This method is used routinely in our lab to measure total phenol. The procedure is also used for analysis of total phenol in tea. It uses the minimum volume of reagents and almost eliminates wasted reagent. Good micro pipets must be used for reproducibility. Plastic or glass cuvettes can be used. It is based on the method reported in Slinkard, K.; Singleton, V. L. Total Phenol Analysis: Automation and Comparison with Manual Methods. American Journal of Enology and Viticulture 1977, 28: 49-55; only the volumes have been reduced. If you cannot reproducibly measure such small volumes, try to reduce the volumes to the smallest you can. This reduces waste and disposal volume.
Folin Ciocalteu Reagent. This is usually purchased as the 2N reagent available from Sigma (F9252) or from Fisher Scientific (ICN19518690), and presumably others. Singleton and Rossi AJEV 1965, 16: 144-158, describe the preparation of the reagent from sodium tungstate, sodium molybdate, lithium sulfate, bromine, and some acids. Solutions containing the FC reagent must be disposed of as hazardous waste.
Gallic Acid Stock Solution. In a 100-mL volumetric flask, dissolve 0.500 g of dry gallic acid in10 mL of ethanol and dilute to volume with water. Can be opened daily, but to store, keep closed in a refrigerator up to two weeks.
Sodium Carbonate Solution. Dissolve 200 g of anhydrous sodium carbonate in 800 mL of water and bring to a boil. After cooling, add a few crystals of sodium carbonate, and after 24 hr, filter and add water to 1 L. Should be stable indefinitely.
To prepare a calibration curve, add 0, 1, 2, 3, 5, and 10 mL of the above phenol stock solution into 100 mL volumetric flasks, and then dilute to volume with water. These solutions will have phenol concentrations of 0, 50, 100, 150, 250, and 500 mg/L gallic acid, the effective range of the assay. Left over gallic acid solutions can be poured down the drain.
From each calibration solution, sample, or blank, pipet 20 µL into separate cuvettes, and to each add 1.58 mL water, and then add 100 µL of the Folin-Ciocalteu reagent, and mix well. Wait for between 30 sec and 8 min, and then add 300 µL of the sodium carbonate solution , and shake to mix. Leave the solutions at 20°C for 2 hr and determine the absorbance of each solution at 765 nm against the blank (the "0 mL" solution) and plot absorbance vs. concentration. Alternatively, they can be left at 40°C for 30 min before reading the absorbance.
For white wines, add 20 µL as for the calibration solutions, but in the case of red wines, dilute the wines by 10 first, then add 20 µL (or skip the dilution and add 2 µL if you have precise micro pipettors).
Create a calibration curve with the standards and determine the levels in the samples. Do not neglect to multiply the observed concentrations by any dilution factor of the original sample. Results are reported at Gallic Acid Equivalent, GAE, because the phenols in wine contain mostly other phenols, and only small amounts of gallic acid.
Interferences. Reducing sugars such as glucose and fructose cause minor interferences and must be corrected. Sulfites also cause an interference but the magnitude is variable. It is usually not an important factor except for white wines with medium to high sulfite levels (>50 mg/L) and low phenol levels (
วิธีการนี้ถูกนำมาใช้เป็นประจำในห้องปฏิบัติการของเราที่จะวัดฟีนอลรวม ขั้นตอนนี้ยังถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ของฟีนอลรวมในชา จะใช้ปริมาณขั้นต่ำของสารเคมีและเกือบจะช่วยลดการสูญเสียสาร pipets ไมโครดีจะต้องนำมาใช้สำหรับการทำซ้ำ พลาสติกหรือแก้ว cuvettes สามารถใช้ มันขึ้นอยู่กับวิธีการที่มีการรายงานใน slinkard, k. เดี่ยว, VL การวิเคราะห์ฟีนอลรวม:ระบบอัตโนมัติและเมื่อเทียบกับวิธีการด้วยตนเอง วารสารอเมริกันของการปลูกองุ่นและ enology 1977 28: 49-55; เพียง แต่ปริมาณที่ได้รับการลดลง ถ้าคุณไม่สามารถ reproducibly วัดปริมาณขนาดเล็กดังกล่าวพยายามที่จะลดปริมาณการที่เล็กที่สุดที่คุณสามารถ นี้ช่วยลดของเสียและปริมาณการจำหน่าย.
folin ciocalteu สารนี้จะซื้อมักจะเป็นสาร 2n จากซิก (f9252) หรือจากชาวประมงทางวิทยาศาสตร์ (icn19518690) และอื่น ๆ สันนิษฐานว่า เดี่ยวและรอสซี ajev 1965 16: 144-158, อธิบายถึงการเตรียมความพร้อมของสารโซเดียมจาก tungstate โซเดียมโมลิบลิเธียมซัลเฟตโบรมีนและกรดบาง การแก้ปัญหาที่มีสาร fc ต้องกำจัดขยะอันตราย.
สารละลายกรดหุ้นฝรั่งเศส ในขวดปริมาตร 100 มล. ละลาย 0.500 กรัม IN10 กรดแห้ง มล. ฝรั่งเศสของเอทานอลและเจือจางปริมาณน้ำ สามารถเปิดได้ทุกวัน แต่ในการจัดเก็บให้ปิดในตู้เย็นถึงสองสัปดาห์. การแก้ปัญหาคาร์บอเนต
โซเดียม ละลาย 200 กรัมปราศจากโซเดียมคาร์บอเนตใน 800 มล. ของน้ำและนำไปต้ม หลังจากระบายความร้อนเพิ่มไม่กี่ผลึกของโซเดียมคาร์บอเนตและหลัง 24 ชั่วโมงกรองและเติมน้ำ 1 ลิตร ควรจะมีเสถียรภาพไปเรื่อย ๆ .
เพื่อเตรียมความพร้อมการสอบเทียบโค้งเพิ่ม 0, 1, 2, 3, 5, และ 10 มล. ของการแก้ปัญหาดังกล่าวข้างต้นหุ้นฟีนอลเป็น 100 มล. ขวดปริมาตรและจากนั้นเจือจางปริมาณน้ำ โซลูชั่นเหล่านี้จะมีความเข้มข้นของฟีนอล 0, 50, 100, 150, 250, และ 500 mg / l ฝรั่งเศสกรด, ช่วงที่มีประสิทธิภาพของการทดสอบเหลือโซลูชั่นฝรั่งเศสกรดสามารถเทลงท่อระบายน้ำ.
จากกันแก้ปัญหาการสอบเทียบตัวอย่างหรือเปล่าปิเปต 20 ไมโครลิตรลงใน cuvettes ที่แยกจากกันและแต่ละเพิ่ม 1.58 มล. น้ำแล้วเพิ่ม 100 ไมโครลิตรของสาร folin-ciocalteu และผสมให้เข้ากัน รอระหว่าง 30 วินาทีและ 8 นาทีแล้วเพิ่ม 300 ไมโครลิตรของสารละลายโซเดียมคาร์บอเนตและเขย่าผสมออกจากการแก้ปัญหาที่ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงและตรวจสอบการดูดกลืนแสงของการแก้ปัญหาแต่ละที่ 765 นาโนเมตรกับที่ว่างเปล่า ("0 มล. " การแก้ปัญหา) และการดูดกลืนแสงพล็อตเทียบกับความเข้มข้น หรือพวกเขาสามารถทิ้งไว้ที่ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีก่อนที่จะอ่านการดูดกลืนแสง.
สำหรับไวน์ขาวเพิ่ม 20 ไมโครลิตรสำหรับการแก้ปัญหาการสอบเทียบ แต่ในกรณีของไวน์แดง, ไวน์เจือจางด้วย 10 ครั้งแรกแล้วเพิ่ม 20 ไมโครลิตร (หรือข้ามเจือจางและเพิ่ม 2 ไมโครลิตรถ้าคุณมี pipettors ไมโครแม่นยำ).
สร้างเส้นโค้งการสอบเทียบกับมาตรฐานและกำหนดระดับในตัวอย่าง ไม่ได้ละเลยที่จะคูณความเข้มข้นสังเกตโดยปัจจัยการเจือจางใด ๆ ของกลุ่มตัวอย่างที่เป็นต้นฉบับ จะมีการรายงานผลที่เทียบเท่าฝรั่งเศสกรด, GAE เพราะฟีนอลในไวน์มีฟีนอลอื่น ๆ ส่วนใหญ่และมีเพียงจำนวนน้อยของฝรั่งเศสกรด.
รบกวน ลดน้ำตาลเช่นน้ำตาลกลูโคสและฟรุกโตสทำให้เกิดการรบกวนน้อยและจะต้องได้รับการแก้ไข ซัลไฟต์นี้ยังทำให้เกิดการรบกวน แต่ขนาดเป็นตัวแปร มันมักจะไม่เป็นปัจจัยสำคัญยกเว้นไวน์ขาวที่มีขนาดกลางถึงระดับสูงซัลไฟต์ (> 50 mg / l) และฟีนอลในระดับต่ำ (<250 mg / l) ascorbate การรบกวนอื่นแต่ก็มีการตอบสนองมวลญาติของ 0.68 ดังนั้นไวน์กับ 30 mg / l ascorbate จะต้องได้รับการแก้ไขโดยการลบ 20.4 mg / l จากค่าฟีนอลทั้งหมด ทดสอบนี้มีการตอบสนองต่อสารลดใด ๆ ดังนั้นหากนำไปใช้กับประเภทอื่น ๆ ตัวอย่างข้อผิดพลาดขนาดใหญ่ที่อาจจะพบ.
ตั้งแต่มาตรการทดสอบฟีนอลทั้งหมดทางเลือกของฝรั่งเศสกรดเป็นมาตรฐานขึ้นอยู่กับความพร้อมของสารที่มีความเสถียรและบริสุทธิ์และฝรั่งเศสกรดเป็นทั้งและมันก็ไม่แพงกว่าตัวเลือกอื่น ๆ นอกจากนี้การตอบสนองต่อฝรั่งเศสกรดได้รับการแสดงให้เห็นว่าเทียบเท่ากับฟีนอลอื่น ๆ มากที่สุดในไวน์บนพื้นฐานมวลเรายังมีการทดสอบความมั่นคงของฝรั่งเศสสารละลายมาตรฐานกรดและเราสามารถพูดได้ว่าพวกเขาสูญเสียน้อยกว่า 5% ของมูลค่าของพวกเขาในช่วงสองสัปดาห์เมื่อตู้เย็นและเก็บไว้ปิดฝาให้แน่น.
คุณต้องทำขึ้นกราฟมาตรฐานของคุณเองทุกครั้งที่การวิเคราะห์จะดำเนินการ . ไม่ได้ใช้ข้อมูลนี้เป็นเส้นโค้งมาตรฐาน มันเป็นที่นี่เป็นเพียงตัวอย่างของกราฟมาตรฐานทั่วไป.
การแปล กรุณารอสักครู่..

วิธีนี้จะใช้เป็นประจำในห้องปฏิบัติการของเราวัดวางทั้งหมด ยังมีใช้กระบวนการสำหรับวิเคราะห์วางรวมในชา จะใช้ระดับเสียงต่ำสุดของ reagents และเกือบเอารีเอเจนต์เสีย ต้องใช้ไมโคร pipets ดีสำหรับ reproducibility สามารถใช้พลาสติกหรือแก้ว cuvettes มันขึ้นอยู่กับวิธีการรายงานใน Slinkard คุณ เดี่ยว วิเคราะห์วาง V. L. รวม: อัตโนมัติและเปรียบเทียบกับวิธีการด้วยตนเอง สมุดอเมริกัน Enology และ Viticulture 1977, 28:49-55 ลดลงเฉพาะไดรฟ์ข้อมูล ถ้าคุณ reproducibly ไม่สามารถวัดปริมาณดังกล่าวเล็ก พยายามที่จะลดปริมาณให้น้อยที่สุดคุณสามารถ ลดขยะและกำจัดปริมาณ
รีเอเจนต์ Folin Ciocalteu นี้มักจะซื้อเป็นรีเอเจนต์ 2N ว่าง จากซิก (F9252) หรือ จาก Fisher วิทยาศาสตร์ (ICN19518690), และสันนิษฐานว่าผู้อื่น ซิงเกิลตันและซซิ AJEV 1965, 16:144-158 อธิบายการเตรียมรีเอเจนต์ tungstate โซเดียม โซเดียม molybdate ลิเทียมซัลเฟต โบรมีน และกรดบางอย่าง ขายโซลูชั่นที่ประกอบด้วยรีเอเจนต์ FC ต้องถูกทิ้งเป็นขยะอันตราย
กรด Gallic หุ้นโซลูชัน ในหนาวแบบ volumetric 100 mL ละลาย 0.500 g ของมล in10 กรด gallic แห้งของเอทานอล และ dilute กับปริมาตรน้ำ สามารถเปิดทุกวัน แต่การจัดเก็บ เก็บปิดในตู้เย็นขึ้นไปสองสัปดาห์
โซเดียมคาร์บอเนตโซลูชัน ละลาย 200 g ของไดโซเดียมคาร์บอเนตใน 800 mL ของน้ำ และนำไปต้มเป็น หลังจากทำความเย็น เพิ่มกี่ผลึกของโซเดียมคาร์บอเนต หลังจาก 24 ชั่วโมง กรอง และน้ำเพิ่ม 1 L. ควรจะมั่นคงอย่างไม่มีกำหนดด้วย
เตรียมเทียบเส้นโค้ง เพิ่ม 0, 1, 2, 3, 5 และ 10 mL ของโซลูชันหุ้นวางข้างใน 100 mL volumetric flasks การ dilute แล้ว ให้ปริมาณน้ำ โซลูชั่นเหล่านี้จะมีวางที่ความเข้มข้น 0, 50, 100, 150, 250 และ 500 mg/L กรด gallic ช่วงทดสอบมีประสิทธิภาพ สามารถ poured ซ้ายกว่าโซลูชั่นกรด gallic ลงท่อระบายน้ำ
จากแต่ละโซลูชั่นเทียบ ตัวอย่าง ว่าง pipet 20 µL เป็น cuvettes แยก และแต่ละเพิ่ม 1.58 mL น้ำ แล้วเพิ่ม 100 µL ของรีเอเจนต์ Folin-Ciocalteu และผสมกันได้ รอ 30 วินาทีและนาทีที่ 8 แล้วเพิ่ม 300 µL โซลูชันโซเดียมคาร์บอเนต และเขย่าให้ผสมกัน ปล่อยโซลูชั่นที่ 20° C 2 ชั่วโมง และกำหนด absorbance ของแต่ละวิธีที่ 765 nm ว่าง (โซลูชัน "0 mL") และพล็อต absorbance กับความเข้มข้น หรือ พวกเขาสามารถถูกทิ้งที่ 40° C สำหรับ 30 นาทีก่อนอ่านค่า absorbance ได้
สำหรับไวน์ขาว เพิ่ม 20 µL สำหรับโซลูชั่นเทียบ แต่ในกรณี ของไวน์แดง ไวน์ โดยแรก 10, dilute เพิ่ม 20 µL (หรือข้ามการเจือจาง และเพิ่ม 2 µL ถ้าคุณ pipettors ละเอียดไมโคร)
สร้างเส้นโค้งเทียบกับมาตรฐาน และกำหนดระดับในตัวอย่าง ละเลยการคูณความเข้มข้นพบปัจจัยการเจือจางตัวอย่างเดิม มีรายงานผลที่กรด Gallic เท่า GAE, phenols ในไวน์มี phenols อื่น ๆ ส่วนใหญ่ และขนาดเล็กจำนวนของกรด gallic
Interferences ลดน้ำตาล เช่นกลูโคสและฟรักโทส interferences เล็กน้อยทำให้ต้องแก้ไข Sulfites ยังทำให้เกิดการรบกวน แต่ขนาดเป็นตัวแปร ไม่ปกติเป็นปัจจัยที่สำคัญยกเว้นไวน์ขาวกับปานกลางถึงระดับสูงซัลไฟต์ (> 50 mg/L) และระดับต่ำวาง (< 250 mg/L) Ascorbate มีสัญญาณอื่นรบกวน มันมีการตอบสนองโดยรวมญาติของ 0.68 ไวน์กับ ascorbate 30 mg/L ต้องแก้ไข โดยการลบ 20.4 mg/L ค่าวางรวมกัน วิเคราะห์นี้จะตอบสนองต่อสารใด ๆ ลดลง ดังนั้นถ้าใช้กับตัวอย่างชนิดอื่น ๆ อาจพบข้อผิดพลาดที่ใหญ่ขึ้น
เนื่องจากการทดสอบวัด phenolics ทั้งหมด เลือกกรด gallic เป็นมาตรฐานขึ้นอยู่กับความพร้อมของสารบริสุทธิ์ และมีเสถียรภาพ และกรด gallic ทั้ง และแพงน้อยกว่าตัวเลือกอื่น ๆ การตอบสนองต่อกรด gallic ได้ถูกแสดงจะเท่ากับสูงสุดอื่น ๆ phenolics ในไวน์ตามมวล เรายังได้ทดสอบความเสถียรของโซลูชั่นมาตรฐานกรด gallic และเราสามารถบอกพวกเขาสูญเสียน้อยกว่า 5% ของมูลค่าของมากกว่าสองสัปดาห์เมื่อรเออร์ และยังคงปิดแน่น
คุณต้องสร้างสรีระมาตรฐานเองทุกครั้งที่ทำการวิเคราะห์ ใช้ข้อมูลนี้เป็นเส้นโค้งมาตรฐาน มันอยู่ที่นี่เป็นตัวอย่างของเส้นโค้งปกติมาตรฐานเท่านั้น
การแปล กรุณารอสักครู่..
