2.5 Pectinase AssayThe pectinase ac

2.5 Pectinase Assay
The pectinase activity of the crude culture filtrate was assayed according to the modified method of
Miller (1959) as reported by Wang et al. (1997). The reaction mixture consisted of 0.80 ml of 1.0% w/v polygalacturonic acid in 100 mM Na2CO3−NaHCO3 buffer (pH 9.0) and 0.20 ml of supernatant (enzyme
solution). Control tubes (Enzyme blank) contained the same amount of substrate and 0.2 ml of the crude filtrate (enzyme solution) boiled for 10 min. Both the experimental and control tubes were incubated at 40 °C for 30 min. The reaction was terminated by the addition of 1.5 ml of 3,5-Dinitrosalicyclic acid (DNSA) reagent and the absorbance was taken at 540nm. One unit of pectinase activity was defined as the amount of enzyme that liberated reducing sugar equivalent to 1 μmol galacturonic acid per minute under the specified assay conditions (Karthik et al.,2011). A standard calibration curve of galacturonic acid was constructed and used for the estimation of
the polygalacturonic acid equivalent in μmol/ml/min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 ทดสอบ Pectinaseกิจกรรม pectinase ของสารกรองวัฒนธรรมดิบถูก assayed ตามวิธีการปรับเปลี่ยนของมิลเลอร์ (1959) เป็นรายงานโดย Wang et al. (1997) ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วยมล 0.80 ของกรด polygalacturonic 1.0% w/v ใน 100 มม. Na2CO3−NaHCO3 บัฟเฟอร์ (pH 9.0) และ 0.20 ml ของ supernatant (เอนไซม์การแก้ปัญหา) หลอดควบคุม (เอนไซม์เปล่า) ประกอบด้วยยอดเงินเท่ากันของพื้นผิวและ 0.2 ml ของหยาบสารกรอง (เอนไซม์โซลูชัน) ต้มสำหรับ 10 นาที ทั้งการทดลอง และควบคุมหลอดถูก incubated ที่ 40 ° C ใน 30 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิก โดยการเพิ่ม 1.5 ml ของรีเอเจนต์ (DNSA) กรด 3,5-Dinitrosalicyclic และ absorbance ที่ถูกนำมาที่ 540nm กิจกรรม pectinase หน่วยหนึ่งถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่ liberated น้ำตาลลดลงเท่ากับกรด galacturonic μmol 1 ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบที่ระบุ (Karthik et al., 2011) เส้นโค้งการปรับเทียบมาตรฐานของกรด galacturonic ถูกสร้าง และใช้สำหรับการประเมินของpolygalacturonic กรดเหมือนใน μmol/ml/min

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 เพคติ Assay
กิจกรรมเพคติเนสของกรองวัฒนธรรมน้ำมันดิบได้รับการวิเคราะห์ตามวิธีการแก้ไขของ
มิลเลอร์ (1959) ขณะที่ในรายงานของ Wang และคณะ (1997) ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 0.80 มล 1.0% w / v กรด polygalacturonic ในบัฟเฟอร์ 100 มิลลิ Na2CO3-NaHCO3 (pH 9.0) และ 0.20 มิลลิลิตรของสารละลาย (เอนไซม์
สารละลาย) หลอดควบคุม (เอนไซม์ที่ว่างเปล่า) ที่มีปริมาณที่เท่ากันของพื้นผิวและ 0.2 มิลลิลิตรกรองหยาบ (สารละลายเอนไซม์) ต้มเป็นเวลา 10 นาที ทั้งในหลอดทดลองและกลุ่มควบคุมถูกบ่มที่ 40 ° C เป็นเวลา 30 นาที ปฏิกิริยาถูกยกเลิกโดยนอกเหนือจาก 1.5 มิลลิลิตรของ 3,5-Dinitrosalicyclic กรด (DNSA) เอเจนต์และการดูดกลืนแสงที่ถูกนำ 540Nm หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเพคติเนสถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ลดการปลดปล่อยเทียบเท่าน้ำตาล 1 ไมโครโมลกรดกาแลคต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบที่กำหนดไว้ (คาร์ทิ et al., 2011) เส้นโค้งการสอบเทียบมาตรฐานของกรดกาแลคถูกสร้างขึ้นและใช้สำหรับการประมาณ
เทียบเท่ากรด polygalacturonic ในไมโครโมล / ml / นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 วิเคราะห์กิจกรรมของเอนไซม์เพคติเนส
วัฒนธรรมดิบจากซีรั่มตามการดัดแปลงวิธีการ
มิลเลอร์ ( 1959 ) รายงานโดย Wang et al . ( 1997 ) ปฏิกิริยาผสมจำนวน 0.80 กรัม 1.0 % W / V polygalacturonic กรดใน 100 มม. Na2CO3 −โซเดียมไบคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ pH 9.0 ) และ 0.20 มล. สูง ( เอนไซม์
แก้ปัญหา )หลอดควบคุม ( เอนไซม์ว่าง ) มีจำนวนเท่ากัน ( 0.2 มิลลิลิตรของกรองหยาบ ( สารละลายเอนไซม์ ) ต้มประมาณ 10 นาที กลุ่มทดลองและควบคุมหลอดที่อุณหภูมิ 40 องศา C เป็นเวลา 30 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิกโดยเพิ่ม 1.5 มิลลิลิตรของกรด 3,5-dinitrosalicyclic ( dnsa ) สารเคมีและค่าถ่าย ที่ 540nm .หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์อิสระลดน้ำตาลเท่ากับ 1 μโมลกรดกาแลคต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขระบุว่า คาร์ธิค et al . , 2011 ) เส้นโค้งสอบเทียบมาตรฐานของกรดกาแลคถูกสร้างขึ้น และใช้สำหรับการประมาณค่า
polygalacturonic เทียบเท่ากรดในμ mol / มิลลิลิตร / นาที