The results of these experiments de

The results of these experiments demonstrate that photo-
cleavage induced by the oligonucleotide
- fullerene conjugate
occurred at well-defined sites in the duplex, triple helix, and
triple helix with hairpin. This is in sharp contrast with the lack
of site selectivity in the cleavage by the free C,, carboxylic
acid.[61 Figure
2 shows the results obtained with the hairpin
target. Cleavage was observed at guanines but also at thymine
residues (with a lower efficiency). Treatment with piperidine
slighthly increased the intensity of the cleavage bands. Compari-
son with bands generated by piperidine treatment after reaction
with dimethyl sulfate (DMS) suggested that fragments obtained
by photoinduced cleavage were terminated by a 3'-phosphate.
They had the same mobility in the gel as 3'-phosphorylated
products of DMS-induced piperidine cleavage. The cleavage
sites on the three target sequences are shown in Figure
1. The
most reactive guanines were those located in the loop region.
With the
26 base pair duplex (devoid of hairpin structure),
cleavage occurred at guanines of the purine-containing strand
positioned near the 3'-end of the third oligonucleotide strand
(Fig.
1). No cleavage was observed on the other strand of the
duplex. which did not contain any guanines
in the vicinity of the
3'-end
of the third strand (the two terminal Gs could not be
analyzed owing to their too close proximity to the
5' label). On
the single-stranded target photoinduced cleavage occurred at
guanines near the 3'-end of the complementary oligonucleo-
tide-fullerene conjugate (Fig.
1). In all three cases the sites of
cleavage were located in the region of the target expected from
the known orientation of the oligonucleotide carrying the
fullerene derivative
: antiparallel orientation with respect to the
complementary strand in the duplex and parallel to the oligo-
purine target sequence in the triplex structures. The enhanced
reactivity of guanines
in the loop as compared to the stem of the
hairpin duplex might be due to a higher accessibility to singlet
oxygen in the single-stranded loop, even though the reaction
might involve other mechanisms (e.g. electron transfer) result-
ing from folded structures.
These results indicate that the spherical fullerene terminus on
the oligonucleotide chain did not hamper duplex and triplex
formation. The cleavage nearly exclusively took place at gua-
nine bases; this is consistent with singlet oxygen mediation. The
same profile of site and base selectivity was observed with an
oligonucleotide-chlorin conjugate (with the same oligonucleo-
tide sequence). which was shown to generate singlet oxygen
upon irradiation and to cleave nucleic acids (results not shown).
In summary, we have shown that fullerene -oligodeoxynucle-
otide conjugates effectively modify
DNA with high site specifici-
ty by forming double and triple helices. The present results
clearly indicate that
fullerene-oligonucleotide conjugates are
promising photoprobes for the investigation of gene transcrip-
tion and mRNA translation. Design of the optimal linker moi-
ety and conditions needed to achieve high efficiency are now
under investigation. In addition, the hydrophobicity
of the
fullerene moiety can be exploited to enhance cell uptake for
biological applications.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลการทดลองนี้แสดงให้เห็นถึงภาพที่-ความแตกแยกที่เกิดจากการ oligonucleotide-ค่าสังยุคฟูลเลอรีนเกิดขึ้นที่อเมริกาโดยในเกลียวสอง สาม และสามเกลียว ด้วยกิ๊บ จึงขาดความคมชัดคมของไซต์ใวในปริโดย C ฟรี carboxylicกรด [61 รูป2 แสดงผลลัพธ์ที่ได้ ด้วยกิ๊บเป้าหมาย ปริถูกตรวจสอบ ที่ guanines แต่ ที่ไทมีนตกค้าง (มีประสิทธิภาพต่ำ) รักษา ด้วย piperidineslighthly เพิ่มความเข้มของแถบปริ Compari- สนกับวงดนตรีที่สร้างขึ้น โดยรักษา piperidine หลังปฏิกิริยามี dimethyl ซัลเฟต (DMS) แนะนำให้ แยกส่วนได้โดยปริ photoinduced ถูกตัด โดย 3 ฟอสเฟตพวกเขาเคลื่อนไหวเดียวในเจลเป็น 3'-phosphorylatedผลิตภัณฑ์ของ piperidine DMS ทำให้เกิดความแตกแยก ปริการไซต์ในลำดับที่สามเป้าหมายจะแสดงในรูป1guanines สุดปฏิกิริยาผู้อยู่ในวงการด้วยการ26 ฐานคู่หน้า (ปราศจากกิ๊บโครงสร้าง),ความแตกแยกเกิดขึ้นใน guanines ของเดอะสแตรนด์ประกอบด้วย purineตำแหน่งใกล้ 3 สิ้นเดอะสแตรนด์ oligonucleotide สาม(ฟิก1) . แนวแตกเรียบไม่ถูกตรวจสอบในสาระของการดูเพล็กซ์ ซึ่งไม่ประกอบด้วย guanines ใด ๆใน vicinity ของ3 จบของเดอะสแตรนด์สาม (Gs เทอร์มินัลสองไม่สามารถ วิเคราะห์เนื่องจากพวกเขาเกินไปใกล้5' ป้ายชื่อ) บน ปริ photoinduced เป้าหมายเดียวควั่นเกิดที่guanines ใกล้ 3 สิ้นสุดการเสริม oligonucleo-ฟูลเลอรีนน้ำค่าสังยุค (ฟิก1) ในทั้งสามกรณีเว็บไซต์ของปริได้อยู่ในขอบเขตของเป้าหมายที่คาดหวังจากวางแนวชื่อดังของ oligonucleotide ดำเนินการอนุพันธ์ฟูลเลอรีน: ปฐมนิเทศ antiparallel กับ respect เพื่อสาระเพิ่มเติมในการดูเพล็กซ์และควบคู่กับ oligo-ลำดับเป้าหมาย purine ในโครงสร้าง triplex ที่เพิ่มขึ้นเกิดปฏิกิริยาของ guaninesวนซ้ำเมื่อเทียบกับต้นกำเนิดของการกิ๊บที่สองอาจมาจากความสูงกับเสื้อกล้ามออกซิเจนในเดียวขนวน แม้ว่าปฏิกิริยาอาจเกี่ยวข้องกับผลกลไก (เช่นโอนอิเล็กตรอน) อื่น ๆ -กำลังจากพับโครงสร้าง ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า นัสฟูลเลอรีนทรงกลมบนสาย oligonucleotide ไม่ขัดขวางเพล็กซ์และ triplexการก่อ ปริการเอาเกือบเฉพาะเก็ก-ฐานที่ 9 สอดคล้องกับเสื้อกล้ามกาชาดออกซิเจนอยู่ ที่โพรไฟล์เดียวกันของไซต์และฐานใวได้สังเกตด้วยการค่าสังยุค oligonucleotide chlorin (มีเดียวกัน oligonucleo-ไทด์ลำดับ) ซึ่งได้แสดงการสร้างออกซิเจนเสื้อกล้ามเมื่อวิธีการฉายรังสี และกรดนิวคลีอิก (ไม่แสดงผล) แบะ ในสรุป เราได้แสดงให้เห็นว่าฟูลเลอรีน - oligodeoxynucle-otide conjugates ปรับเปลี่ยนได้อย่างมีประสิทธิภาพดีเอ็นเอกับไซต์สูง specifici- ty โดยขึ้นรูป helices สอง และสาม ผลลัพธ์ปัจจุบันระบุอย่างชัดเจนที่มี conjugates oligonucleotide ฟูลเลอรีนphotoprobes สัญญาเพื่อการตรวจสอบยีน transcrip- แปลสเตรชันและ mRNA ออกแบบของอยตัวเชื่อมโยงข้อมูลที่ดีที่สุด-ety และเงื่อนไขที่จำเป็นเพื่อให้บรรลุประสิทธิภาพสูงอยู่ในขณะนี้ภายใต้การตรวจสอบ นอกจากนี้ ที่ hydrophobicityของ สามารถนำไป moiety ฟูลเลอรีนเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการดูดซับเซลล์สำหรับใช้งานทางชีวภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลที่ได้จากการทดลองเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าภาพถ่ายความแตกแยกที่เกิดจาก oligonucleotide - ผัน fullerene ที่เกิดขึ้นในสถานที่ที่ดีที่กำหนดในเพล็กซ์ที่สามเกลียวและเกลียวสามกับกิ๊บ นี่คือในคมชัดกับการขาดของการเลือกเว็บไซต์ในความแตกแยกโดยฟรี C ,, คาร์บอกซิกรด. [61 รูปที่2 แสดงให้เห็นถึงผลที่ได้รับกับกิ๊บเป้าหมาย ความแตกแยกเป็นข้อสังเกตที่ guanines แต่ยังมีนที่ตกค้าง(ที่มีประสิทธิภาพต่ำกว่า) การรักษาด้วย piperidine slighthly เพิ่มขึ้นความเข้มของวงดนตรีที่แตกแยก Compari- ลูกชายกับวงดนตรีที่เกิดจากการรักษา piperidine หลังจากปฏิกิริยากับdimethyl ซัลเฟต (DMS) ชี้ให้เห็นว่าชิ้นส่วนที่ได้รับจากความแตกแยกphotoinduced ถูกยกเลิกโดย 3'ฟอสเฟต. พวกเขามีการเคลื่อนไหวที่เหมือนกันในเจลเป็น 3'-phosphorylated ผลิตภัณฑ์ DMS- เหนี่ยวนำให้เกิดความแตกแยก piperidine ความแตกแยกเว็บไซต์บนสามลำดับเป้าหมายจะแสดงในรูปที่1 guanines ปฏิกิริยาส่วนใหญ่เป็นผู้ที่ตั้งอยู่ในภูมิภาคห่วง. ด้วยเพล็กซ์คู่ฐาน 26 (ไร้โครงสร้างกิ๊บ) ความแตกแยกที่เกิดขึ้นใน guanines สาระ purine-ที่มีตำแหน่งใกล้3'-ท้ายของสาระ oligonucleotide ที่สาม(รูปที่1) ความแตกแยกไม่เป็นที่สังเกตในกลุ่มสาระอื่น ๆ ของเพล็กซ์ ซึ่งไม่ได้มี guanines ใด ๆในบริเวณใกล้เคียงของ3'ปลายของเส้นใยที่สาม (สอง Gs ขั้วไม่สามารถวิเคราะห์เนื่องจากใกล้ชิดเกินไปพวกเขาไปยังป้าย5) เมื่อวันที่เป้าหมายเดียวควั่น photoinduced ความแตกแยกที่เกิดขึ้นใน guanines ใกล้ 3'-ท้ายของ oligonucleo- เสริมผันน้ำ-fullerene (รูปที่. 1) ในทุกกรณีที่สามในเว็บไซต์ของความแตกแยกที่ตั้งอยู่ในภาคกลางของเป้าหมายที่คาดว่าจะมาจากทิศทางที่รู้จักกันดีของoligonucleotide แบกที่อนุพันธ์fullerene: ปฐมนิเทศ antiparallel เกี่ยวกับสาระที่สมบูรณ์ในเพล็กซ์และขนานไปกับoligo- เป้าหมายลำดับ purine ใน โครงสร้างสามเท่า เพิ่มการเกิดปฏิกิริยาของ guanines ในวงเมื่อเทียบกับต้นกำเนิดของเพล็กซ์ปิ่นอาจจะเกิดจากการเข้าถึงที่สูงขึ้นเพื่อเสื้อกล้ามออกซิเจนในวงเดียวควั่นแม้ว่าปฏิกิริยาอาจเกี่ยวข้องกับกลไกอื่นๆ (เช่นการถ่ายโอนอิเล็กตรอน) result- ไอเอ็นจี จากโครงสร้างพับ. ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าสถานี fullerene ทรงกลมในห่วงโซ่oligonucleotide ไม่ได้ขัดขวางเพล็กซ์และสามเท่าก่อ ความแตกแยกที่เกิดขึ้นเกือบเฉพาะที่ gua- เก้าฐาน; นี้มีความสอดคล้องกับการไกล่เกลี่ยออกซิเจนเสื้อกล้าม รายละเอียดเดียวกันของเว็บไซต์และการเลือกฐานเป็นข้อสังเกตที่มีการผัน oligonucleotide-chlorin (มี oligonucleo- เดียวกันลำดับน้ำ) ซึ่งแสดงให้เห็นในการสร้างออกซิเจนเสื้อกล้ามเมื่อฉายรังสีและการแยกกรดนิวคลิอิก (ผลไม่แสดง). โดยสรุปเราได้แสดงให้เห็นว่า fullerene -oligodeoxynucle- conjugates otide ได้อย่างมีประสิทธิภาพปรับเปลี่ยนดีเอ็นเอกับเว็บไซต์สูงspecifici- ไทโดยการสร้างเอนริเก้สองและสาม ผลลัพธ์ที่ได้แสดงให้เห็นว่าconjugates fullerene-oligonucleotide มีphotoprobes แนวโน้มการสอบสวนของยีน transcrip- การและการแปล mRNA การออกแบบที่ดีที่สุดลิงเกอร์ moi- ety และเงื่อนไขที่จำเป็นเพื่อให้บรรลุที่มีประสิทธิภาพสูงอยู่ในขณะนี้อยู่ระหว่างการสอบสวน นอกจากนี้ไฮโดรของครึ่งfullerene สามารถใช้ประโยชน์เพื่อเพิ่มการดูดซึมของเซลล์สำหรับการใช้งานทางชีวภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลการทดลองเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าความแตกแยกที่เกิดจากภาพถ่าย -

-
ฟูลเลอรีน ) ซึ่งเกิดขึ้นที่กำหนดเว็บไซต์ในเพล็กซ์ Triple Helix และ
สามเกลียวด้วยกิ๊บติดผม นี่คือในคมชัดกับขาด
เว็บไซต์การในความแตกแยกโดยฟรี C , กรดคาร์บอกซิลิก

[ 61 รูปที่ 2 แสดงผลที่ได้รับกับกิ๊บ
เป้าหมายตัวที่ guanines ) แต่ยังเพลินตา
ตกค้าง ( ที่มีประสิทธิภาพลดลง ) การรักษาด้วยไพเพอริดีน
slighthly เพิ่มความเข้มของการแยกวง คัมพารี -
ลูกชายกับวงดนตรีที่สร้างขึ้นโดยการรักษาหลังจากปฏิกิริยา
กับไพเพอริดีนไดเมทิลซัลเฟต ( DMS ) พบว่า ได้รับการ photoinduced เศษ
โดยถูกยกเลิกโดย '
3 - ฟอสเฟตพวกเขามีความคล่องตัวเดียวกันในเจลเป็น 3 - ฟอสฟอรีเลเตต
ผลิตภัณฑ์ของไพเพอริดีน DMS และความแตกแยก ลึก
เว็บไซต์ใน 3 เป้าหมายลำดับแสดงในรูป
1
ที่สุด guanines ปฏิกิริยานั้นตั้งอยู่ในเขตวงแหวน .
กับ
26 คู่เบส ดูเพล็กซ์ ( ไร้โครงสร้างกิ๊บ )
ความแตกแยกที่เกิดขึ้นใน guanines ของพิวรีนที่มีเกลียว
ตั้งอยู่ใกล้ 3 ' - จบที่สาม ซึ่งสาระ ( รูปที่ 1

) ไม่มีการพบในกลุ่มสาระอื่น ๆ ของ
เพล็กซ์ ซึ่งไม่ได้มีใด ๆในบริเวณใกล้เคียงของ guanines

3
' จบที่สามของเกลียว ( 2 ) GS ไม่สามารถ
วิเคราะห์เนื่องจากใกล้ชิดเกินไปของป้าย
5 ' ) ในตัวเดียวติดเป้าหมาย photoinduced

เกิดที่guanines ใกล้ 3 ' - ปลายเสริม oligonucleo - ไทด์ ฟลูเลอรีน ( รูป )

1 ) ในทั้งสามกรณีเว็บไซต์ของ
ความแตกแยกอยู่ในเขตของเป้าหมายที่คาดหวังจาก
รู้ทิศทางของซึ่งถือ

: ฟูลเลอรีนอนุพันธ์ทิศทางตรงกันข้ามปฐมนิเทศด้วยความเคารพ
สาระเสริม ในเพล็กซ์ และขนานกับโอลิโก -
พิวรีน เป้าหมายลำดับในโครงสร้างสามเท่า การเพิ่มประสิทธิภาพของ guanines

ในวงเมื่อเทียบกับก้านของ
กิ๊บ ดูเพล็กซ์ อาจจะเนื่องจากการที่สูงกว่าการเสื้อกล้าม
ออกซิเจนในเดียวติดห่วง ถึงแม้ว่าปฏิกิริยา
อาจเกี่ยวข้องกับกลไกอื่น ๆ ( เช่นอิเล็กตรอนโอน ) ผล -
ing จากพับโครงสร้าง
ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า ปลายทางฟูลเลอรีนทรงกลมบน
ซึ่งโซ่ไม่ได้ขัดขวางเพล็กซ์ และ Triplex
ก่อตัว ลึกเกือบเฉพาะเอาสถานที่ในกัว -
9 ฐาน นี้สอดคล้องกับเสื้อกล้ามไกล่เกลี่ยออกซิเจน
เดียวกันรายละเอียดของเว็บไซต์และฐานการพบกับ
ซึ่งคลอรีน ) ( กับ oligonucleo เดียวกัน -
ลำดับไทด์ )ที่ถูกแสดงเพื่อสร้างออกซิเจนเสื้อกล้าม
เมื่อฉายรังสีและแยกกรดนิวคลีอิก ( ผลลัพธ์ไม่แสดง )
สรุปได้ว่า เราได้แสดงให้เห็นว่า oligodeoxynucle ฟูลเลอรีน - -

otide สารประกอบมีประสิทธิภาพปรับเปลี่ยนดีเอ็นเอสูงเว็บไซต์ specifici -
ไท โดยเป็นสองและสาม helices . ผลที่บ่งชี้อย่างชัดเจนว่า


ซึ่งเป็นสารประกอบฟลูเลอรีนสัญญา photoprobes สำหรับการสืบสวนของยีน transcrip -
tion และ mRNA แปล การออกแบบที่ดีที่สุดสนามกอล์ฟ มท. -
ety และเงื่อนไขที่จำเป็นเพื่อให้บรรลุประสิทธิภาพสูงตอนนี้
ภายใต้การสอบสวน นอกจากนี้ ความไม่ชอบของ

ต่อเยอรมันแน่นอนสามารถใช้ประโยชน์เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการดูดซึมของเซลล์สำหรับ
การใช้งานทางชีวภาพ