Materials and methods Vanilla sp. p

Materials and methods Vanilla sp. plants to isolate fungal endophytes were collected in the Atlantic Coast near Morrosquillo gulf and Montes de Maria (Sucre), Sierra Nevada de Santa Marta (Magdalena), San Pedro de Urabá; San Luis; San Jerónimo and Porce (Antioquia); Yopal (Casanare); Serranía de la Macarena (Caquetá); Buenaventura and surroundings (Valle del Cauca) (Table 1). In each location at least three vanilla plants were selected that had good growth and without any visual symptoms of disease or nutritional deficiencies. For each plant root samples of approximately 20 cm length were collected and placed on 10 g of adjacent soil. Root were exposed trying to avoid their altera
Table 1. Collection sites where Vanilla sp. in wild state were registered, Colombia. Location Department Porce Antioquia San Jerónimo Antioquia San Luis Antioquia San Pedro de Urabá Antioquia Yopal Meta Serranía de la Macarena Sucre Golfo de Morrosquillo Sucre Buenaventura Valle del Cauca S. N. de Santa Marta Magdalena
ACTA AGRONÓMICA. 61 (3) 2012, p 259-266
261
tion, cut with pruners, packed in hermetic closure plastic bags, properly labelled and moved fast to the lab on styrofoam boxes; there, they were washed with tap water, superficially disinfected with 70% ethanol for 1 min, 3% sodium hypochlorite for 30 s and, finally washed three times with sterile distilled water (Otero et al., 2002). For sowing 2 mm cuts were done with sterile surgical blades. On Petri dishes were sowed in triplicate eight root fragments. Media used for isolations was potato dextrose agar (PDA), supplemented with 50 µg/ml of penicillin and streptomycin sulfate before incubation in the dark at 28 °C for eight days. Molecular identification was performed using the obtained colonies by sequencing the ITS regions according to the protocols of the Cellular and Molecular Biology lab of the Universidad Nacional de Colombia - Medellín (data not shown).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัตถุดิบและวานิลลาเอสพีพืชเพื่อแยกเชื้อรา endophytes ถูกเก็บรวบรวมในชายฝั่งแอตแลนติกใกล้อ่าว Morrosquillo และ Montes เดมาเรีย (ซูเกร), เซียร์ราเนวาดาเดอซานตามาร์ (มักดาเลนา), San Pedro de Urabá San Luis ซาน Jerónimo และ Porce (โคลัมเบีย); Yopal (Casanare); Serranía de la Macarena (Caquetá); ท่องและสภาพแวดล้อม (Cauca del Valle) (ตาราง 1) ในแต่ละตำแหน่ง น้อยสามวานิลลาพืชเลือกที่มีการเจริญเติบโตดีและ ไม่มีอาการแสดงของโรคหรือข้อบกพร่องทางโภชนาการ สำหรับพืชแต่ละ ตัวอย่างหลักการประมาณ 20 ซม.ยาวถูกรวบรวม และวางบน 10 กรัมของดินที่อยู่ติดกัน รากถูกสัมผัสพยายามหลีกเลี่ยงการแปลงของพวกเขาตารางที่ 1 ไซต์คอลเลกชันที่เอสพีวานิลลาในป่ารัฐจดทะเบียน โคลอมเบีย ตำแหน่งแผนก Porce โคลัมเบียซาน Jerónimo โคลัมเบีย San Luis โคลัมเบีย San Pedro de Urabá โคลัมเบีย Yopal Meta Serranía เดอลา Macarena ซูเกรโอเด Morrosquillo ซูเกรท่อง Valle del Cauca S. N. de Santa Marta มักดาเลนา AGRONÓMICA แอคตา 61 (3) 2012, p 259-266 261 ทางการค้า ตัด ด้วย pruners บรรจุในถุงพลาสติกสุญญากาศปิด ฉลากอย่างถูกต้อง และถูกย้ายไปห้องปฏิบัติการอย่างรวดเร็วในกล่องโฟม มี พวกเขาถูกล้าง ด้วยน้ำประปา เผิน ๆ ฆ่าเชื้อ ด้วย 70% เอทานอล 1 นาที 3% โซเดียมไฮเปอร์คลอไรด์ 30 s และ ในที่สุด ล้าง 3 ครั้ง ด้วยน้ำกลั่นปลอดเชื้อ (บิดโอเตโร et al. 2002) สำหรับหว่าน 2 มม. ตัดได้ทำมีดผ่าตัดปลอดเชื้อ ใน Petri อาหารถูก sowed ในบางส่วนของรากลข้อแปด สื่อที่ใช้สำหรับเนื่อมีมันฝรั่งเป็นอาหาร (PDA), เสริม ด้วย 50 µg/ml ยาเพนนิซิลลินและ streptomycin ซัลเฟตก่อนบ่มในมืดที่อุณหภูมิ 28 ° C สำหรับแปดวัน รหัสโมเลกุลทำใช้อาณานิคมได้รับ โดยการจัดลำดับของภูมิภาคตามโพรโทคอของเซล และห้องปฏิบัติการอณูชีววิทยาของโคลอมเบียเดดิสท Universidad - Medellín (ไม่แสดงข้อมูล)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ SP วานิลลา พืชที่จะแยก endophytes เชื้อราถูกเก็บไว้ในชายฝั่งมหาสมุทรแอตแลนติกใกล้ Morrosquillo อ่าวไทยและเญินเดอมาเรีย (Sucre), เซียร์ราเนวาดาเดอซานตามาร์ตา (Magdalena) San Pedro de Urabá; ซานหลุยส์; San Jeronimo และ Porce (โอเควีย); Yopal (Casanare); Serranía de la Macarena (Caquetá); Buenaventura และสภาพแวดล้อม (Valle del Cauca) (ตารางที่ 1) ในแต่ละสถานที่อย่างน้อยสามวานิลลาพืชได้รับการคัดเลือกว่ามีการเจริญเติบโตที่ดีและไม่มีอาการใด ๆ ของภาพหรือโรคขาดสารอาหาร สำหรับแต่ละตัวอย่างรากพืชที่มีความยาวประมาณ 20 ซม. ถูกเก็บรวบรวมและวางไว้บน 10 กรัมของดินที่อยู่ติดกัน รากได้สัมผัสพยายามที่จะหลีกเลี่ยงการ Altera ของพวกเขา
ตารางที่ 1 ไซต์คอลเลกชันที่วานิลลา SP ในสภาพป่าได้รับการจดทะเบียน, โคลัมเบีย สถานที่ตั้งของกรม Porce โอเควีย San Jeronimo โอเควียซานหลุยส์โอเควีย San Pedro de Antioquia Urabá Yopal Meta Serranía de la Macarena ซูเกรกอลเดอซูเกร Morrosquillo Buenaventura Valle del Cauca SN เดอซานตามาร์ตา Magdalena
แอกAGRONÓMICA 61 (3) 2012, หน้า 259-266
261
การตัดกับ pruners บรรจุในถุงพลาสติกปิดสุญญากาศข้อความถูกต้องและย้ายอย่างรวดเร็วไปยังห้องปฏิบัติการในกล่องโฟม; ที่นั่นพวกเขาถูกล้างด้วยน้ำประปาฆ่าเชื้อเผิน ๆ กับเอทานอล 70% เป็นเวลา 1 นาทีโซเดียมไฮโปคลอไรต์ 3% เป็นเวลา 30 วินาทีและในที่สุดสามครั้งล้างด้วยน้ำกลั่นปลอดเชื้อ (Otero et al., 2002) สำหรับการหว่าน 2 มมตัดได้ทำด้วยใบมีดผ่าตัดผ่านการฆ่าเชื้อ บนจาน Petri ถูกหว่านในเพิ่มขึ้นสามเท่าแปดเศษราก สื่อที่ใช้สำหรับ isolations เป็น potato dextrose agar (PDA) เสริมด้วย 50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร penicillin และซัลเฟต streptomycin ก่อนการบ่มในที่มืดวันที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลาแปดวัน บัตรประจำตัวของโมเลกุลได้รับการดำเนินการโดยใช้โคโลนีที่ได้รับจากการเรียงลำดับภูมิภาคตามโปรโตคอลของเซลล์และโมเลกุลชีววิทยาห้องปฏิบัติการของมหาวิทยาลัยแห่งชาติโคลอมเบีย - เมเดยิน (ไม่ได้แสดงข้อมูล)