Preparation of organic sediments fo

Preparation of organic sediments for pollen analysis
By: K. Gajewski
This procedure is based on that in use in the Palynology Laboratory of the Center for Climatic Research, University of Wisconsin (A Swain, R. Steventon) and by K. Hadden, University of Toronto as modified by us. You should be shown this at least once before trying it on your own.
References
(see the library page complete citations)
• Faegri and Iversen
• Traverse
• Erdtman
• Cwynar et al.
NOTE: Read carefully the Materials Safety Datasheets on all the chemicals that you use. These are available in the lab and up to date versions are online. You MUST wear gloves, goggles and a lab coat at all times. The entire procedure must be done under the fume hood. Note the location of the first aid kit, the shower, the eye-wash station and the burn blanket. There is a telephone in the lab should you need to call security. You must have proper training before using the laboratory (see Konrad Gajewski or the lab technician for specific requirements).
Be especially careful during the HF and acetolysis steps. HF is particularly dangerous if you inhale or touch it. DO not let any touch your skin. You cannot smell it, only use it in the hood, with the front down as low as possible. The acetolysis solution can be explosive when it comes in contact with water.
Equipment needed:
1. Centrifuge tubes (50 ml) with caps
2. 7 micron Nitex screens with screen holders
3. Hot plate with water bath. Use 500 ml Beakers with a few cm of water. There should be enough water so it won't boil dry while you are working (you can add a few ml if you see the water level is too low), but not so much that it bubbles over into your tubes.
4. 10 and 100 ml graduated cylinder: use the two in the acid cabinet that are used only for acetolysis solution.
5. Wood sticks for stirring, or the vortex stirrer.
Chemicals needed:
1. Hydrochloric acid (10%HCl is made by putting 90ml of distilled water in a graduated cylinder, and adding 10 ml of concentrated HCl. Pour the water in the large bottle labeled 10%HCl, and add the acid. Always add acid to water, and not the inverse. Use a graduated cylinder that is used only for clean chemicals and/or distilled water. That is, cylinders should be used for sample water or chemicals, but never both.)
2. Potassium hydroxide (10%KOH is made by mixing 10 g of KOH pellets with 90 ml distilled water)
3. Sulphuric acid H 2 SO 4 (concentrated)
4. Acetic Anhydride (Acetolysis solution is made by mixing 10 ml of sulphuric acid with 90 ml of acetic anhydride. Use the bottles provided. SLOWLY add the sulphuric acid to the acetic anhydride. Be very careful; this reaction produces a lot of heat. This solution should never be mixed with water. The bottle must be kept dry. Never clean it with water.)
5. Glacial acetic acid
6. Hydrofluoric acid ( Be very careful when using HF. It is extremely dangerous and you should never get any on your skin, nor breath any of the vapors.)
7. 95% Ethanol
8. Saffranin stain
9. tert-Butanol (You shouldn't inhale this.) N.B. TBA freezes at room temperature.
10. Silicone fluid (2000 cs)
Summary:
The procedure consists of successive addition of chemicals to eliminate the non-polliniferous material from your sediments.
1. sample, spike tablet
2. 10%HCl (eliminates the carbonates)
3. wash (distilled water)
4. 10%KOH (eliminates some organic matter)
5. wash
6. HF, repeated if necessary (eliminates silica)
7. wash
8. glacial acetic acid
9. acetolysis (eliminates some organic matter, prepares the pollen)
10. glacial acetic acid
11. wash
12. 95% alcohol
13. 95% alcohol
14. t-butanol
15. t-butanol
16. vials
17. Silicone oil
18. coarse sieve after 1 if needed; fine sieve after 6 if necessary.
Procedure
1. Normally, you would subsample your sediment from the core and place the samples in vials. Transfer the sediment from the vial to the centrifuge tubes (50 ml). In sediments from boreal or temperate regions, 1 cc should be sufficient. In arctic or low organic samples, however, 4 cc are typically used. Note in your lab notebook the correspondence between your lake name, sample depth and centrifuge tube number. The steps you follow should be documented in your lab notebook as you go along; see the template.
2. When you begin the procedure, start the water baths going. Some steps require heating the centrifuge tubes. Put 2-3 500 ml beakers with some water on the heater, and regulate the temperature to keep the water just boiling.
3. The number of samples that you do depends on your experience. You can run 8 or 12 or up to 24 samples. Some steps have more critical timing, so you need to be able to work efficiently before you try to run too many samples at the same time. Normally, we divide the samples in two batches; one can be in the chemical treatment while the other is in the centrifuge.
4. Place tablets of Lycopodium spike (we are currently using Batch 307862: mean (sd) 13,500 (690)) in the centrifuge tubes. Normally, we use 2 tablets, which gives a reasonable ratio of pollen grains to spike. You may need to adjust this to your sediments. Put the batch number and number of tablets in the notebook.
5. Add some 10%HCl. Add a little at first, since the tablets contain carbonate, and it will fizz. If the sediment contains carbonates as well, it will fizz even more, so be careful that it does not bubble over the top of the centrifuge tube. 95% Ethanol can be used to stop effervescence, if needed. Fill the tube about 2/3 full, and when the fizzing has stopped...
6. Take the tubes in pairs, equalize the amounts in both and place opposite each other in centrifuge. Centrifuge 5 minutes at least 4000 rpm. Decant the supernatant.
7. Add 2/3 tube of distilled water. Stir the sediment, centrifuge and decant.
8. At this point, if there are large sand particles or large organic particles, you may want to coarse sieve the sample. Use the 150 micron sieve and the sieve holder and run the sample through, returning the material that passes through the sieve to the centrifuge tube. This is awkward, and you will need to use a beaker. Use only the clean beakers used only for this procedure, and not the beakers from the teaching lab. You may need to centrifuge a couple of times to get all the water+sediment that passes through he sieve (that is, if you used more than 50 ml of water to sieve).
9. Add 2/3 tube full of 10%KOH. Stir the sediment. Place in boiling water bath for 6-8 minutes.
10. Repeat 5 and 6.
11. Add 1/2 tube of HF. Place in water bath for 10-15 minutes.
12. Repeat 5 and 6.
13. At this point, if your samples are very silty (as usually occurs in arctic samples) you may need to sieve them through the 7 micron screen. Add a few ml of warm 7% Sodium pyrophosphate. It should be warm but not boiling. You can place the flask with the solution on the hot plate, and regulate carefully the temperature. Cut a piece of screen the appropriate size and place in the holder. Put the sample + sodium pyrophosphate in the container and sieve until the filtrate passing through looks clear of silt. You can rub the bottom of the sieve or use the engraver touched to the side (thanks to Jock McAndrews for this advice) to speed the process. After the sample has been sufficiently sieved, return the sample to the centrifuge tube.
14. Repeat 5 and 6.
15. Now you need to get rid of the water in preparation for acetolysis. Add a 1/2 tube of glacial acetic acid, stir the sediment, centrifuge and decant.
16. Next step is acetolysis. Mix up in the bottle of acetolysis solution. Add the sulphuric acid to the acetic anhydride slowly.
17. Add the solution to the tubes; 1/2 full should be sufficient. Carefully place the tubes in the water bath for three minutes . When the time is up, carefully remove them, equalize the amount in the tubes with glacial acetic acid, not water and centrifuge. Carefully time your second batch so as not to exceed the three minutes. at the end of acetolysis, you can turn off the bath, but see below.
18. Add a half tube of glacial acetic acid, stir the sediment, centrifuge.
19. Add a 1/2 tube of distilled water, stir the sediment, centrifuge.
20. Now you need to do a 95% ethanol rinse. Add 1/2 tube of ethanol, stir the sediment, centrifuge, decant. You can add a drop of saffranin stain to the tube if you wish to stain the pollen grains.
21. Repeat 20. Don't put in any stain the second rinse, however.
22. Now put in a 1/2 tube of tert-butanol, stir the sediment, centrifuge and decant. See below for comments on butanol.
23. Repeat 22. Decant as much as possible to make the next step easier.
24. You now need to transfer the sediment to the vials where they will be permanently. If you rinsed the original vials, and they are dry, you can use them. Make sure they are carefully labeled, and watch during this procedure, as the butanol can dissolve some inks. Add the sediment/butanol mixture and with the butanol wash bottle rinse the tube to get the sediment into the vial. You may need to repeat this step a couple or more time, although with practice it can be done in one step. Place the vial in the centrifuge and spin. Decant and repeat if necessary to get all the sediment into the vial.
25. When the sediment is all in the vial and you have decanted the butanol, add a couple of drops of Silicone oil and stir. You can leave the applicator stick in the vial. Place the vials in the Clean hood and allow any remaining TBA to evaporate. When you can no longer smell the butanol (a couple of days if you decanted efficiently), the samples are ready to be used. You can cap them and store them (ensuring they are properly labeled with the lake name, the depth, and if you want, date and your name) until you are ready to identify the grains on the slide.
Comments:
• ALL WASTE MUST BE PLACED IN THE PROPER PAILS. BE VERY CAREFUL NOT TO MIX WASTES IMPROPERLY.
• For pollen reference samples, use the same procedure with several flowers or anthers of the plant. You can normally use a 15

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เตรียมความพร้อมของตะกอนอินทรีย์สำหรับการวิเคราะห์เกสร
โดย: เค Gajewski
ขั้นตอนนี้จะขึ้นอยู่กับว่าในการใช้งานในห้องปฏิบัติการเรณูวิทยาของศูนย์ภูมิอากาศวิจัยมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน (ลูกทุ่งอาร์ Steventon) และเคฮาร์ดเดนมหาวิทยาลัย โตรอนโตเป็นแก้ไขโดยเรา คุณควรจะแสดงนี้อย่างน้อยหนึ่งครั้งก่อนที่จะพยายามด้วยตัวคุณเอง.
อ้างอิง
(ดูหน้าห้องสมุดอ้างอิงที่สมบูรณ์)
• Faegri Iversen และ
ทราเวิร์•
• Erdtman
• Cwynar et al.
หมายเหตุ: อ่านอย่างระมัดระวังความปลอดภัยวัสดุเอกสารข้อมูลทางเทคนิคเกี่ยวกับสารเคมีทั้งหมดที่ คุณใช้ เหล่านี้มีอยู่ในห้องปฏิบัติการและถึงวันที่รุ่นออนไลน์ คุณต้องสวมถุงมือแว่นตาและเสื้อห้องปฏิบัติการตลอดเวลา ขั้นตอนทั้งหมดจะต้องทำภายใต้ตู้ดูดควัน หมายเหตุสถานที่ตั้งของชุดปฐมพยาบาล, ฝักบัว, สถานีตาล้างและการเผาไหม้ผ้าห่ม มีโทรศัพท์ในห้องปฏิบัติการควรคุณจะต้องเรียกการรักษาความปลอดภัย คุณต้องมีการฝึกอบรมที่เหมาะสมก่อนที่จะใช้ในห้องปฏิบัติการ (ดูคอนราด Gajewski หรือช่างเทคนิคในห้องปฏิบัติการสำหรับความต้องการที่เฉพาะเจาะจง).
โดยเฉพาะอย่างยิ่งในช่วงระวัง HF และเอิขั้นตอน HF เป็นอันตรายโดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าคุณสูดดมหรือสัมผัสมัน อย่าปล่อยให้ผิวของคุณสัมผัสใด ๆ คุณไม่สามารถกลิ่นมันจะใช้ในเครื่องดูดควันที่มีหน้าลงที่ต่ำที่สุดเท่าที่เป็นไปได้ . การแก้ปัญหาเอิสามารถระเบิดเมื่อมันมาสัมผัสกับน้ำ
อุปกรณ์ที่ต้องใช้:
1 หลอดหมุนเหวี่ยง (50 มล.) มีหมวก
2 7 ไมครอนหน้าจอ Nitex กับผู้ถือหน้าจอ
3 จานร้อนที่มีอ่างน้ำ ใช้ 500 มล Beakers มีไม่กี่เซนติเมตรน้ำ ควรจะมีน้ำเพียงพอจึงจะไม่เดือดแห้งในขณะที่คุณกำลังทำงาน (คุณสามารถเพิ่มไม่กี่มล. ถ้าคุณเห็นระดับน้ำอยู่ในระดับต่ำเกินไป) แต่ไม่ได้มากว่ามันฟองไปสู่ท่อของคุณ.
4 10 และ 100 มล. จบการศึกษากระบอก:. ใช้ทั้งสองอยู่ในตู้กรดที่จะใช้เฉพาะสำหรับการแก้ปัญหาเอิ
5 ไม้สำหรับไม้กวนหรือกวนน้ำวน.
สารเคมีที่ต้องใช้:
1 กรดไฮโดรคลอริก (HCl 10% จะทำโดยการวาง 90ml น้ำกลั่นในถังจบการศึกษาและการเพิ่ม 10 มล. เข้มข้น HCl. เทน้ำในขวดที่มีขนาดใหญ่ที่มีข้อความ 10% HCl และเพิ่มกรด. เสมอเพิ่มกรดน้ำ และไม่ผกผัน. ใช้กระบอกจบการศึกษาที่จะใช้สำหรับการทำความสะอาดสารเคมีและ / หรือน้ำกลั่น. นั่นคือถังควรจะใช้สำหรับตัวอย่างน้ำหรือสารเคมี แต่ไม่เคยทั้งสอง.)
2 ไฮดรอกไซโพแทสเซียม (10% KOH จะทำโดยการผสม 10 กรัม KOH เม็ด 90 มล. น้ำกลั่น)
3 กำมะถันกรด H 2 SO 4 (เข้มข้น)
4 อะซิติกแอนไฮได (สารละลายเอิจะทำโดยการผสม 10 มิลลิลิตรของกรดซัลฟูริก 90 มลอะซิติกแอนไฮไดใช้ขวดที่มีให้ค่อยๆเพิ่มกรดกำมะถันกับแอนไฮไดอะซิติกจงระวังให้มาก.... ปฏิกิริยานี้ผลิตความร้อนมากการแก้ปัญหานี้ ไม่ควรที่จะผสมกับน้ำ. ขวดจะต้องเก็บไว้แห้ง. ไม่เคยทำความสะอาดด้วยน้ำ.)
5 กรดอะซิติกน้ำแข็ง
6 กรดไฮโดรฟลูออริก (จงระวังให้มากเมื่อใช้ HF. เป็นอันตรายมากและคุณไม่ควรจะได้รับใด ๆ บนผิวของคุณหรือลมหายใจไอ.)
7 เอทานอล 95%
8 คราบ Saffranin
9 tert-Butanol (คุณไม่ควรสูดดมนี้.) ส ธ NB ค้างที่อุณหภูมิห้อง.
10 ของเหลวซิลิโคน (2000 cs)
สรุป:
ขั้นตอนประกอบด้วยนอกจากนี้เนื่องของสารเคมีในการกำจัดวัสดุที่ไม่ polliniferous จากตะกอนของคุณ.
1 ตัวอย่างเข็มแท็บเล็ต
2 10% HCl (ช่วยลดคาร์บอเนต)
3 ล้าง (น้ำกลั่น)
4 10% KOH (บางช่วยลดสารอินทรีย์)
5 ล้าง
6 HF ซ้ำในกรณีที่จำเป็น (ช่วยลดซิลิกา)
7 ล้าง
8 กรดอะซิติกน้ำแข็ง
9 เอิ (บางช่วยลดสารอินทรีย์เตรียมเกสร)
10 กรดอะซิติกน้ำแข็ง
11 ล้าง
12 เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ 95%
13 เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ 95%
14 เสื้อบิวทานอ
15 เสื้อบิวทานอ
16 ขวด
17 ซิลิโคนน้ำมัน
18 ตะแกรงหยาบหลังวันที่ 1 ถ้าจำเป็น; ตะแกรงปรับหลัง 6 ในกรณีที่จำเป็น.
ขั้นตอน
ที่ 1 ปกติคุณจะ subsample ตะกอนของคุณจากหลักและวางตัวอย่างในขวด โอนตะกอนจากขวดกับหลอดหมุนเหวี่ยง (50 มล.) ในตะกอนจากเหนือหรือภูมิภาคพอสมควร 1 ซีซีควรจะเพียงพอ ในตัวอย่างอินทรีย์อาร์กติกหรือต่ำ แต่ 4 ซีซีมักจะใช้ หมายเหตุในสมุดบันทึกการทดลองของคุณติดต่อระหว่างชื่อทะเลสาบของคุณตัวอย่างความลึกและหลอด centrifuge จำนวน ขั้นตอนที่คุณทำตามที่ควรจะบันทึกไว้ในสมุดบันทึกการทดลองของคุณที่คุณไปพร้อม; เห็นแม่แบบ.
2 เมื่อคุณเริ่มต้นขั้นตอนการเริ่มต้นการอาบน้ำไป บางขั้นตอนที่ต้องใช้ความร้อนหลอดหมุนเหวี่ยง ใส่ 2-3 500 มล. บีกเกอร์ที่มีน้ำบางอย่างเกี่ยวกับเครื่องทำความร้อนและควบคุมอุณหภูมิเพื่อให้น้ำเดือดเพียง.
3 จำนวนตัวอย่างที่คุณทำขึ้นอยู่กับประสบการณ์ของคุณ คุณสามารถเรียกใช้ 8 หรือ 12 หรือเพิ่มขึ้นถึง 24 ตัวอย่าง บางขั้นตอนที่มีการกำหนดเวลาที่สำคัญมากขึ้นดังนั้นคุณจะต้องสามารถที่จะทำงานได้อย่างมีประสิทธิภาพก่อนที่คุณพยายามที่จะเรียกใช้กลุ่มตัวอย่างมากเกินไปในเวลาเดียวกัน โดยปกติเราแบ่งกลุ่มตัวอย่างในสองสำหรับกระบวนการ; หนึ่งสามารถในการรักษาทางเคมีในขณะที่คนอื่น ๆ ที่อยู่ในเครื่องหมุนเหวี่ยง.
4 แท็บเล็ตสถานที่ขัดขวาง Lycopodium (เรากำลังใช้ชุด 307862: ค่าเฉลี่ย (SD) 13,500 (690)) ในหลอดหมุนเหวี่ยง โดยปกติเราจะใช้แท็บเล็ตที่ 2 ซึ่งจะช่วยให้อัตราส่วนที่เหมาะสมของละอองเรณูที่จะขัดขวาง คุณอาจจะต้องปรับนี้เพื่อตะกอนของคุณ ใส่หมายเลขชุดและจำนวนแท็บเล็ตในสมุดบันทึก.
5 เพิ่มบางส่วน 10% HCl เพิ่มเล็ก ๆ น้อย ๆ ในตอนแรกเนื่องจากแท็บเล็ตมีคาร์บอเนตและมันจะเดือดเป็นฟอง หากมีตะกอนคาร์บอเนตเป็นอย่างดีก็จะเดือดเป็นฟองมากยิ่งขึ้นดังนั้นจึงต้องระวังว่ามันไม่ได้ฟองกว่าด้านบนของหลอดหมุนเหวี่ยง เอทานอล 95% สามารถใช้ในการหยุดฟองถ้าจำเป็น กรอกข้อมูลเกี่ยวกับหลอด 2/3 เต็มรูปแบบและเมื่อ fizzing ได้หยุด ...
6 ใช้หลอดคู่เท่ากันทั้งในปริมาณและสถานที่ตรงข้ามกันในการหมุนเหวี่ยง centrifuge 5 นาทีอย่างน้อย 4,000 รอบต่อนาที ค่อยๆรินใส.
7 เพิ่ม 2/3 หลอดน้ำกลั่น ผัดตะกอน, แปะและค่อยๆริน.
8 ณ จุดนี้ถ้ามีอนุภาคทรายขนาดใหญ่หรืออนุภาคอินทรีย์ขนาดใหญ่คุณอาจต้องการที่จะหยาบตะแกรงตัวอย่าง ใช้ตะแกรง 150 ไมครอนและผู้ถือตะแกรงและเรียกใช้ตัวอย่างที่ผ่านการกลับวัสดุที่ผ่านตะแกรงหลอดหมุนเหวี่ยง นี้เป็นที่น่าอึดอัดใจและคุณจะต้องใช้บีกเกอร์ ใช้เฉพาะบีกเกอร์ที่สะอาดใช้เฉพาะสำหรับขั้นตอนนี้และไม่ทดลองจากห้องปฏิบัติการการเรียนการสอน คุณอาจจำเป็นต้องหมุนเหวี่ยงสองสามครั้งที่จะได้รับน้ำ + ตะกอนที่ผ่านเขาผ่านตะแกรง (นั่นคือถ้าคุณใช้มากกว่า 50 มล. น้ำตะแกรง).
9 เพิ่ม 2/3 หลอดเต็ม 10% KOH ผัดตะกอน วางในอ่างน้ำเดือด 6-8 นาที.
10 ทำซ้ำ 5 และ 6
11 เพิ่มท่อ 1/2 ของ HF วางในอ่างน้ำประมาณ 10-15 นาที.
12 ทำซ้ำ 5 และ 6
13 ณ จุดนี้ถ้าตัวอย่างของคุณจะปนทรายแป้งมาก (ตามที่มักจะเกิดขึ้นในตัวอย่างอาร์กติก) คุณอาจจำเป็นต้องตะแกรงพวกเขาผ่านหน้าจอ 7 ไมครอน เพิ่มมล. เพียงไม่กี่แห่งที่อบอุ่น 7% pyrophosphate โซเดียม มันควรจะอบอุ่น แต่ไม่เดือด คุณสามารถวางขวดที่มีการแก้ปัญหาในจานร้อนและควบคุมอุณหภูมิอย่างระมัดระวัง ตัดชิ้นส่วนของหน้าจอขนาดที่เหมาะสมและสถานที่ในผู้ถือ วางตัวอย่าง + pyrophosphate โซเดียมในภาชนะและตะแกรงกรองจนผ่านลักษณะที่ชัดเจนของตะกอน คุณสามารถถูด้านล่างของตะแกรงหรือใช้ช่างแกะสลักสัมผัสไปด้านข้าง (ขอบคุณจ๊อค McAndrews สำหรับคำแนะนำนี้) เพื่อเพิ่มความเร็วในกระบวนการ หลังจากที่ตัวอย่างได้รับการร่อนพอกลับตัวอย่างหลอดหมุนเหวี่ยง.
14 ทำซ้ำ 5 และ 6
15 ตอนนี้คุณต้องได้รับการกำจัดของน้ำในการเตรียมการสำหรับเอิ เพิ่มท่อ 1/2 ของกรดอะซิติกน้ำแข็งกวนตะกอน, แปะและค่อยๆริน.
16 ขั้นต่อไปคือเอิ ผสมขึ้นในขวดของการแก้ปัญหาเอิ เพิ่มกรดกำมะถันกับแอนไฮไดอะซิติกช้า.
17 เพิ่มวิธีการแก้ท่อ; 1/2 เต็มรูปแบบควรจะเพียงพอ อย่างระมัดระวังวางท่อในอ่างน้ำสำหรับสามนาที เมื่อเวลาที่จะขึ้นระมัดระวังเอาพวกเขาเท่ากันจำนวนเงินในหลอดที่มีกรดอะซิติกน้ำแข็งและน้ำไม่เหวี่ยง ระมัดระวังเวลาชุดที่สองของคุณเพื่อที่จะไม่เกินสามนาที ในตอนท้ายของเอิคุณสามารถปิดการอาบน้ำ แต่ดูด้านล่าง.
18 เพิ่มหลอดครึ่งหนึ่งของกรดอะซิติกน้ำแข็งกวนตะกอน, การหมุนเหวี่ยง.
19 เพิ่มท่อ 1/2 ของน้ำกลั่นกวนตะกอน, การหมุนเหวี่ยง.
20 ตอนนี้คุณต้องทำล้างเอทานอล 95% เพิ่มท่อ 1/2 ของเอทานอลกวนตะกอน, เหวี่ยง, ค่อยๆริน คุณสามารถเพิ่มลดลงของคราบ saffranin หลอดถ้าคุณต้องการที่จะเปื้อนละอองเรณู.
21 ทำซ้ำ 20. อย่าใส่ในคราบใด ๆ ล้างสอง แต่.
22 ตอนนี้ใส่ในหลอด 1/2 ของ tert-บิวทานอกวนตะกอน, แปะและค่อยๆริน ดูด้านล่างสำหรับความคิดเห็นเกี่ยวกับบิวทานอ.
23 ทำซ้ำ 22. ค่อยๆรินมากที่สุดเท่าที่เป็นไปได้ที่จะทำให้ขั้นตอนต่อไปได้ง่ายขึ้น.
24 ตอนนี้คุณต้องโอนตะกอนขวดเพื่อที่พวกเขาจะเป็นอย่างถาวร หากคุณล้างขวดเดิมและพวกเขาจะแห้งคุณสามารถใช้พวกเขา ตรวจสอบให้แน่ใจว่าพวกเขามีความโดดเด่นอย่างระมัดระวังและดูในระหว่างขั้นตอนนี้เป็นบิวทานอสามารถละลายหมึกบาง เพิ่มตะกอน / สารผสมบิวทานอและมีขวดล้างบิวทานอล้างท่อที่จะได้รับตะกอนเข้าไปในขวด คุณอาจจะต้องทำซ้ำขั้นตอนนี้สองสามครั้งหรือมากกว่าถึงแม้ว่ามีการปฏิบัติก็สามารถทำได้ในขั้นตอนเดียว วางขวดใน centrifuge และสปิน ค่อยๆรินและทำซ้ำในกรณีที่จำเป็นจะได้รับทั้งหมดตะกอนเข้าไปในขวด.
25 เมื่อตะกอนเป็นทั้งหมดในขวดและคุณได้ decanted บิวทานอเพิ่มคู่ของหยดน้ำมันซิลิโคนและคน คุณสามารถออกจากการติด applicator ในขวด วางขวดในเครื่องดูดควันและช่วยให้ทำความสะอาดใด ๆ จะแจ้งภายหลังที่เหลือจะระเหย เมื่อคุณไม่ได้กลิ่นบิวทานอ (สองสามวันถ้าคุณ decanted ได้อย่างมีประสิทธิภาพ) ตัวอย่างพร้อมที่จะนำมาใช้ คุณสามารถฝาพวกเขาและเก็บไว้ (มั่นใจว่าพวกเขามีความโดดเด่นอย่างถูกต้องกับชื่อทะเลสาบลึกและถ้าคุณต้องการวันที่และชื่อของคุณ) จนกว่าคุณพร้อมที่จะระบุธัญพืชบนภาพนิ่ง.
ความคิดเห็น:
•เสียทั้งหมดต้องเป็น วางไว้ในถังที่เหมาะสม พ.ศ. มากระวังไม่ให้ของเสีย MIX ไม่ถูกต้อง.
•สำหรับตัวอย่างอ้างอิงเกสรใช้ขั้นตอนเดียวกันกับดอกไม้หลายหรืออับเรณูของพืช ปกติคุณจะสามารถใช้ 15

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเตรียมตะกอนอินทรีย์สำหรับเกสร

โดย : K . การวิเคราะห์ gajewski
ขั้นตอนนี้จะขึ้นอยู่กับว่า ใช้ในเรณูวิทยาห้องปฏิบัติการของศูนย์วิจัยสภาพอากาศแห่งมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน ( สเวน อาร์ สตีเวนตั้น ) และโดย K . แฮดเดิ่น มหาวิทยาลัยโตรอนโตเป็นแก้ไขโดยเรา คุณควรจะแสดงนี้อย่างน้อยหนึ่งครั้ง ก่อนพยายามมันเอง อ้างอิง

( เห็นหน้าห้องสมุดเสร็จสมบูรณ์เข้าไว้ )
-

- ท่องและ faegri อีเวอร์เซิ่น - erdtman
- cwynar et al .
หมายเหตุ : อ่านดีๆ วัสดุความปลอดภัยเอกสารข้อมูลสารเคมีทั้งหมดที่คุณใช้ เหล่านี้จะใช้ได้ในแล็บ และถึงวันที่รุ่นออนไลน์ คุณต้องสวมถุงมือ , แว่นตาและเสื้อ Lab ตลอดเวลา กระบวนการทั้งหมดจะต้องทำในตู้ดูดควัน .หมายเหตุ ตำแหน่งของชุดปฐมพยาบาล ฝักบัว ล้างตาเผาสถานี และผ้าห่ม มีโทรศัพท์ในห้องแลป คุณควรต้องเรียก รปภ. คุณต้องมีการฝึกอบรมที่เหมาะสมก่อนที่จะใช้ห้องปฏิบัติการ ( เห็นคอนราด gajewski หรือช่างเทคนิคห้องปฏิบัติการเพื่อความต้องการเฉพาะ ) .
ระมัดระวังโดยเฉพาะในช่วงความถี่และขั้นตอน acetolysis .HF อันตรายโดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าคุณสูดดมหรือสัมผัสมัน อย่าให้สัมผัสผิวของคุณ คุณไม่สามารถกลิ่นมัน ใช้มันในเครื่องดูดควันกับด้านหน้าลงให้น้อยที่สุดเท่าที่จะทำได้ การ acetolysis สามารถแก้ปัญหาระเบิดเมื่อสัมผัสกับน้ำ อุปกรณ์ที่จำเป็น :

1 หลอดปั่นเหวี่ยง ( 50 มล. ) กับหมวก
2 7 ไมครอน nitex หน้าจอด้วย ถือ จอ
3 จานร้อนด้วยน้ำอาบใช้ 500 ml บีกเกอร์กับ cm น้อยของน้ำ ควรมีน้ำเพียงพอ ดังนั้นมันจะไม่แห้งต้มในขณะที่คุณกำลังทำงาน ( คุณสามารถเพิ่มไม่กี่กรัม ถ้าคุณเห็นระดับน้ำต่ำเกินไป ) แต่ไม่มากที่มันเดือดลงไปในท่อของคุณ .
4 กระบอกตวง 10 และ 100 ml ใช้สองในกรดตู้ที่ใช้เฉพาะสำหรับโซลูชั่น acetolysis .
5 ไม้ไม้สำหรับกวนหรือ vortex หมุน .
สารเคมีที่จำเป็น :
1 กรดเกลือ ( HCl เป็น 10% โดยการใส่ 90ml ของน้ำในกระบอกตวง และเพิ่ม 10 มล. HCl เข้มข้น เทน้ำในขวดขนาดใหญ่ป้าย 10 % HCL และเพิ่มกรด เสมอเพิ่มกรดน้ำ และไม่ผกผัน ใช้กระบอกตวงที่ใช้สารเคมีทำความสะอาด และ / หรือ น้ำกลั่น นั่นคือถัง ควรใช้ตัวอย่างน้ำหรือสารเคมี แต่ไม่เคยทั้งคู่ )
2 โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ ( 10% ซึ่งจะทำโดยการผสม 10 กรัม 90 ml เกาะเม็ดกับน้ำกลั่น )
3 กรด H 2 ถึง 4 ( เข้มข้น )
4 สารอเซติก แอนไฮไดรด์ ( acetolysis โซลูชั่นถูกสร้างขึ้นโดยการผสม 10 มิลลิลิตรของกรด กำมะถันกับ 90 มิลลิลิตร สารอเซติก แอนไฮไดรด์ . ใช้ขวดให้ค่อยๆเพิ่มกรด กำมะถันต่อสารอเซติก แอนไฮไดรด์ . ระวังให้มาก ปฏิกิริยานี้ผลิตมากของความร้อน วิธีนี้ไม่ควรผสมกับน้ำ ขวดจะถูกเก็บไว้ที่แห้ง ไม่เคยล้างมันด้วยน้ำ )
5 กรดแอซีติก
6 กรดกัดแก้ว ( HF ต้องระวังให้มากเมื่อใช้ . มันเป็นอันตรายมากและคุณไม่ควรได้รับการใด ๆ บนผิวของคุณ , และลมหายใจของไอ )
795% เอทานอล
8 saffranin คราบ
9 tert บิวทานอล ( ไม่ควรสูดดมนี้ ) NB TBA แข็งตัวที่อุณหภูมิห้อง
10 ซิลิโคนเหลว ( 2000 CS )

สรุป : ขั้นตอนและต่อเนื่อง ประกอบด้วยสารเคมีกำจัดไม่ polliniferous วัสดุจากดินตะกอน .
1 ตัวอย่างเข็มแท็บเล็ต
2 10 % HCL ( ขจัดคาร์บอเนต )
3 ล้าง ( น้ำกลั่น )
4( ลด 10 % เกาะบางอินทรีย์ )
5 ล้าง
6 HF , ซ้ำถ้าจำเป็น ( ขจัดซิลิกา )
7 ล้าง
8 กรดแอซีติก
9 acetolysis ( ขจัดบางอินทรีย์เตรียมเกสร )
10 กรดแอซีติก
11 ล้าง
12 95% แอลกอฮอล์
13 95% แอลกอฮอล์
14 t-butanol
15 t-butanol
16 ขวด
17 ซิลิโคน
18 ตะแกรงหลังหยาบ 1 ถ้าต้องการ ; ปรับตะแกรงหลัง 6 . ถ้าจำเป็น ขั้นตอน

1ปกติ คุณจะ subsample ตะกอนจากหลักและสถานที่ตัวอย่างในหลอดแก้ว . โอนตะกอนจากขวดให้ขายขาด ( 50 ml ) ในดินตะกอนจากภาคเหนือ หรือหนาว , 1 ซีซี น่าจะเพียงพอ ในอาร์กติกหรือต่ำตัวอย่าง อินทรีย์สาร 4 ซีซี มักจะใช้ บันทึกในสมุดบันทึกห้องทดลองการติดต่อระหว่างชื่อทะเลสาบของคุณความลึกของตัวอย่างและจำนวนหลอด centrifuge . ขั้นตอนที่คุณควรจะบันทึกในสมุดบันทึกตามแล็บของคุณ ตามที่คุณไปตาม เห็นแม่แบบ .
2 เมื่อคุณเริ่มต้นกระบวนการ เปิดน้ำอาบน้ำไป ขั้นตอนบางอย่างต้องใช้ความร้อนเครื่องหมุนท่อ 500 มิลลิลิตร ใส่ 2-3 ถ้วยกับน้ำอุ่น และควบคุมอุณหภูมิให้น้ำเพิ่งเดือด
3จำนวนตัวอย่างที่คุณขึ้นอยู่กับประสบการณ์ของคุณ คุณสามารถเรียกใช้ 8 หรือ 12 หรือ 24 ตัวอย่าง บางขั้นตอนมีระยะเวลาวิกฤตมากขึ้นดังนั้นคุณจะต้องสามารถที่จะทำงานได้อย่างมีประสิทธิภาพก่อนที่คุณพยายามที่จะเรียกใช้ตัวอย่างมากเกินไปในเวลาเดียวกัน โดยปกติเราแบ่งตัวอย่างชุดที่สอง หนึ่งสามารถอยู่ในการรักษาทางเคมีอื่น ๆ ในขณะที่ใน .
4สถานที่ : ทักทินชั่วคราว ( เรากำลังใช้ชุด 307862 : ค่าเฉลี่ย ( SD ) 13 , 500 ( 690 ) ในเครื่องหมุนท่อ ปกติเราใช้ 2 เม็ด ซึ่งให้อัตราส่วนที่เหมาะสมของละอองเรณูจะขัดขวาง คุณอาจจะต้องปรับให้ขนาดของคุณ ใส่ชุดหมายเลขและจำนวนเม็ดในสมุดบันทึก .
5 เพิ่ม 10 % HCL . เพิ่มเล็กน้อยในตอนแรก เนื่องจากเม็ดประกอบด้วยคาร์บอเนตและมัน จะ โซดา ถ้าตะกอนที่มีคาร์บอเนตเป็นอย่างดีนั้นจะถูกใจมากขึ้น ดังนั้นควรระมัดระวังที่จะไม่ฟองกว่าด้านบนของเครื่องหลอด เอทานอล 95% สามารถใช้เพื่อหยุดฟอง , ถ้าจำเป็น เติมหลอดประมาณ 2 / 3 เต็ม และเมื่อ fizzing ได้หยุด . . . . . . .
6 ใช้หลอดคู่ เท่ากันในทั้งปริมาณและสถานที่ตรงข้ามกับแต่ละอื่น ๆในเครื่อง .เครื่อง 5 นาทีอย่างน้อย 4 , 000 รอบต่อนาที ค่อยๆรินนำ .
7 เพิ่ม 2 / 3 หลอดของน้ำกลั่น เครื่องกวนสาร และริน
8 ณจุดนี้ หากมีอนุภาคทรายขนาดใหญ่หรืออนุภาคอินทรีย์ขนาดใหญ่คุณอาจต้องการที่จะหยาบกรองตัวอย่าง ใช้ตะแกรง 150 ไมครอน และตะแกรงยึด และเรียกใช้ตัวอย่างผ่านคืนวัสดุที่ผ่านตะแกรง centrifuge หลอด มันน่าอึดอัดและคุณจะต้องใช้แก้ว . ใช้เฉพาะล้างบีกเกอร์ ใช้เพียงวิธีนี้ และไม่ใช่บีกเกอร์จากสอนแลป คุณอาจจะต้องหมุนแล้วสองสามครั้งเพื่อให้ได้น้ำตะกอนที่ผ่านเขาตะแกรง ( นั่นคือถ้าคุณใช้มากกว่า 50 มล. ของน้ำตะแกรง ) .
9เพิ่ม 2 / 3 หลอดเต็ม % เกาะ 10 การกวนตะกอน สถานที่ในอ่างน้ำเดือดสำหรับ 6-8 นาที
10 ย้ำ 5 และ 6 .
11 เพิ่ม 1 / 2 หลอดของ HF . สถานที่ในน้ำร้อน 10-15 นาที
12 ย้ำ 5 และ 6 .
13 ณจุดนี้ ถ้าตัวอย่างมีชั้นดิน ( มักจะเกิดขึ้นในตัวอย่างอาร์กติก ) คุณอาจต้องการที่จะใช้พวกเขาผ่าน 7 ไมครอน หน้าจอ เพิ่มไม่กี่มิลลิลิตรของโซเดียมไพโร 7% ที่อบอุ่นมันควรจะร้อนแต่ไม่เดือด คุณสามารถวางขวด ด้วยโซลูชันบนจานร้อน และควบคุมให้ดี อุณหภูมิ ตัดชิ้นส่วนของหน้าจอขนาดเหมาะสมและสถานที่ในการถือ เอาตัวอย่างโซเดียมไพโรในภาชนะ และกรองผ่านตะแกรงจนมีลักษณะที่ชัดเจนของพวกเขา .คุณสามารถถูก้นตะแกรงหรือใช้ช่างแกะสลักแตะไปด้านข้าง ( ขอบคุณสำหรับคำแนะนำนี้ jock mcandrews ) เพื่อเพิ่มความเร็วในกระบวนการ หลังจากตัวอย่างมีขนาดพอสมควร กลับตัวอย่าง centrifuge หลอด .
14 ย้ำ 5 และ 6 .
ที่ 15 ตอนนี้คุณต้องการที่จะกำจัดของน้ำในการเตรียมการสำหรับ acetolysis . เพิ่ม 1 / 2 หลอดของกรดแอซีติก , กวนตะกอนเครื่องปั่นเหวี่ยง และริน
16 ขั้นตอนต่อไปคือ acetolysis . ผสมขึ้นในขวด acetolysis โซลูชั่น เพิ่มกรด กำมะถันต่อสารอเซติก แอนไฮไดรด์อย่างช้าๆ
17 เพิ่มวิธีการแก้ปัญหาท่อ 1 / 2 เต็มควรจะเพียงพอ อย่างระมัดระวัง วางท่อในน้ำอาบน้ำ 3 นาที เมื่อถึงเวลา ค่อย ๆลบ เท่ากัน ปริมาณในหลอดที่มีน้ำแข็งกรดอะซิติกไม่น้ำและเครื่อง . อย่างเวลาที่กลุ่มที่สองของคุณเพื่อที่จะไม่เกินสามนาที ในตอนท้ายของ acetolysis , คุณสามารถปิดอ่าง แต่ดูด้านล่าง .
18 เพิ่มครึ่งหลอดของกรดแอซีติก กวนให้ตะกอน , เครื่องปั่นเหวี่ยง .
19 เพิ่ม 1 / 2 หลอดน้ำ , กวนตะกอน , .
20 ตอนนี้คุณต้องทำล้างเอทานอล 95% เพิ่ม 1 / 2 หลอดของเอทานอล , กวนตะกอนเครื่องหมุน ริน คุณสามารถเพิ่มหยดของ saffranin รอยเปื้อนท่อหากคุณต้องการคราบเรณู .
21 ทำซ้ำ 20 อย่าใส่ล้างคราบที่สอง อย่างไรก็ตาม
22 ตอนนี้ใส่ 1 / 2 หลอด tert บิวทานอล , กวนให้ตะกอน , เครื่องปั่นเหวี่ยง และริน ดูด้านล่างสำหรับความคิดเห็นที่บิวทานอล .
23 ย้ำ 22 รินให้มากที่สุด เพื่อให้ขั้นตอนต่อไปง่ายขึ้น
24ตอนนี้คุณต้องการถ่ายโอนตะกอนในขวดที่พวกเขาจะถาวร ถ้าคุณล้างขวดเดิมและพวกเขาจะแห้งคุณสามารถใช้พวกเขา ให้แน่ใจว่าพวกเขาเป็นอย่างป้าย และชมในระหว่างกระบวนการนี้ เป็นบิวทานอลสามารถละลายหมึกบางชนิด . เพิ่มผสมกับตะกอน / บิวทานอลและบิวทานอลล้างขวดล้างท่อให้ตะกอนในขวด .คุณอาจจะต้องทำซ้ำขั้นตอนนี้ใช้เวลาสองหรือมากกว่า แต่การปฏิบัติก็สามารถทำได้ในขั้นตอนเดียว วางขวดในเครื่องหมุน และหมุน รินและทำซ้ำถ้าจำเป็นเอาตะกอนในขวด .
25 เมื่อตะกอนอยู่ในขวดและคุณรินที่บิวทานอล เพิ่มสองหยด ผัดน้ำมัน และซิลิโคน คุณสามารถออกจาก applicator ไม้ในขวด .วางขวดในที่สะอาดและให้ประสาทสัมผัสที่เหลือใด ๆเครื่องดูดควันระเหย เมื่อคุณไม่สามารถได้กลิ่น บิวทานอล ( 2-3 วันถ้าคุณรินมีประสิทธิภาพ ) , ตัวอย่างพร้อมที่จะใช้ คุณสามารถเก็บหมวกพวกเขาและพวกเขามั่นใจว่าพวกเขาจะถูกระบุด้วยชื่อ ทะเลสาบลึก และถ้าคุณต้องการวันที่และชื่อของคุณ ) จนกว่าคุณจะพร้อมที่จะระบุธัญพืช
บนสไลด์ความคิดเห็นที่ :
- ขยะทั้งหมดต้องถูกวางไว้ในถังที่เหมาะสม ระมัดระวังไม่ให้ผสมของเสียอย่างไม่ถูกต้อง ตัวอย่างอ้างอิง
- เกสร ใช้ขั้นตอนเดียวกันกับหลาย ๆดอก หรือ ดอก ของพืช คุณสามารถใช้ปกติ 15