2. Methods2.1. MicroorganismsFour m

2. Methods
2.1. Microorganisms
Four marine microalgal strains were used: the eustigmatophyceae
N. gaditana Lubián CCMP 527, the chlorophyceae T. chuii
SAG 8-6 and T. suecica CCAP 66/4, and the bacillariophyceae P. tricornutum
SAG 1090-1a. All inoculums were cultured at 23 C in
0.5 L flasks with Algal-enriched natural seawater under continuous
illumination (75 lE/m2 s) and aeration at 0.2 v/v min. The inoculums
were grown to exponential growth phase for its use in
photobioreactors.
2.2. Culture conditions
Experiments were carried out indoors in four glass bubble column
photobioreactors (0.5 m height, 0.07 m diameter). The columns
were provided with a medium inlet as well as a harvest
valve, and an input for a pH sensor at the top. Air was bubbled
up from the bottom of the column at 0.5 v/v min for agitation
and removal of dissolved oxygen. The temperature was maintained
at 20 C by circulating thermostated water through the column
jacket. To keep the pH within the optimum range (7.80–7.85)
CO2 was injected on demand into the air stream. The illumination
simulated the circadian cycle and was provided by six white-light
lamps with a maximum irradiance of 950 lE/m2 s. Experiments
were performed in both discontinuous and continuous mode. In
continuous mode diaphragm pumps were used to supply the culture
medium in the light period, and the harvest was collected
and used for analysis.
2.3. Culture medium
In order to determine the most adequate culture medium for
the growth of the selected seawater strains, filtrated (0.22 lm)
and autoclaved natural seawater was supplemented with four
standard media: f/2 medium (Guillard and Ryther, 1962), Mann
& Myers medium (Mann and Myers, 1968), Algal medium (Bionova,
Santiago, Spain) and Arnon medium (Arnon et al., 1974). Sodium
nitrate was added to the latter medium at a concentration
of 0.49 g NaNO3/l.
2.4. Analytical procedures
The biomass concentration was determined daily by measuring
absorbance at 750 nm with a spectrophotometer (ATI UNICAM UV/
Vis Spectrometer UV2, Cambridge, UK). In order to verify spectrophotometric
measurements dry weight determinations were carried
out twice per week. Additionally, to monitor the status of
the cells, the ratio of variable to maximum chlorophyll fluorescence
(Fv/Fm ratio) was measured daily with a fluorometer (AquaPen
AP 100, Photon Systems Instruments, Drasov, Czech Republic).
The irradiance on the reactor surface, Io (lE/m2 s), was measured
with a 4p quantum scalar irradiance sensor QSL-100 (Biospherical
Instrument, San Diego, CA, USA).
In order to determine the biochemical composition of biomass,
culture samples were centrifuged and lyophilized. The protein content
was determined by a modification of the Lowry method
(López et al., 2010). The elemental composition (C, N, H, and S)
was measured using an elemental analyser LECO CHNS-932 (St. Joseph,
MI, USA). The total lipid content was determined by the
method proposed by Kochert (1978). The fatty acids content and
profile were obtained by direct transesterification and gas chromatography
(Agilent Technologies 6890 N Series Gas Chromatograph,
Santa Clara, CA, USA) as described by Rodríguez-Ruiz et al. (1998).
Additionally, total lipid fractionation was carried out by the method
of Kates (1986) with the following modifications: firstly, total
lipids are extracted by the method described by Kochert (1978)
and a sample containing 10 mg of fatty acids is taken, dissolved
in 0.5 ml of chloroform and introduced in a silica gel column
(Sep-Pak Plus Silica WAT020520, Waters, Mildford, Massachusetts,
USA). The first elution is made with 30 ml of chloroform in order to
collect neutral lipids and the second elution is performed with
30 ml of acetone plus 20 ml of chloroform:methanol mixture
85:15 v/v so as to collect glycolipids. The third elution is carried
out with 30 ml of methanol to collect phospholipids. Finally each
fraction is analyzed by gas chromatography.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วิธี2.1. จุลินทรีย์ใช้ทางทะเล microalgal สี่สายพันธุ์: eustigmatophyceae การN. gaditana Lubián CCMP 527, chuii T. chlorophyceaeเสียขวัญ 8-6 และ suecica T. CCAP 66/4 และอื่น[P. bacillariophyceaeย้อย 1090-1a Inoculums ทั้งถูกล้างที่อุณหภูมิ 23 C ในขวด 0.5 ลิตรกับน้ำทะเลธรรมชาติอุดม Algal ใต้อย่างต่อเนื่องแสงสว่าง (75 เลอ/m2 s) และเติมอากาศ v/v 0.2 นาที Inoculums การที่ปลูกระยะเรขาสำหรับการใช้งานในphotobioreactors2.2. วัฒนธรรมเงื่อนไขทดลองดำเนินการในร่มในคอลัมน์ฟองแก้วสี่photobioreactors (ความสูง 0.5 ม. เส้นผ่านศูนย์กลาง 0.07 m) คอลัมน์โดยทางเข้ากลางตลอดจนการเก็บเกี่ยววาล์ว และอินพุตสำหรับเซ็นเซอร์วัดค่า pH ที่ด้านบน มีฟองอากาศจากด้านล่างของคอลัมน์ที่ 0.5 v/v นาทีสำหรับความปั่นป่วนและการกำจัดของออกซิเจนละลายน้ำ คือรักษาอุณหภูมิที่ 20 C โดยหมุนเวียนน้ำที่ควบคุมอุณหภูมิผ่านคอลัมน์เสื้อ เพื่อให้ค่า pH อยู่ในช่วงที่เหมาะสม (7.80 – 7.85)CO2 ที่ถูกฉีดตามเข้าไปในกระแสอากาศ ไฟจำลองวงจรเป็นกลาง และถูกจัดให้ โดยหกขาวแสงโคมไฟ มี irradiance ที่สูงสุดของ 950 เลอ/m2 คู่รักการทดลองดำเนินการในโหมดทั้งแบบไม่ต่อเนื่อง และต่อเนื่อง ในโหมดต่อเนื่องไดอะแฟรมปั๊มนำมาจัดหาวัฒนธรรมรวบรวมสื่อในรอบระยะเวลาที่แสง และการเก็บเกี่ยวและใช้สำหรับวิเคราะห์2.3. สื่อวัฒนธรรมเพื่อตรวจสอบสื่อวัฒนธรรมเพียงพอมากที่สุดสำหรับการเติบโตของสายพันธุ์ทะเลเลือก filtrated (0.22 lm)และน้ำทะเลธรรมชาตินึ่งถูกเสริม ด้วยสี่มาตรฐานสื่อ: ปานกลาง f/2 (Guillard และ Ryther, 1962), ผู้ชายและปานกลางไมเยอร์ (แมนน์และ Myers, 1968), สาหร่ายกลาง (Bionovaซันติอาโก สเปน) และอานนท์ (อานนท์ et al. 1974) โซเดียมไนเตรทถูกกลางหลังที่ความเข้มข้น0.49 กรัม NaNO3/l2.4 การขั้นตอนที่วิเคราะห์กำหนดความเข้มข้นของชีวมวล โดยวัดทุกวันค่าที่ 750 nm กับสเปคเครื่อง (ATI UNICAM UV /Vis สเปกโตรมิเตอร์ UV2 เคมบริดจ์ สหราชอาณาจักร) ตรวจสอบ spectrophotometricดำเนินการวิเคราะห์ปริมาณการวัดน้ำหนักแห้งออกสองครั้งต่อสัปดาห์ นอกจากนี้ การตรวจสอบสถานะของเซลล์ อัตราส่วนของตัวแปรที่จะเรืองแสงคลอโรฟิลสูงสุด(อัตราส่วน Fv/Fm) โดยวัดทุกวันกับ fluorometer (AquaPenทาง AP ที่ 100 เครื่องมือระบบโฟตอน Drasov สาธารณรัฐเช็ก)โดยวัด irradiance บนผิวเครื่องปฏิกรณ์ Io (lE/m2 s),เซนควอนตัมสเกลา irradiance 4p ยืนยันการติดต่อ-100 (Biosphericalเครื่องมือ San Diego, CA, USA)เพื่อตรวจสอบองค์ประกอบทางชีวเคมีของชีวมวลวัฒนธรรมตัวอย่างผลิตภัณฑ์ และ lyophilized ปริมาณโปรตีนกำหนด โดยการเปลี่ยนแปลงของวิธี Lowry(ยูโรโซนและกอง et al. 2010) องค์ประกอบธาตุ (C, N, H และ S)ซึ่งวัดได้โดยใช้การวิเคราะห์ธาตุ LECO CHNS-932 (เซนต์โจเซฟMI สหรัฐอเมริกา) ไขมันทั้งหมดที่กำหนดโดยการวิธีที่เสนอ โดย Kochert (1978) เนื้อหาที่กรดไขมัน และโพรไฟล์ได้รับ โดยตรงเพิ่มและเครื่อง(Agilent เทคโนโลยี 6890 N ชุดแก๊ส Chromatographซานตาคลารา CA, USA) ตามที่อธิบายไว้โดยปีรูอิซ et al. (1998)นอกจากนี้ รวมไขมันแยกดำเนินการ โดยวิธีของนัก (1986) ด้วยการปรับเปลี่ยนต่อไปนี้: แรก รวมไขมันที่สกัด โดยวิธีการอธิบายไว้ โดย Kochert (1978)และตัวอย่างที่ประกอบด้วย 10 มิลลิกรัมของกรดไขมัน ละลายใน 0.5 ml ของคลอโรฟอร์ม และนำมาใช้ในคอลัมน์ซิลิกาเจล(ก.ย.-ปากพลัสซิลิกา WAT020520, Mildford น่านน้ำ แมซซาซู เสท์สหรัฐอเมริกา) ทำชะแรก ด้วยคลอโรฟอร์มเพื่อ 30 มล.เก็บไขมันเป็นกลาง และชะสองจะดำเนินการกับอะซิโตน 30 มล.บวก 20 มล.ผสมเมทานอล: คลอโรฟอร์ม85:15 v/v เพื่อรวบรวม glycolipids ดำเนินการชะสามกับเมทานอลเพื่อเก็บ phospholipids 30 มล. สุดท้ายละส่วนการวิเคราะห์ โดยเครื่อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วิธีการ
2.1 จุลินทรีย์
สี่สายพันธุ์สาหร่ายทะเลถูกนำมาใช้: eustigmatophyceae
N. gaditana Lubian CCMP 527 ที่ chlorophyceae ตัน chuii
SAG 8-6 ตันและ suecica CCAP 66/4 และ bacillariophyceae พี tricornutum
SAG 1090-1a หัวเชื้อแบคทีเรียทั้งหมดถูกเลี้ยงอยู่ที่ 23 องศาเซลเซียสใน
0.5 L ขวดกับสาหร่ายที่อุดมด้วยน้ำทะเลธรรมชาติภายใต้อย่างต่อเนื่อง
การส่องสว่าง (75 LE / m2 s) และการให้อากาศที่ 0.2 v / V นาที หัวเชื้อแบคทีเรีย
ที่ปลูกเป็นระยะการเจริญเติบโตสำหรับการใช้งานใน
photobioreactors.
2.2 เงื่อนไขวัฒนธรรม
การทดลองดำเนินการในบ้านสี่แก้วคอลัมน์ฟอง
photobioreactors (0.5 เมตรความสูง 0.07 เมตรเส้นผ่าศูนย์กลาง) คอลัมน์
ถูกให้กับทางเข้ากลางเช่นเดียวกับการเก็บเกี่ยว
วาล์วและการป้อนข้อมูลสำหรับเซ็นเซอร์วัดค่า pH ที่ด้านบน ฟองอากาศ
ขึ้นจากด้านล่างของคอลัมน์ที่ 0.5 v / V นาทีสำหรับการกวน
และการกำจัดของออกซิเจนที่ละลายในน้ำ อุณหภูมิถูกเก็บรักษาไว้
ที่ 20 องศาเซลเซียสโดยการไหลเวียนของน้ำ thermostated ผ่านคอลัมน์
แจ็คเก็ต เพื่อให้ค่า pH อยู่ในช่วงที่เหมาะสม (7.80-7.85)
CO2 ถูกฉีดตามความต้องการเข้าไปในกระแสอากาศ ไฟส่องสว่าง
จำลองวงจรเป็นกลางและถูกจัดให้โดยหกสีขาวแสง
โคมไฟที่มีรังสีสูงสุด 950 LE / m2 s การทดลอง
ได้ดำเนินการทั้งในโหมดต่อเนื่องและต่อเนื่อง ใน
โหมดต่อเนื่องปั๊มไดอะแฟรมถูกนำมาใช้ในการจัดหาวัฒนธรรม
ขนาดกลางในช่วงเวลาที่แสงและการเก็บเกี่ยวที่ถูกเก็บรวบรวม
และใช้ในการวิเคราะห์.
2.3 อาหารเลี้ยงเชื้อ
เพื่อตรวจสอบสื่อที่เพียงพอมากที่สุดวัฒนธรรมเพื่อ
การเจริญเติบโตของสายพันธุ์น้ำทะเลที่เลือกกรอง (0.22 LM)
และมวลน้ำทะเลธรรมชาติก็ตบท้ายกับสี่
สื่อมาตรฐาน: F / 2 กลาง (Guillard และ Ryther, 1962), แมนน์
และ กลางไมเออร์ (แมนน์และไมเออร์, 1968) กลางสาหร่าย (Bionova,
ซันติอาโกสเปน) และขนาดกลางอานนท์ (อานนท์ et al., 1974) โซเดียม
ไนเตรตถูกเพิ่มลงในกลางหลังที่ความเข้มข้น
0.49 กรัม NaNO3 / ลิตร.
2.4 การวิเคราะห์
ความเข้มข้นของชีวมวลที่ถูกกำหนดในชีวิตประจำวันโดยการวัด
การดูดกลืนแสงที่ 750 นาโนเมตรที่มีสเปก (ATI UNICAM UV /
Vis Spectrometer UV2 เคมบริดจ์, สหราชอาณาจักร) เพื่อตรวจสอบสเปก
วัดหาความน้ำหนักแห้งได้ดำเนินการ
ออกสองครั้งต่อสัปดาห์ นอกจากนี้ในการตรวจสอบสถานะของ
เซลล์อัตราส่วนของตัวแปรคลอโรฟิลเรืองแสงสูงสุด
(FV / FM Ratio) วัดทุกวันด้วย fluorometer A (AquaPen
AP 100 Photon ระบบเครื่องดนตรี, Drasov, สาธารณรัฐเช็ก).
รังสีในเครื่องปฏิกรณ์ พื้นผิวของไอโอ (LE / m2 s), วัด
ด้วยรังสีเซ็นเซอร์ 4P ควอนตัมเกลา QSL-100 (Biospherical
เครื่องดนตรี, San Diego, CA, USA.)
เพื่อตรวจสอบองค์ประกอบทางชีวเคมีของชีวมวล
ตัวอย่างวัฒนธรรมถูกปั่นและแห้ง . ปริมาณโปรตีน
ที่ถูกกำหนดโดยการเปลี่ยนแปลงวิธี Lowry
(López et al., 2010) องค์ประกอบธาตุ (C, N, H, และ S)
วัดโดยใช้การวิเคราะห์ธาตุ LECO CHNS-932 (เซนต์โจเซฟ,
MI, USA) เนื้อหาไขมันทั้งหมดถูกกำหนดโดย
วิธีการที่เสนอโดย Kochert (1978) เนื้อหากรดไขมันและ
รายได้จากการ transesterification โดยตรงและ Gas Chromatography
(Agilent Technologies 6890 N Series ก๊าซ Chromatograph,
ซานตาคลารา, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ตามที่อธิบายRodríguez-et al, รุยซ์ . (1998)
นอกจากนี้การแยกไขมันทั้งหมดได้ดำเนินการโดยวิธีการ
ของ Kates (1986) ด้วยการปรับเปลี่ยนดังต่อไปนี้ประการแรกรวม
ไขมันที่สกัดโดยวิธีการอธิบายโดย Kochert (1978)
และตัวอย่างที่มี 10 มิลลิกรัมของกรดไขมันคือ นำมาละลาย
ใน 0.5 มล. คลอโรฟอร์มและแนะนำในคอลัมน์ซิลิกาเจล
( ก.ย. ปากพลัสซิลิกา WAT020520 น้ำ, Mildford, Massachusetts,
USA) ชะแรกที่ทำด้วย 30 มลคลอโรฟอร์มเพื่อ
เก็บไขมันที่เป็นกลางและชะสองจะดำเนินการกับ
30 มล. ของอะซิโตนบวก 20 มล. คลอโรฟอร์ม: เมทานอลผสม
85:15 v / V เพื่อให้เป็นไปเก็บ glycolipids ชะสามจะดำเนินการ
ออกมาพร้อมกับ 30 มล. ของเมทานอลในการเก็บรวบรวม phospholipids สุดท้ายแต่ละ
ส่วนจะถูกวิเคราะห์โดยแก๊ส chromatography

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วิธีการ2.1 . จุลินทรีย์สี่ทะเลสาหร่ายสายพันธุ์ที่ใช้ : eustigmatophyceae. gaditana lubi . kgm / CCMP 527 , วิธีการ chuii Tเหี่ยว 8-6 และ ต. suecica ccap 66 / 4 และ bacillariophyceae tricornutum Pแซก 1090-1a ทั้งหมด 18 ชั่วโมง 23 องศาเซลเซียสในอาหารเพาะเลี้ยงที่0.5 ลิตรขวดที่มีสาหร่ายอุดมธรรมชาติ น้ำทะเลใต้อย่างต่อเนื่องรัศมี ( 75 เลอ / M2 s ) และอากาศที่ 0.2 V / V นาที 18 ชั่วโมงปลูกการเจริญเติบโตที่ชี้แจงขั้นตอนสำหรับการใช้ในphotobioreactors .2.2 . เงื่อนไขทางวัฒนธรรมการทดลองในบ้านในคอลัมน์แก้วสี่ฟองphotobioreactors ( 0.5 เมตร ความสูง 80 เมตร ) คอลัมน์มีให้กับกลางปากน้ำ ตลอดจนการเก็บเกี่ยววาล์วและ input สำหรับ pH Sensor ที่ด้านบน มีฟองอากาศขึ้นจากด้านล่างของคอลัมน์ที่ 0.5 V / V มินมากและการกำจัดออกซิเจนละลาย อุณหภูมิเก็บรักษาที่ 20 C โดย thermostated หมุนเวียนน้ำผ่านคอลัมน์เสื้อแจ็คเก็ต ทำให้ pH ในช่วงที่เหมาะสม ( 7.80 ธนาคารพาณิชย์ )CO2 ถูกฉีดในความต้องการในกระแสอากาศ ไฟส่องสว่างการจำลองวงจรที่เป็นกลางและให้แสงสีขาว 6โคมไฟดังกล่าวสูงสุด 950 เลอ / m2 S . การทดลองได้ทั้งในโหมดไม่ต่อเนื่องและต่อเนื่อง ในปั๊มไดอะแฟรมต่อเนื่องได้ถูกใช้เพื่อจัดหาวัฒนธรรมสื่อในช่วงแสงและเก็บเกี่ยวรวบรวมและใช้ในการวิเคราะห์2.3 สื่อวัฒนธรรมในการตรวจสอบสื่อวัฒนธรรมเพียงพอ มากที่สุดการเจริญเติบโตของกุ้งสายพันธุ์ที่ผลิต ( 0.22 LM ) ,ธรรมชาติและน้ำทะเลสังเคราะห์เสริมด้วยสี่สื่อมาตรฐาน : F / 2 ) ( guillard และ ryther , 1962 ) , แมน& Myers ขนาดกลาง ( Mann และไมเยอร์ , 1968 ) , กลาง ( bionova สาหร่าย ,ซานติอาโก , สเปน ) และขนาดกลาง ( อานนท์ อานนท์ et al . , 1974 ) โซเดียมไนเตรทถูกเพิ่มเข้าไปหลังความเข้มข้นปานกลางของ 0.49 กรัม NaNO3 / L2.4 . ขั้นตอนการวิเคราะห์กำหนดความเข้มข้นตั้งใจทุกวัน โดยวัดการดูดกลืนแสงที่ 750 นาโนเมตรกับ Spectrophotometer ( ATI unicam UV /วิสสเปก uv2 , เคมบริดจ์ , UK ) เพื่อตรวจสอบ )การวัดน้ำหนักแห้งรวมทั้งศึกษาสองครั้งต่อสัปดาห์ นอกจากนี้ ในการตรวจสอบสถานะของเซลล์ , อัตราส่วนของตัวแปรสารคลอโรฟิลล์สูงสุด( อัตราส่วน FM FV / ) คือวัดทุกวัน กับฟลู โรมิเตอร์ ( aquapenAP 100 ระบบโดยใช้เครื่องมือ drasov , สาธารณรัฐเช็ก )วันดังกล่าวบนพื้นผิวของถังปฏิกรณ์ IO ( เลอ / M2 s ) วัดกับ 4P ควอนตัมสเกลาร์ ( biospherical qsl-100 irradiance เซ็นเซอร์เครื่องมือ , San Diego , CA , USA )เพื่อศึกษาองค์ประกอบทางชีวเคมีของชีวมวลตัวอย่างวัฒนธรรม ) และระดับโปรตีน . ปริมาณโปรตีนถูกกำหนดโดยการเปลี่ยนแปลงของโลว์รีย์วิธี( โลเปซ et al . , 2010 ) องค์ประกอบของธาตุ ( C , N , H และ S )การวัดวิเคราะห์ธาตุ LECO chns-932 ( เซนต์โจเซฟมิ สหรัฐอเมริกา ) มีไขมันทั้งหมดถูกกำหนดโดยวิธีที่เสนอโดย kochert ( 1978 ) กรดไขมันที่เนื้อหาและข้อมูลที่ได้จากกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่น โดยตรง และแก๊สโครมาโทกราฟี( Agilent เทคโนโลยี 6890 N ชุดก๊าซ Chromatograph ,ซานตาคลาร่า , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) ตามที่อธิบายไว้โดยมาร์ตินลุยส์โรดรีเกซ Ruiz et al . ( 1998 )นอกจากนี้ ส่วนปริมาณไขมันทั้งหมดกระทำโดยวิธีของเคท ( 1986 ) กับการปรับเปลี่ยนดังต่อไปนี้ ประการแรก ทั้งหมดไขมันจะถูกแยกโดยวิธีบรรยายโดย kochert ( 1978 )และตัวอย่างที่ประกอบด้วย 10 mg ของกรดไขมันถูกละลายใน 0.5 มิลลิลิตร คลอโรฟอร์ม และแนะนำในซิลิกาเจลคอลัมน์( ก.ย. ปากบวกกับซิลิกา wat020520 น้ํา mildford , Massachusetts ,สหรัฐอเมริกา ) การใช้ครั้งแรกมันเป็น 30 มล. ( เพื่อเก็บไขมันเป็นกลาง และสองคือการใช้กับ30 มล. ) บวก 20 มิลลิลิตร ผสมเมทานอลคลอโรฟอร์ม85:15 v / V เพื่อเก็บไกลโคลิปิด . ส่วนที่สามคือการใช้กับ 30 ml ของเมทานอลเก็บ phospholipids ในที่สุดแต่ละส่วนที่วิเคราะห์โดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟี