The real-time RT-PCR is a more rapi

The real-time RT-PCR is a more rapid technique than nested RT-PCR for CMNV detection. It is capable of detection small amount of cDNA templates and requires only 1.30 h while the nested PCR usually takes 2 h for steps 1 and 2 of amplification and 1 h for electrophoresis. Moreover, it is more sensitive than conventional RT-PCR and nested RT-PCR, which are able to detect 104 and 102 copies, respectively. It requires less than 10 copies of cDNA and is 10 times and 1000 times more sensitive than nested RT-PCR and conventional RT-PCR, respectively in terms of detectable copy number. In addition, nested RT-PCR has a higher risk of inaccurate results due to contamination (Porter-Jordan et al., 1990).

In the last decade, several TaqMan-based real-time PCR methods have been developed for detection of disease in aquaculture infected by DNA and RNA viruses (Durand and Lightner, 2002, Liu et al., 2013, Schikorski et al., 2013, Tang et al., 2004 and Yan et al., 2010). In the case of penaeid shrimp infected by an RNA virus, real-time RT-PCR was used to determine the viral copy number for shrimp infected with TSV. The technique can detect at least 100 copies of purified TSV RNA (Nunan et al., 2004) and 2 × 103 copies of TSV RNA copies (Cao et al., 2010). For IMNV, the detection limit of real-time RT-PCR was 10 copies, which is 100-fold more sensitive than nested RT-PCR (Andrade et al., 2007). For YHV, the detection limit of real-time RT-PCR was 102 copies of YHV, which is more sensitive than conventional RT-PCR (Ma et al., 2008).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

RT-PCR แบบเรียลไทม์เป็นเทคนิคอย่างรวดเร็วมากขึ้นกว่าซ้อน RT-PCR สำหรับตรวจจับ CMNV ก็สามารถตรวจจับเล็กน้อยของ cDNA แม่ และต้องเพียง 1.30 ชม.ในขณะที่ PCR ซ้อนกันมักจะใช้เวลา 2 ชม.สำหรับขั้นตอนที่ 1 และ 2 ของขยายและ 1 ชั่วโมงสำหรับอิ นอกจากนี้ มันมีความไวกว่าปกติ RT-PCR และซ้อนกัน RT-PCR ซึ่งสามารถตรวจสอบสำเนา 102 และ 104 ตามลำดับ มันต้องน้อยกว่า 10 สำเนาของ cDNA และ 10 เท่า และมากกว่า 1000 ครั้งสำคัญกว่าซ้อน RT-PCR และธรรมดา RT-PCR ลำดับในแง่ของจำนวนสำเนาที่ตรวจจับได้ นอกจากนี้ ซ้อน RT-PCR มีความเสี่ยงสูงของผลลัพธ์ไม่ถูกต้องเนื่องจากการปนเปื้อน (จอร์แดนยกกระเป๋า et al. 1990)ในทศวรรษที่ผ่านมา หลาย TaqMan ตามแบบเรียลไทม์ PCR ได้ถูกพัฒนาขึ้นสำหรับการตรวจหาโรคในสัตว์ที่ติดเชื้อไวรัสดีเอ็นเอและอาร์เอ็นเอ (Durand และ Lightner, 2002, Liu et al. 2013, Schikorski et al. 2013 ทัง et al. 2004 และ Yan et al. 2010) ในกรณีของ penaeid กุ้งติดเชื้อไวรัสเป็นอาร์เอ็นเอ เรียลไทม์ RT-PCR ถูกใช้เพื่อกำหนดจำนวนสำเนาไวรัสกุ้งติดเชื้อ TSV เทคนิคสามารถตรวจสอบสำเนาน้อย 100 ของ RNA TSV บริสุทธิ์ (Nunan et al. 2004) และ 2 × 103 สำเนาสำเนา TSV RNA (Cao et al. 2010) สำหรับ IMNV ขีดจำกัดการตรวจสอบแบบเรียลไทม์ RT-PCR ถูกสำเนา 10 ซึ่งเป็น 100-fold ความไวมากกว่าซ้อน RT-PCR (ทวารผมน้ำตาลเข้ม et al. 2007) สำหรับในกุ้ง ขีดจำกัดการตรวจสอบแบบเรียลไทม์ RT-PCR คือ สำเนา 102 ในกุ้ง ซึ่งมีความไวกว่าปกติ RT-PCR (Ma et al. 2008)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เวลาจริง RT-PCR เป็นเทคนิคที่มากขึ้นอย่างรวดเร็วกว่าที่ซ้อนกัน RT-PCR ในการตรวจหา CMNV มันมีความสามารถในการตรวจสอบจำนวนเล็ก ๆ ของแม่ cDNA และต้องใช้เพียง 1.30 ชั่วโมงในขณะที่ซ้อนกัน PCR มักจะใช้เวลา 2 ชั่วโมงสำหรับขั้นตอนที่ 1 และ 2 ของการขยายและ 1 ชั่วโมงสำหรับ electrophoresis นอกจากนี้ยังมีความสำคัญมากขึ้นกว่าเดิม RT-PCR และซ้อนกัน RT-PCR ซึ่งมีความสามารถในการตรวจสอบ 104 และ 102 เล่มตามลำดับ มันต้องน้อยกว่า 10 ชุดของยีนและเป็น 10 ครั้งและ 1000 ครั้งไวกว่าซ้อน RT-PCR และการชุมนุม RT-PCR ตามลำดับในแง่ของจำนวนสำเนาที่ตรวจพบ นอกจากนี้ซ้อนกัน RT-PCR มีความเสี่ยงสูงของผลที่ไม่ถูกต้องเนื่องจากการปนเปื้อน (พอร์เตอร์จอร์แดน et al., 1990).

ในทศวรรษที่ผ่านมาหลายแบบ real-time วิธี TaqMan ตาม PCR ได้รับการพัฒนาสำหรับการตรวจหาโรค เพาะเลี้ยงสัตว์น้ำการติดเชื้อโดย DNA และ RNA ไวรัส (Durand และ Lightner 2002 หลิว et al., 2013 Schikorski et al., 2013 Tang et al., 2004 ยัน et al., 2010) ในกรณีของกุ้งที่ติดเชื้อโดยไวรัสอาร์เอ็นเอ real-time RT-PCR ถูกใช้ในการกำหนดจำนวนสำเนาไวรัสกุ้งติดเชื้อ TSV เทคนิคที่สามารถตรวจสอบได้อย่างน้อย 100 สำเนาของบริสุทธิ์ TSV อาร์เอ็นเอ (Nunan et al., 2004) และ 2 × 103 สำเนาสำเนา TSV อาร์เอ็นเอ (Cao et al., 2010) สำหรับ IMNV ขีด จำกัด ของการตรวจสอบแบบ real-time RT-PCR เป็น 10 เล่มซึ่งเป็น 100 เท่าไวกว่าซ้อน RT-PCR (Andrade et al., 2007) สำหรับ YHV ขีด จำกัด ของการตรวจสอบแบบ real-time RT-PCR 102 สำเนาของ YHV ซึ่งเป็นความสำคัญมากขึ้นกว่าเดิม RT-PCR (MA et al., 2008)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เรียลไทม์เป็นเทคนิค RT-PCR อย่างรวดเร็วยิ่งกว่าด้วย RT-PCR เพื่อตรวจจับ cmnv . มันสามารถตรวจจับขนาดเล็กปริมาณ cDNA แม่แบบและใช้เพียง 1.30 ชั่วโมงขณะที่ซ้อนกันซึ่งมักจะใช้เวลา 2 ชั่วโมงสำหรับขั้นตอนที่ 1 และ 2 ของเครื่องขยายเสียงและ 1 H สำหรับเรส นอกจากนี้มีความไวมากกว่าปกติ และด้วยวิธีนี้ ซึ่งสามารถตรวจจับและ 102 ฉบับ ตามลำดับ มันต้องมีไม่น้อยกว่า 10 ชุดของยีน และ 10 ครั้ง และ 1 , 000 ครั้ง ความไวกว่าปกติ และซ้อนกัน 4 วิธี ตามลำดับ ในแง่ของจำนวนสำเนาได้ นอกจากนี้ ด้วย RT-PCR มีความเสี่ยงที่สูงขึ้นของผลลัพธ์ไม่ถูกต้องเนื่องจากการปนเปื้อน ( พอร์เตอร์จอร์แดน et al . , 1990 )ในช่วงทศวรรษที่ผ่านมา หลาย taqman ตามวิธี PCR แบบเรียลไทม์ได้ถูกพัฒนาขึ้นสำหรับการตรวจหาโรคในการเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำที่ติดเชื้อโดยดีเอ็นเอและอาร์เอ็นเอไวรัส ( ดูแรนด์ และดวงไฟ 2002 Liu et al . , 2013 , schikorski et al . , 2013 , Tang et al . , 2004 และยัน et al . , 2010 ) ในกรณีของกุ้งที่ติดเชื้อโดยไวรัสชนิด RNA , RT-PCR แบบเรียลไทม์ที่ใช้กำหนดจำนวนสำเนาไวรัสกุ้งติดเชื้อ TSV . เทคนิคที่สามารถตรวจจับเชื้อไวรัส RNA อย่างน้อย 100 แผ่น บริสุทธิ์ ( นู๋แนน et al . , 2004 ) และ 2 × 103 ฉบับของเชื้อไวรัส RNA ชุด ( เคา et al . , 2010 ) สำหรับ imnv , ขีดจำกัดของเวลาจริงนี้เป็น 10 ฉบับ ซึ่งมีความอ่อนไหวกว่า 100 พับซ้อนกันต่อ ( ที่ตั้ง et al . , 2007 ) หัว , ขีดจำกัดของเวลาจริงคือ 102 ฉบับนี้ของไวรัสหัวเหลือง ซึ่งมีความไวมากกว่าวิธีเดิม ( ma et al . , 2008 )