Alcohols of the highest available p

Alcohols of the highest available purity were obtained from Sigma Chemical (St. Louis, MO). We determined the alcohols' bilayer-modifying potency using a gA-based fluorescence assay as described previously (37,38) and in the Supporting Material. In brief, we made fluorophore-loaded large unilamellar lipid vesicles (LUVs) using a mixture of hydration, sonication, freeze-thawing, and mini-extrusion. The vesicle-forming lipid was 1,2-dierucoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DC22:1PC; Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL), which was selected based on the gA channel dynamics and gel/liquid-crystalline transition temperature (see Supporting Material). The fluorophore was the disodium salt of 8-aminonaphthalene-1,3,6-trisulfonic acid (ANTS; Invitrogen, Eugene, OR). Experiments were done with gA-containing and -free LUVs. The gA-containing LUVs were incubated with 260 nM gA from Bacillus brevis (Sigma Chemical) for 24 h before each experiment. The LUVs were incubated with the alcohols for 10 min at 25°C, which was sufficient for equilibration (see Supporting Material). We determined the gA channel activity from the fluorescence time course, recorded with an SX.20 stopped-flow spectrometer (Applied Photophysics, Leatherhead, UK), after mixing the ANTS-loaded LUVs 1:1 with either a gA channel-permeable quencher (Tl+; 50 mM TlNO3, 94 mM NaNO3, 10 mM HEPES, pH 7.0) or a Tl+-free buffer (140 mM NaNO3, 10 mM HEPES, pH 7.0). The fluorescence was normalized to the initial buffer value and the rate of quencher influx was quantified as described in the Supporting Material. We quantified each alcohol's bilayer-modifying potency (D) as the concentration at which the alcohol doubled the quenching rate, which we determined by fitting a linear relation (f([alc]) = 1 + [alc]/D) to the relative increases in quenching rate as a function of alcohol concentration ([alc]).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แอลกอฮอล์ของความบริสุทธิ์สูงสุดมีได้รับจาก Sigma เคมี (เซนต์หลุยส์ MO) เรากำหนดของแอลกอฮอล์ bilayer ปรับเปลี่ยนความแรงโดยใช้การทดสอบการเรืองแสงที่ใช้ gA ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (37,38) และ ใน วัสดุสนับสนุน สังเขป เราทำโหลด fluorophore unilamellar ใหญ่ถุงไขมัน (LUVs) ใช้ส่วนผสมของความชุ่มชื้น sonication แช่แข็งละลาย และอัดรีดมินิ ไขมันขึ้นรูปเวสิเคิลคือ 1,2-dierucoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DC22:1PC ไขมันขั้วโลกงติ Alabaster, AL), ซึ่งถูกเลือกตาม dynamics ช่อง gA และเจล/ของเหลวผลึกอุณหภูมิ (ดูวัสดุสนับสนุน) Fluorophore เป็นเกลือของกรด 8-aminonaphthalene-1,3,6-trisulfonic (มด หัว Invitrogen ยูจีน OR) การทดลองที่ทำกับ LUVs มี gA และ - ฟรี LUVs gA ที่ประกอบด้วยการได้รับการกกกับ 260 nM gA จากคโตบาซิลลัสบาซิลลัส (เคมี Sigma) 24 ชั่วโมงก่อนการทดลองแต่ละ LUVs ได้รับการกก ด้วยแอลกอฮอล์สำหรับ 10 นาทีที่ 25° C ซึ่งเพียงพอสำหรับ equilibration (ดูวัสดุสนับสนุน) เรากำหนดกิจกรรมช่อง gA จากการเรืองแสงที่เรียน บันทึก ด้วยสเปกโตรมิเตอร์หยุดไหล SX.20 การ (ใช้ Photophysics, Leatherhead, UK), หลังผสม LUVs มดโหลด 1:1 พร้อมซึมเข้าไปได้ช่อง quencher gA (Tl + 50 มม. TlNO3, 94 มม. NaNO3, 10 มม. HEPES, pH 7.0) หรือ Tl + -บัฟเฟอร์ฟรี (140 มม. NaNO3, 10 มม. HEPES, pH 7.0) เรืองแสงได้ตามปกติค่าบัฟเฟอร์การเริ่มต้น และอัตราการไหลเข้าของ quencher ถูกวัดตามที่อธิบายไว้ในวัสดุสนับสนุน เราวัดแอลกอฮอล์แต่ละ bilayer ปรับเปลี่ยนความแรง (D) เป็นความเข้มข้นที่แอลกอฮอล์เท่าอัตราชุบ ซึ่งเราถูกกำหนดโดยความสัมพันธ์เชิงเส้น (f([alc]) = 1 + [ด] / d) การเพิ่มขึ้นของความสัมพัทธ์ชุบราคาเป็นฟังก์ชันของความเข้มข้นแอลกอฮอล์ ([ด])

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แอลกอฮอล์ของความบริสุทธิ์สูงสุดที่ได้รับจากซิกเคิล ( St. Louis, มิสซูรี) เรากำหนดแอลกอฮอล์ 'แรง bilayer ปรับเปลี่ยนโดยใช้การทดสอบเรืองแสง GA-ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (37,38) และสนับสนุนวัสดุ ในช่วงสั้น ๆ ที่เราทำสารเรืองแสงโหลดขนาดใหญ่ถุง unilamellar ไขมัน (LUVs) โดยใช้ส่วนผสมของความชุ่มชื้น sonication แช่แข็งละลายและมินิอัดขึ้นรูป ไขมันตุ่มขึ้นรูปเป็น 1,2-dierucoyl-SN-glycero-3-phosphocholine (DC22: 1PC; Avanti ขั้วโลกไขมันเศวตศิลา, AL) ซึ่งได้รับการคัดเลือกขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลง GA ช่องทางและเจล / ของเหลวผลึกเปลี่ยนอุณหภูมิ (ดูการสนับสนุนวัสดุ) สารเรืองแสงเป็นเกลือโซเดียม 8 aminonaphthalene-1,3,6-trisulfonic Acid (มด; Invitrogen, Eugene, OR) ทดลองทำกับ GA-มีและฟรี LUVs LUVs GA-มีถูกบ่ม 260 นาโนเมตร GA จาก Bacillus brevis (Sigma เคมี) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อนการทดสอบแต่ละ LUVs ถูกบ่มกับแอลกอฮอล์เป็นเวลา 10 นาทีที่ 25 ° C ซึ่งก็เพียงพอสำหรับการปรับสมดุล (ดูการสนับสนุนวัสดุ) เรากำหนดกิจกรรมของช่อง GA จากหลักสูตรเวลาเรืองแสง, บันทึกด้วย SX.20 หยุดไหลสเปกโตรมิเตอร์ (ประยุกต์ Photophysics, เลสหราชอาณาจักร) หลังจากผสม LUVs มดโหลด 1: 1 กับทั้งดับช่องดูดซึมจอร์เจีย ( TL + 50 มิลลิ TlNO3 94 มิลลิ NaNO3 10 มิลลิ HEPES ค่า pH 7.0) หรือ tl + ฟรีบัฟเฟอร์ (140 มิลลิ NaNO3 10 มิลลิ HEPES ค่า pH 7.0) เรืองแสงได้รับปกติกับค่าบัฟเฟอร์เริ่มต้นและอัตราการไหลบ่าเข้ามาดับก็วัดที่อธิบายไว้ในการสนับสนุนวัสดุ เราวัดความแรงแต่ละเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ของ bilayer การปรับเปลี่ยน (D) เป็นความเข้มข้นที่ดื่มเครื่องดื่มแอลกอฮอล์เป็นสองเท่าอัตราการดับซึ่งเรากำหนดโดยการปรับความสัมพันธ์เชิงเส้น (F ([ALC]) = 1 + [ALC] / D) กับญาติ เพิ่มขึ้นในอัตราที่เป็นหน้าที่ของความเข้มข้นของแอลกอฮอล์ดับ ([ALC])

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แอลกอฮอล์ของความบริสุทธิ์ที่สุดที่มีอยู่ได้จาก Sigma เคมี ( St . Louis , MO ) เราพบแอลกอฮอล์ โดยใช้ศักยภาพการใช้ GA " ตามการวิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( 37,38 ) และในการสนับสนุนวัสดุ ในช่วงสั้น ๆ ทำให้เรา fluorophore โหลดขนาดใหญ่ unilamellar ไขมันเล็ก ( luvs ) การใช้ส่วนผสมของความชุ่มชื้น sonication แช่แข็งละลาย และไหลออกมา มินิ ในรูปคือว่าไขมัน 1,2-dierucoyl-sn-glycero-3-phosphocholine ( dc22:1pc ; AVANTI ขั้วโลกไขมัน เศวตศิลา , Al ) ซึ่งถูกเลือกตามกาช่องพลวัตและเจลเหลวอุณหภูมิเปลี่ยนผลึก ( ดูสนับสนุนวัสดุ ) การ fluorophore คือ Disodium เกลือของกรด 8-aminonaphthalene-1,3,6-trisulfonic ( มด ; Invitrogen ยูจีน หรือ ) ทดลองทำ กา ที่มี และ luvs ฟรี เกมที่มี luvs ถูกบ่มกับ 260 GA nm จากเชื้อแบคทีเรีย ซิกม่า เคมี ) 24 ชั่วโมงก่อนที่แต่ละการทดลอง การ luvs ถูกบ่มกับแอลกอฮอล์ สำหรับ 10 นาทีที่ 25 ° C ซึ่งก็เพียงพอสำหรับ equilibration ( ดูสนับสนุนวัสดุ ) เรามุ่งมั่นที่กาช่องกิจกรรมจากการบันทึกเวลาที่แน่นอนด้วย sx.20 หยุดไหล ( ใช้กล้อง photophysics Leatherhead , สหราชอาณาจักร ) หลังจากผสมมดโหลด luvs 1 : 1 ให้กาช่องซึมเร ( TL + ; 50 มม. tlno3 94 มม. NaNO3 10 มิลฮีเปส , pH 7.0 ) หรือ ทีแอล + - บัฟเฟอร์ฟรี ( 140 มม. NaNO3 10 มิลฮีเปส , pH 7.0 ) เรืองแสงเป็นปกติที่จะเริ่มต้นบัฟเฟอร์และค่าอัตราการไหลเข้าเป็นผู้ดับไฟวัดตามที่อธิบายไว้ในการสนับสนุนวัสดุ เราวัดได้คือเหล้าแต่ละสองชั้นปรับเปลี่ยนความแรง ( D ) เป็นสมาธิที่แอลกอฮอล์เท่าดับคะแนน ซึ่งเรากำหนดโดยกระชับความสัมพันธ์เชิงเส้น ( F ( [ รูปแบบ ] ) = 1 + [ รูปแบบ ] / D ) เพิ่มขึ้นในอัตราสัมพัทธ์ดับเป็นฟังก์ชันของความเข้มข้นของแอลกอฮอล์ ( [ รูปแบบ ] )