลิต
คำแนะนำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1.1 . ตัวอย่างการเตรียม
เซลล์เมล็ดก่อนวันการวิเคราะห์ใน 96 ดีตรงที่
5 20 –  103 เซลล์ 100 จะต่อด้วย หลังจากการเหนี่ยวนำให้เซลล์ตาย
50 จะนำเซลล์มาเป็นจานใหม่ 96 ดี
3 หลัง ( ดูด้านล่าง ) ในขณะที่ต้นฉบับ 96 ดีจานใช้
สำหรับ MTT assay ในเวลาที่กำหนดไว้ล่วงหน้า หลังจากเพิ่ม 20 จะของ MTT
วิธีแก้ปัญหา ( เตรียมตัวเป็น 5 มก. / มล. และโซลูชั่นหุ้นใน PBS และใช้ใน LG
500 มิลลิลิตร ) ต่อเซลล์ในแต่ละดี จานถูกบ่มในตู้อบที่อุณหภูมิ 37  co2
C 4 – 6 ชั่วโมง แล้ว 80 จะ SDS และ HCl บัฟเฟอร์ ( 10% SDS
และ 0.01 N HCl ) เพิ่มแต่ละอย่างดีและบ่มต่อ
6 – 8 ชั่วโมง 37  C ละลายเหลือเชื่อ . ในที่สุดค่า
เป็นวัดที่ 595 nm ( ใส่กรองอ้างอิงที่ 655 นาโนเมตร ) ในการอ่านแผ่น

อีกวิธีหนึ่งคือ หนึ่งสามารถใช้ในเชิงพาณิชย์
) ตาม xtt MTS , หรือ WST ทำตามคำแนะนำของผู้ผลิต
.