Extraction and analysis of chloroph

Extraction and analysis of chlorophyll a/b binding protein (LHCP)
Leaf tissue was ground in liquid N, and then the mixture was
homogenized in 10 volumes of buffer containing 50 mM Tris–HCl
(pH 8.0) and 5 mM EDTA. The homogenate was centrifuged at
10,000
×g at 4 ◦C for 10 min. The pellet was suspended in sample
buffer consisting of 50 mM Tris–HCl (pH 6.8), 2% SDS, 0.6% mercaptoethanol,
and 10% glycerol, and cooled on ice for 10 min. The
suspension was centrifuged twice at 12,000
×
g at 4 ◦C for 10 min,
and then the supernatant was heated for 5 min in boiling water, and
then cooled immediately on ice for 2 min. Proteins were separated
by SDS-PAGE using 15% polyacrylamide gel. The gel was transferred
into the solution containing 20% methanol and 7.5% acetic acid, and
incubated for 30 min. Proteins were visualized with Coomassie brilliant
blue-G250 (CBB-G250) by incubating the gel in the solution
containing 5% methanol and 7% acetic acid after staining the gel
in the solution containing 0.25% CBB-G250, 50% methanol, and 5%
acetic acid for 30 min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การสกัดและวิเคราะห์โปรตีนรวมคลอโรฟิลล์ a/b (LHCP)เนื้อเยื่อใบถูกพื้นในของเหลว N และถูกผสมแล้วhomogenized เป็นกลุ่มในปริมาณ 10 ของบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วยทริสเรทติ้ง – HCl 50 มม.(pH 8.0) และ 5 mM EDTA Homogenate ถูก centrifuged ที่10000กรัมซื้อที่ ◦C 4 ใน 10 นาที เม็ดที่ถูกระงับในตัวอย่างบัฟเฟอร์ประกอบด้วย 50 มม.ตรี – HCl (pH 6.8), SDS 2%, 0.6% mercaptoethanolและกลีเซอร 10% และน้ำแข็งเย็น ๆ ใน 10 นาทีนี้ระบบกันสะเทือนถูก centrifuged สองที่ 12000×g ที่ ◦C 4 ใน 10 นาทีแล้ว supernatant ถูกความร้อนสำหรับ 5 นาทีในการต้มน้ำ และแล้ว ระบายความร้อนด้วยทันทีบนน้ำแข็งสำหรับโปรตีน 2 นาทีถูกแบ่งโดย SDS หน้าใช้ 15% polyacrylamide เจ เจมีการโอนย้ายในโซลูชันที่ประกอบด้วยเมทานอล 20% และ 7.5% กรดน้ำส้ม และincubated สำหรับโปรตีน 30 นาทีมี visualized ด้วย Coomassie ใสสีฟ้า-G250 (CBB G250) โดย incubating เจลในการแก้ปัญหาประกอบด้วย 5% เมทานอลและ 7% กรดอะซิติกหลังจากย้อมสีเจในโซลูชันที่ประกอบด้วย% CBB G250 0.25 เมทานอล 50% และ 5%กรดอะซิติกสำหรับ 30 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสกัดและวิเคราะห์คลอโรฟิล / b โปรตีน (LHCP)
เนื้อเยื่อใบเป็นพื้นดินในของเหลวไม่มีแล้วส่วนผสมที่
หดหายใน 10 เล่มของบัฟเฟอร์ที่มีขนาด 50 มม Tris-HCl
(pH 8.0) และ 5 มิลลิ EDTA homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่
10,000
×กรัมที่ 4 ◦Cเป็นเวลา 10 นาที เม็ดที่ห้อยอยู่ในกลุ่มตัวอย่าง
บัฟเฟอร์ประกอบด้วย 50 มิลลิเมตร Tris-HCl (pH 6.8), 2% SDS, 0.6% mercaptoethanol,
และ 10% กลีเซอรอลและการระบายความร้อนบนน้ำแข็งเป็นเวลา 10 นาที
ระงับการปั่นครั้งที่สอง 12,000
×
กรัมที่ 4 ◦Cเป็นเวลา 10 นาที
และจากนั้นใสถูกความร้อนเป็นเวลา 5 นาทีในน้ำเดือดและ
แล้วเย็นทันทีบนน้ำแข็งเป็นเวลา 2 นาที โปรตีนที่ถูกแยกออก
โดยวิธี SDS-PAGE ใช้เจล polyacrylamide 15% เจลถูกย้าย
ลงในสารละลายที่มีส่วนผสมของเมทานอล 20% และกรดอะซิติก 7.5% และ
บ่มเป็นเวลา 30 นาที โปรตีนที่ได้รับการมองเห็นด้วย Coomassie สดใส
สีฟ้า G250 (CBB-G250) โดยบ่มเจลในสารละลาย
ที่มีส่วนผสมของเมทานอล 5% และ 7% กรดอะซิติกหลังจากคราบเจล
ในการแก้ปัญหาที่มี 0.25% CBB-G250 50% เมทานอลและ 5 %
กรดอะซิติกเป็นเวลา 30 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดและการวิเคราะห์ปริมาณโปรตีน ( lhcp / b )
เนื้อเยื่อใบพื้นดินในน้ำ N แล้วส่วนผสมจะถูกบดใน 10 เล่ม
บัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย 50 มม. โดย– HCl
( pH 8.0 ) และ 5 mM EDTA โดยแยกเป็นระดับที่ 10

ที่ 4 ◦× G C 10 นาทีเม็ดถูกระงับในตัวอย่าง
บัฟเฟอร์ประกอบด้วย 50 มม. โดย– HCl ( พีเอช 6.8 ) 2 % SDS , 0.6% mercaptoethanol
,และ 10 % กลีเซอรอล และระบายความร้อนด้วยน้ำแข็ง 10 นาที

ถูกระงับระดับสองครั้งที่ 12 ×
G ที่ 4 ◦ C นาน 10 นาที แล้วนำ
ให้ความร้อนเป็นเวลา 5 นาทีในน้ำเดือดและ
แล้วเย็นทันทีในน้ำแข็งเป็นเวลา 2 นาที โปรตีนแยก
ถูกใช้ 15 % โพลีอะคริลาไมด์เจล เจลโอน
ในสารละลายที่มีเมทานอล 20% และ 7.5% และ
กรดอะซิติกบ่มเป็นเวลา 30 นาที คือ ปรากฏการณ์ที่มีโปรตีนเหล่านี้น่าจะเป็นสดใส
blue-g250 ( cbb-g250 ) โดยการแช่ในสารละลาย
เจลที่มีเมทานอล 5% และ 7% หลังจากการย้อมสีกรดเจล
ในสารละลายที่มี 0.25% cbb-g250 50% เมธานอล และ กรด 5%

เป็นเวลา 30 นาที