Mouse acquired HPV tumor using dors

Mouse acquired HPV tumor using dorsal skin-fold window chamber
Monthon Lertworapreecha1, Suthiluk Patumraj2 , Somchai Niruthisard3,
Pokrath Hansasuta4 & Parvapan Bhattarakosol4*
1
Inter-Department of Medical Microbiology, Graduate School, Departments of 2Physiology, 3Gynaecology and
4Microbiology, Faculty of Medicine, Chulalongkorn University, Rama 4 road, Bangkok 10330, Thailand
Received 27 November 2008; revised 24 February 2009
Human papillomavirus (HPV) plays important role in developing several types of cancer especially cervical cancer. In
order to understand the viral pathogenesis, the animal model of HPV infection is very necessary. This communication
reports establishment of an animal model carrying implanted HeLa cells, a human cervical cancer cell line via dorsal skin-
fold window chambers. Nude mice were divided into 4 groups; each group contained different amount of HeLa cells,
2.5×105, 5×105, and 1×106 cells, and cell free medium (control), respectively. The results showed that even using the low
number of HeLa cells (2.5×105), the tumor microvasculature was developed at 2 weeks after implantation with the enlarged
tumor margin which then progressed to tumor mass in the following week. The existing tumor was confirmed to be HeLa-
cell type by PCR, in situ hybridization, and HPV genotyping. By using linear regression analysis, it indicated that means of
tumor size from each group significantly increased in relation to number of HeLa cells used (R2 = 0.98, y = 0.1171x+4.35).
This mouse model will be useful for the further HPV studies particularly anti-cancer drugs efficacy.
Keywords: Dorsal skin-fold window chamber, HPV Tumor, Mouse model
Human papillomavirus (HPV) is a naked, icosahedral
capsid, about 8 kb circular double stranded DNA virus,
belonging to the family Papillomaviridae1. At present
more than 150 different HPV types have been reported2.
Approximately 40 types of HPV involve in anogenital
tract infection and they can be classified as high risk (i.e.,
HPV 16, 18, 31, 33, and 35) and low risk (i.e., HPV 6 and
11) types according to the spectrums of their abilities to
induce cancers2,3. Unlike other viruses, HPV is highly
host-specific, unable to propagate in normal cell culture
and its replication cycle requires the differentiation
process of keratinocytes2,4. Thus, the interaction of
virus and host is not well understood. Many attempts
have been made using several means to develop
animal model, starting from direct inoculation of HPV
extracted from naturally human lesion to human
neonatal foreskin and then grafted underneath the
renal capsule of athymic mice5, direct transplant
tumor tissue by xenograft technique and development
of transgenic mice containing HPV E6 gene6,7. An
attempt has been made by inoculating HPV
transformed cervical cell line, HeLa, into dorsal skin-
fold window chamber. An animal model carrying
__________
*Correspondent author
Telephone: [phone]; ext. 616
Fax: [phone]
E-mail: [e-mail]
human cervical cancer cells was conducted. The
implanted mice were monitored for their weight
changes and size of tumor. The tumor
microvasculature was also investigated under an
intravital fluorescence videomicroscope. In addition,
tumor lesion was then confirmed to be HeLa mass by
using PCR technique, in situ hybridization, and HPV
genotyping.
Materials and Methods
Animals―Female BALB/c-nude mice from
National Laboratory Animal Center of Salaya
Campus, Mahidol University, Bangkok, Thailand
aged 4-8 weeks and weighing 20-25 g were used. The
animals were handled as recommended by the guide
for the care and use of experimental animals 1996,
Institute of Laboratory Animal Resources,
Commission on Life Sciences, National Research
Council, USA.
Cervical cancer cell line―HeLa cell is a human
cervical cancer cell line which contains integrated
HPV-18 genome approximately 10-30 copies/cell8.
The cells were cultured in MEM medium (HyClone;
USA) supplemented with 10% heat-inactivated fetal
bovine serum (HyClone, USA), penicillin (50 unit/ml)
and streptomycin (50 µg/ml) with split ratio of 1:3.
They were subcultured every 2-3 days regularly to

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เมาส์มาเนื้องอกมะเร็งปากมดลูกใช้ dorsal skin-fold หน้าต่างหอ
Lertworapreecha1 มณฑล Suthiluk Patumraj2 สมชาย Niruthisard3,
& Pokrath Hansasuta4 Parvapan Bhattarakosol4 *
1
อินเตอร์ภาควิชาจุลชีววิทยา บัณฑิตวิทยาลัย หน่วยงานที่ทางการแพทย์ของ 2Physiology, 3Gynaecology และ
4Microbiology คณะแพทยศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย ถนนพระราม 4 กรุงเทพ 10330 ประเทศไทย
ได้รับ 27 2551 พฤศจิกายน แก้ไข 24 กุมภาพันธ์
มนุษย์ papillomavirus (HPV) บทบาทสำคัญในการพัฒนาหลายชนิดของมะเร็งโดยเฉพาะมะเร็งปากมดลูก ใน
สั่งเข้าใจพยาธิกำเนิดไวรัส รูปสัตว์ติดเชื้อ HPV มีความจำเป็นมากขึ้น การสื่อสารนี้
รายงานจัดดำเนินการแบบจำลองสัตว์ implanted เซลล์ HeLa บรรทัดเซลล์มะเร็งปากมดลูกมนุษย์ผ่าน dorsal ผิว-
พับหน้าต่างห้อง หนูเปลือยกายถูกแบ่งออกเป็น 4 กลุ่ม แต่ละกลุ่มประกอบด้วยจำนวนแตกต่างกันที่เซลล์ HeLa,
2.5 × 105, 5 × 105 และ 1 × 106 เซลล์และเซลล์อิสระกลาง (ควบคุม), ตามลำดับ ผลพบว่าแม้ใช้ต่ำสุด
จำนวนเซลล์ HeLa (2.5 × 105), microvasculature เนื้องอกถูกพัฒนาขึ้นใน 2 สัปดาห์หลังจากการประดิษฐ์ด้วยการขยาย
ขอบเนื้องอกที่แล้ว หน้าไปเพียงใดให้มวลเนื้องอกในสัปดาห์ต่อไปนี้ เนื้องอกที่มีอยู่ได้รับการยืนยันเป็น HeLa-
เซลล์ชนิด ทาง PCR ใน situ hybridization, HPV genotyping โดยใช้การวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้น มันระบุว่า ของ
ขนาดเนื้องอกแต่ละกลุ่มอย่างมีนัยสำคัญเพิ่มขึ้นโดยสัมพันธ์กับจำนวนเซลล์ HeLa (R2 = 0.98, y = 0.1171 x 4.35) .
เมาส์รุ่นนี้จะเป็นประโยชน์สำหรับมะเร็งปากมดลูกการศึกษาประสิทธิภาพของยาโดยเฉพาะอย่างยิ่งป้องกันมะเร็ง
คำสำคัญ: Dorsal skin-fold หน้าต่างหอการค้า เนื้องอกมะเร็งปากมดลูก เมาส์รุ่น
มนุษย์ papillomavirus (HPV) เป็นเปลือย icosahedral
capsid เกี่ยวกับ 8 ฐานวงกลมคู่ตกค้างดีเอ็นเอไวรัส,
ของครอบครัว Papillomaviridae1 ปัจจุบัน
HPV ชนิดต่าง ๆ มากกว่า 150 แล้ว reported2
ประมาณ 40 ชนิดของ HPV ที่เกี่ยวข้องกับใน anogenital
ติดเชื้อทางเดินอาหารและพวกเขาสามารถจำแนกได้เป็นความเสี่ยงสูง (i.e.,
HPV 16, 18, 31, 33 และ 35) และความเสี่ยงต่ำ (เช่น HPV 6 และ
11) ชนิดตามการ spectrums ความสามารถในการ
ก่อให้เกิด cancers2, 3 ซึ่งแตกต่างจากไวรัสอื่น ๆ มะเร็งปากมดลูกคือ
โฮสต์เฉพาะ สามารถสืบพันธุ์ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ปกติ
และวงจรจำลองต้องการสร้างความแตกต่าง
กระบวนการของ keratinocytes2, 4 ดังนั้น การโต้ตอบของ
ไวรัสและโฮสต์ไม่เป็นดีที่เข้าใจ ความพยายามมากมาย
ได้ทำโดยใช้หลายวิธีในการพัฒนา
รูปสัตว์ เริ่มต้นจาก inoculation โดยตรงของมะเร็งปากมดลูก
แยกจากแผลตามธรรมชาติมนุษย์เพื่อมนุษย์
หนังหุ้มปลายที่ทารกแรกเกิดแล้ว grafted ภายใต้การ
ไตแคปซูลของ athymic mice5 ปลูกตรง
เนื้องอกเยื่อ xenograft เทคนิคและพัฒนา
ของถั่วเหลืองหนูประกอบด้วย HPV E6 gene6, 7 การ
พยายาม โดย inoculating HPV
แก่นบรรทัดในเซลล์ปากมดลูก HeLa, dorsal ผิว-
พับหน้าต่างหอการค้า ดำเนินการแบบจำลองสัตว์
___
* ผู้สื่อข่าวผู้เขียน
โทรศัพท์: 66-2-256-4132 ต่อ 616
โทรสาร: 66-2-252-5952
อีเมล: [e-mail]
มนุษย์มะเร็งปากมดลูกได้ดำเนินการ ใน
หนูลิฟต์ถูกตรวจสอบสำหรับน้ำหนักของ
เปลี่ยนแปลงและขนาดของเนื้องอก เนื้องอก
microvasculature ยังถูกสอบสวนภายใต้การ
intravital fluorescence videomicroscope นอกจากนี้,
แผลเนื้องอกได้แล้วยืนยัน จำนวนมาก HeLa โดย
การใช้เทคนิค PCR ใน situ hybridization และมะเร็งปากมดลูก
genotyping.
วัสดุและวิธีการ
หนู Animals―Female BALB/c-nude จาก
ชาติปฏิบัติสัตว์ศูนย์ของศาลายา
มหาวิทยาลัย มหาวิทยาลัยมหิดล กรุงเทพ ไทย
g 20-25 อายุ 4-8 สัปดาห์ และน้ำหนักใช้ ใน
สัตว์ถูกจัดการแนะนำ โดยไกด์
สำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง 1996,
สถาบันของห้องปฏิบัติการสัตว์ทรัพยากร,
กรรมาธิการวิทยาศาสตร์สุขภาพ วิจัยแห่งชาติ
สภา สหรัฐอเมริกา.
เซลล์ line―HeLa เซลล์มะเร็งปากมดลูกเป็นมนุษย์
รวมบรรทัดในเซลล์มะเร็งปากมดลูกซึ่งประกอบด้วย
สำเนา HPV 18 กลุ่มประมาณ 10-30 / cell8.
เซลล์มีอ่างในหน่วยความจำ (HyClone;
สหรัฐอเมริกา) เสริม ด้วย 10% ยกเลิกร้อนครรภ์
เซรั่มวัว (HyClone สหรัฐอเมริกา) ยาเพนนิซิลลิน (50 หน่วย/มล)
และ streptomycin (50 ไมโครกรัมเป็นเครื่อง/มล) มีอัตราส่วนการแบ่งของ 1:3.
จะได้ subcultured ทุก 2-3 วันเป็นประจำการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เมาส์ที่ใช้พับของผิวหนังเนื้องอก HPV หลังหน้าต่างห้อง
มณฑล lertworapreecha1 สุทธิชัย patumraj2 , สมชาย niruthisard3
pokrath , hansasuta4 &ประสิทธิ์ bhattarakosol4 *
1
ระหว่างภาควิชาจุลชีววิทยาทางการแพทย์ บัณฑิตวิทยาลัย และหน่วยงานของ 2physiology 3gynaecology ,
4microbiology คณะแพทยศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย ถนน พระราม 4 กรุงเทพฯ 10330
ได้รับ 27 พฤศจิกายน 2551 ; แก้ไข 24 กุมภาพันธ์ 2552
Human papillomavirus ( HPV ) มีบทบาทสำคัญในการพัฒนาโรคมะเร็งหลายชนิด โดยเฉพาะมะเร็งปากมดลูก ใน
เพื่อให้เข้าใจรูปแบบของโรคไวรัสสัตว์ติดเชื้อ HPV เป็นสิ่งที่จำเป็น นี้รายงานการสื่อสาร
ก่อตั้งของสัตว์แบบแบกใส่ล่าเซลล์มนุษย์ มะเร็งปากมดลูก เซลล์ผิว -
พับเส้นผ่านทางหน้าต่างห้อง หนูเปลือยถูกแบ่งออกเป็น 4 กลุ่ม แต่ละกลุ่มมีจำนวนแตกต่างกันของ Hela cells
2.5 × 105 5 × 105 1 × 106 เซลล์ , และสื่อมือถือฟรี ( การควบคุม ) , ตามลำดับ ผลการศึกษาพบว่า แม้แต่การใช้เบอร์ต่ำ
ของ Hela เซลล์ ( 2.5 × 105 )เนื้องอก microvasculature ถูกพัฒนาใน 2 สัปดาห์หลังจากการปลูกด้วยการขยาย
ขอบซึ่งก้าวหน้ามวลเนื้องอกเนื้องอกในสัปดาห์ต่อไปนี้ เนื้องอกที่มีอยู่เป็นที่ยืนยันว่า Hela -
ชนิดเซลล์โดยวิธี PCR ใน situ hybridization และ HPV เขต . โดยใช้การวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้น พบว่าวิธีการของ
ขนาดของเนื้องอกจากแต่ละกลุ่มเพิ่มขึ้นในความสัมพันธ์กับจำนวนเซลล์ Hela ใช้ ( R2 = 0.98 , Y = 0.1171x 4.35 ) .
รูปแบบเมาส์ นี้จะเป็นประโยชน์สำหรับการติดเชื้อ HPV โดยเฉพาะยาต้านมะเร็งการศึกษาประสิทธิภาพ .
คำสำคัญ : หน้าต่างห้องด้านหลังพับของผิวหนัง เนื้องอก การติดเชื้อ HPV , เมาส์แบบ
Human papillomavirus ( HPV ) คือ เปลือย icosahedral
, เพลี้ย , เกี่ยวกับ 8 KB กลมคู่ติดไวรัส DNA
เป็นของครอบครัว papillomaviridae1 . ปัจจุบัน
มากกว่า 150 แตกต่างกัน HPV ชนิดที่ได้รับ reported2 .
ประมาณ 40 ชนิดของ HPV ที่เกี่ยวข้องกับการติดเชื้อทางเดินร่วมเพศทางทวารหนัก
และพวกเขาสามารถจัดเป็นความเสี่ยงสูง ( เช่น
HPV 16 , 18 , 31 , 33 , 35 ) และความเสี่ยงต่ำ ( เช่น การติดเชื้อ HPV ชนิด 6 และ 11
) ตาม ที่สอดคล้องของตัวเอง

ชวน cancers2,3 . ซึ่งแตกต่างจากไวรัส HPV เป็นอย่างสูง
โฮสต์เฉพาะ ไม่สามารถแพร่พันธุ์ในเซลล์ปกติและมีซ้ำ

รอบต้องมีการกระบวนการ keratinocytes2,4 . ดังนั้น การปฏิสัมพันธ์ของ
ไวรัสและยังไม่เข้าใจ . ต้องใช้ความพยายามมาก

หลายวิธีที่จะพัฒนาสัตว์ทดลอง เริ่มจากการฉีดวัคซีน HPV โดยตรง สารสกัดจากธรรมชาติของมนุษย์

เพื่อมนุษย์หนังหุ้มปลายเด็กแรกเกิดแล้ว โดยใต้
แคปซูลของ athymic mice5 ไต , ปลูกถ่ายเนื้อเยื่อมะเร็งโดยตรง

เทคนิคอมเงินและการพัฒนาของหนูที่มีเชื้อยีน E6 gene6,7 . เป็น
พยายามทำให้มีการฉีดวัคซีน HPV
เปลี่ยนบรรทัดเซลล์ปากมดลูกถึงในผิว -
พับหน้าต่างหลังห้อง สัตว์แบบแบก __________


นักข่าวผู้เขียนโทรศัพท์ :66-2-256-4132 ; และเขา 66-2-252-5952

โทรสาร : อีเมลล์ : ปรีชา @ จุฬา โดย
มนุษย์ มะเร็งปากมดลูก เซลล์เป็น
อยู่หนูก็ติดตามการเปลี่ยนแปลงน้ำหนัก
และขนาดของเนื้องอก เนื้องอก
microvasculature ศึกษาภายใต้
intravital เรืองแสง videomicroscope . นอกจากนี้
เนื้องอกแผลได้ยืนยันที่จะมีมวลถึงการใช้เทคนิค PCR โดย
,ใน situ hybridization และส่งเสริม HPV
.

ผมอยากหญิงสัตว์วัสดุและวิธีการ balb / c-nude หนูจากศูนย์สัตว์ทดลองแห่งชาติ ศาลายา

มหาวิทยาลัย , มหาวิทยาลัยมหิดล
อายุ 4-8 สัปดาห์ และน้ำหนัก 20-25 กรัมมาใช้
สัตว์ถูกจัดการตามที่แนะนำโดยคู่มือ
สำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง พ.ศ. 2539 สถาบันทรัพยากรสัตว์ทางห้องปฏิบัติการ

,คณะกรรมการด้านวิทยาศาสตร์ชีวิต , สภาวิจัยแห่งชาติสหรัฐอเมริกา

, เซลล์มะเร็งปากมดลูกเส้นผมอยากล่าเซลล์เป็นเซลล์มะเร็งปากมดลูกของมนุษย์

hpv-18 บรรทัดซึ่งประกอบด้วยแบบบูรณาการจีโนมประมาณ 10-30 แผ่น / cell8 .
เซลล์เพาะเลี้ยงในเมมขนาดกลาง ( hyclone ;
USA ) เสริมด้วย 10% fetal bovine serum ( inactivated ความร้อน
hyclone , USA ) , ยา ( 50 หน่วยต่อมิลลิลิตร )
และ streptomycin ( 50 µ g / ml ) ด้วยอัตราส่วนแบ่งของ 1 : 3 .
พวก subcultured ทุก 2-3 วันเสมอ