2.3. Reverse-transcription and poly

2.3. Reverse-transcription and polymerase chain reaction (RT-PCR)
Reverse transcription was performed using RevertAid™ H
Minus First Strand cDNA Synthesis Kit (Thermos Scientific Inc.)
using Oligo (dT)18 primer according to manufacturer’s instructions.
Polymerase chain reactions were subsequently performed on the
resulting cDNA using gene-specific primers (Table 1) and highfidelity
pfu DNA polymerase (Thermo Scientific Inc.). Sm14 was
PCR-amplified using primers 1 and 2 while a truncated Sm29 (designated
TrSm29) was amplified using primers 3 and 4. TrSm29 is
composed of amino acids 27–169 of the native Sm29. The resulting
PCR products were used as templates for another round of PCR
amplification using primers with flanking restriction sites to
enable cloning in pQE31 plasmid. Briefly, Sm14 was amplified
using primers 5 and 6 while TrSm29 was amplified using primers
7 and 8 (Table 1). Sm14 PCR product was purified by GeneJET™
Gel Extraction Kit (Thermo Scientific Inc.) while TrSm29 was
purified by GeneJET™ PCR purification Kit (Thermo Scientific Inc.).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสและถอดย้อนกลับ (RT-PCR)ถอดรหัสย้อนกลับดำเนินการโดยใช้ RevertAid™ Hลบ cDNA Strand แรกชุดสังเคราะห์ (กระติกน้ำร้อนวิทยาศาสตร์ Inc.)ใช้โอลิ (dT) 18 รองพื้นตามคำแนะนำของผู้ผลิตปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสในเวลาต่อมาได้ดำเนินการในการผล cDNA โดยใช้ไพรเมอร์ของยีนเฉพาะ (ตารางที่ 1) และ highfidelitypfu ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (เทอร์โมวิทยาศาสตร์ Inc.) แก้ไข Sm14ใช้ไพรเมอร์ที่ 1 และ 2 ในขณะ Sm29 ตัด PCR ขยาย (กำหนดTrSm29) ถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์ 3 และ 4 เป็น TrSm29ประกอบด้วยกรดอะมิโน 27 – 169 ของ Sm29 พื้นเมือง ผลผลิตภัณฑ์ PCR ถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบสำหรับรอบอื่นของ PCRขยายโดยใช้ไพรเมอร์กับขนาบไซต์จำกัดเปิดใช้งานโคลนใน pQE31 plasmid สั้น ๆ Sm14 ถูกขยายใช้ไพรเมอร์ที่ 5 และ 6 ในขณะที่ TrSm29 ถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์7 และ 8 (ตารางที่ 1) ผลิตภัณฑ์ Sm14 PCR บริสุทธิ์ โดย GeneJET™ชุดสกัดเจล (เทอร์โมวิทยาศาสตร์ Inc.) ในขณะที่ TrSm29บริสุทธิ์ โดยบริสุทธิ์ GeneJET™ PCR Kit (เทอร์โมวิทยาศาสตร์ Inc.)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 ย้อนกลับถอดความและ (Polymerase Chain Reaction RT-PCR)
ย้อนกลับถอดความได้รับการดำเนินการโดยใช้ RevertAid ™ H
ลบแรก Strand ยีนสังเคราะห์ Kit (Thermos วิทยาศาสตร์อิงค์)
โดยใช้ Oligo (dT) 18 ไพรเมอร์ตามคำแนะนำของผู้ผลิต.
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอได้ดำเนินการภายหลัง ใน
ยีนที่เกิดโดยใช้ไพรเมอร์ยีนเฉพาะ (ตารางที่ 1) และ highfidelity
โพลิเมอร์ PFU ดีเอ็นเอ (Thermo Scientific อิงค์) Sm14 ถูก
PCR-amplified โดยใช้ไพรเมอร์ที่ 1 และ 2 ในขณะที่ถูกตัดทอน Sm29 (กำหนด
TrSm29) ถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์ที่ 3 และ 4 TrSm29 จะ
ประกอบด้วยกรดอะมิโน 27-169 ของพื้นเมือง Sm29 ส่งผลให้
ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบสำหรับรอบของ PCR อีก
เครื่องขยายเสียงโดยใช้ไพรเมอร์ที่มีข้อ จำกัด ขนาบเว็บไซต์ที่จะ
ช่วยให้การโคลนใน pQE31 พลาสมิด สั้น ๆ , Sm14 ถูกขยาย
โดยใช้ไพรเมอร์ 5 และ 6 ในขณะที่ TrSm29 ถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์
ที่ 7 และ 8 (ตารางที่ 1) สินค้า Sm14 PCR บริสุทธิ์โดย GeneJET ™
เจลสกัด Kit (Thermo Scientific Inc. ) ในขณะที่ TrSm29 ถูก
ทำให้บริสุทธิ์โดย GeneJET ™ PCR Kit บริสุทธิ์ (Thermo Scientific อิงค์)