2. Materials and methods
2.1. Samples
Samples of pork (Sus scrofa) and cow (Bos taurus) muscles and samples of authentic game meat, namely hare (Lepus sp.), red deer (Cervus elaphus), wild rabbit (Oryctolagus cuniculus) and wild boar (Sus scrofa scrofa) were acquired from the retail market and local hunters. In the case of hare and wild rabbit, the samples consisted of the entire animal, not eviscerated, with hair, to confirm their authenticity. For each species, reference binary mixtures containing known proportions of the considered meat (0.01%, 0.1%, 0.5%, 1%, 2.5%, 5%, 10% and 20% (w/w)) in pork meat to a final weight of 100 g were prepared.
A total of 18 different commercial samples of game meat Alheira sausages acquired in local markets and directly from local producers were evaluated in the present study. Each sample was cut in halves and divided into two groups, one containing the casing and the other subjected to careful casing removal. All samples, including authentic meats, reference binary mixtures and commercial Alheira sausages were separately minced in a blender, using different material and different blender containers previously treated with DNA decontaminator solution to avoid contaminations.
A wide range of non-target animal species was included in the study for specificity assays, namely partridge (Alectoris spp.), red legged partridge (Alectoris rufa), pheasant (Phasianus colchicus), quail (Coturnix coturnix), turkey (Meleagris gallopavo), chicken (Gallus gallus), duck (Anas platyrhynchos), ostrich (Struthio camelus), sheep (Ovis aries) and goat (Capra hircus). Other ingredients that can also be used in the production of Alheira sausages were also included in the study for specificity assays, namely wheat bread, rye bread, garlic, parsley, paprika, onions, white pepper, laurel, chilli, corn and soybean.
All samples were extracted immediately or stored at − 20 °C to prevent enzymatic DNA degradation.
2. วัสดุและวิธีการ2.1. ตัวอย่างตัวอย่างของหมู (Sus scrofa) และกล้ามเนื้อวัว (พฤษภบอส) และตัวอย่างของแท้เนื้อเกม ได้แก่กระต่าย (sp.กลุ่มดาวกระต่ายป่า), กวางแดง (Cervus elaphus), กระต่ายป่า (Oryctolagus cuniculus) และหมูป่า (Sus scrofa scrofa) ได้รับมาจากตลาดขายปลีกและนายพรานท้องถิ่น ในกรณีของกระต่ายและกระต่ายป่า ตัวอย่างประกอบด้วยของสัตว์ทั้งหมด ไม่ eviscerated ผม เพื่อยืนยันความถูกต้องของพวกเขา อ้างอิงน้ำยาผสมไบนารีที่ประกอบด้วยสัดส่วนชื่อดังที่เป็นเนื้อ (0.01%, 0.1%, 0.5%, 1%, 2.5%, 5%, 10% และ 20% (w/w)) ในเนื้อหมูน้ำหนักสุดท้ายของ 100 กรัมเตรียมไว้สำหรับแต่ละชนิดจำนวนตัวอย่างเชิงพาณิชย์ต่าง ๆ 18 ไส้กรอกเนื้อเกม Alheira มาในตลาดท้องถิ่น และโดยตรงจากผู้ผลิตท้องถิ่นถูกประเมินในการศึกษาปัจจุบัน แต่ละตัวอย่างถูกตัดครึ่ง และแบ่ง หนึ่งประกอบด้วยปลอกและอื่น ๆ ต้องระวังปลอกเอา ตัวอย่างทั้งหมด รวมถึงเนื้อสัตว์อาหาร อ้างอิงน้ำยาผสมไบนารี และไส้กรอก Alheira พาณิชย์ถูกสับแยกต่างหากในเบลนเดอร์ ใช้วัสดุที่แตกต่างและคอนเทนเนอร์เบลนเดอร์ต่าง ๆ ก่อนหน้านี้ ถือว่า มีดีเอ็นเอ decontaminator โซลูชั่นเพื่อหลีกเลี่ยงการปนความหลากหลายของพันธุ์สัตว์ไม่ใช่เป้าหมายรวมอยู่ในการศึกษาสำหรับ specificity assays ได้แก่ partridge (โอ Alectoris), partridge ขาเปลือยสีแดง (Alectoris rufa), ไก่ฟ้าสี (Phasianus colchicus), กระทา (Coturnix coturnix), ตุรกี (Meleagris gallopavo), ไก่ (Gallus gallus), (อนัส platyrhynchos) เป็ด นกกระจอกเทศ (Struthio camelus), (Ovis aries) แกะ และแพะ (Capra hircus) ส่วนผสมอื่น ๆ ที่สามารถใช้ในการผลิตไส้กรอก Alheira ยังรวมอยู่ในการศึกษาสำหรับ specificity assays ได้แก่ขนมปังโฮลวีต ขนมปังข้าวไรย์ กระเทียม ผักชีฝรั่ง พริกขี้หนู หอม พริกไทยขาว ลอเรล พริก ข้าวโพด และถั่วเหลืองตัวอย่างทั้งหมดถูกสกัดทันที หรือเก็บที่− 20 ° C เพื่อป้องกันการย่อยสลายดีเอ็นเอเอนไซม์ในระบบ
การแปล กรุณารอสักครู่..
2. วัสดุและวิธีการ
2.1 ตัวอย่าง
ตัวอย่างเนื้อหมู (เร็ว ๆ ป่า) และวัว (ราศีพฤษภ) กล้ามเนื้อและตัวอย่างของเนื้อเกมที่แท้จริงคือกระต่าย (กระต่าย Sp.), กวางแดง (Cervus บฟุส) กระต่ายป่า (Oryctolagus ลัส) และหมูป่า (เร็ว ๆ ป่า ๆ ป่า ) ได้มาจากตลาดค้าปลีกและนักล่าท้องถิ่น ในกรณีของกระต่ายและกระต่ายป่าตัวอย่างประกอบด้วยสัตว์ทั้งหมดไม่เว้นแต่ละวันด้วยผมเพื่อยืนยันความถูกต้องของพวกเขา สำหรับแต่ละสายพันธุ์อ้างอิงผสมไบนารีที่มีสัดส่วนที่เป็นที่รู้จักกันของเนื้อถือ (0.01%, 0.1%, 0.5%, 1%, 2.5%, 5%, 10% และ 20% (w / W)) ในเนื้อหมูเข้าสู่รอบสุดท้าย น้ำหนัก 100 กรัมได้จัดทำรวม 18 ตัวอย่างทางการค้าที่แตกต่างกันของเนื้อไส้กรอกเกม Alheira มาในตลาดในประเทศและโดยตรงจากผู้ผลิตในท้องถิ่นได้รับการประเมินในการศึกษาครั้งนี้ แต่ละตัวอย่างถูกตัดในครึ่งและแบ่งออกเป็นสองกลุ่มหนึ่งที่มีท่อและอื่น ๆ ภายใต้การกำจัดท่อระมัดระวัง ตัวอย่างทั้งหมดรวมทั้งเนื้อสัตว์แท้ๆอ้างอิงผสมไบนารีและไส้กรอก Alheira เชิงพาณิชย์ถูกสับแยกต่างหากในเครื่องปั่นโดยใช้วัสดุที่แตกต่างกันและภาชนะเครื่องปั่นที่แตกต่างกันได้รับการรักษาก่อนหน้านี้กับการแก้ปัญหา decontaminator ดีเอ็นเอเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนหลากหลายไม่ใช่เป้าหมายสัตว์สปีชีส์ถูกรวมอยู่ใน การศึกษาสำหรับการตรวจจำเพาะคือนกกระทา (Alectoris spp.), นกกระทาสีแดงขา (Alectoris รูฟา) ไก่ฟ้า (Phasianus colchicus) นกกระทา (Coturnix Coturnix), ตุรกี (Meleagris gallopavo) ไก่ (กางเกงกางเกง), เป็ด (อนัส platyrhynchos ), นกกระจอกเทศ (Struthio Camelus) แกะ (ราศีเมษแกะ) และแพะ (คาปรา hircus) ส่วนผสมอื่น ๆ ที่ยังสามารถใช้ในการผลิตไส้กรอก Alheira ยังถูกรวมอยู่ในการศึกษาสำหรับการตรวจจำเพาะขนมปังข้าวสาลีคือขนมปังข้าวไรย์, กระเทียม, ผักชีฝรั่ง, พริกหยวก, หัวหอม, พริกไทยขาว, ลอเรล, พริก, ข้าวโพดและถั่วเหลืองทั้งหมด ตัวอย่างถูกสกัดได้ทันทีหรือเก็บไว้ที่ - 20 ° C เพื่อป้องกันไม่ให้การย่อยสลายของเอนไซม์ดีเอ็นเอ
การแปล กรุณารอสักครู่..
2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ตัวอย่าง
ตัวอย่างของหมู ( SUS scrofa ) และวัว ( บอสราศีพฤษภ ) กล้ามเนื้อและตัวอย่างเนื้อเกมที่แท้จริง คือ กระต่ายป่า ( กลุ่มดาวกระต่ายป่า sp . ) , กวางแดง ( นครราชสีมา้ําตาล ) , กระต่าย ( oryctolagus cuniculus ) และหมูป่า ( SUS scrofa scrofa ) ได้มาจากตลาดค้าปลีกและนักล่าท้องถิ่น ในกรณีของกระต่ายและกระต่าย , จำนวนสัตว์ทั้งหมดไม่แฉ ผม เพื่อยืนยันความถูกต้องของพวกเขา สำหรับแต่ละชนิดไบนารีหรืออ้างอิงของผสมที่มีสัดส่วนของการพิจารณาเนื้อ ( 0.01 , 0.1 % , 0.5% , 1% , 2.5% , 5% , 10% และ 20% ( w / w ) ในเนื้อหมูกับน้ำหนักสุดท้ายของ 100 g
เตรียมไว้แล้วทั้งหมด 18 แตกต่างกันทางการค้า ตัวอย่างของเกม alheira เนื้อไส้กรอกที่ได้รับในตลาดท้องถิ่นและโดยตรงจากผู้ผลิตในท้องถิ่น ได้แก่ ในการศึกษาปัจจุบัน แต่ละตัวอย่างถูกตัดในครึ่งและแบ่งออกเป็น 2 กลุ่ม กลุ่มหนึ่งที่มีท่อและอื่น ๆต้องเอาปลอกระวัง ตัวอย่างทั้งหมด รวมทั้งเนื้อสัตว์แท้ๆอ้างอิงแบบผสมและเชิงพาณิชย์ไส้กรอก alheira ถูกแยกบดในเครื่องปั่น ใช้วัสดุที่แตกต่างกัน และภาชนะต่าง ๆที่เคยได้รับการรักษาด้วยวิธีการปั่น decontaminator ดีเอ็นเอเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อน
หลากหลายของชนิดสัตว์ที่ไม่ใช่เป้าหมาย ถูกรวมอยู่ในการศึกษาความจำเพาะนกกระทา ( ) คือ alectoris spp . ) แดงขานกกระทา ( alectoris rufa ) ,ไก่ฟ้า ( phasianus colchicus ) , นกกระทา ( coturnix coturnix ) , ตุรกี ( meleagris gallopavo ) , ไก่ ( gallus gallus ) เป็ด ( นาส platyrhynchos ) นกกระจอกเทศ ( struthio อูฐ ) แกะ ( Aries ovis ) และแพะ ( แพะ hircus ) ส่วนผสมอื่น ๆที่สามารถใช้ในการผลิตไส้กรอก alheira ยังรวมอยู่ในการศึกษาความจำเพาะ ) ได้แก่ ขนมปังโฮลวีท ขนมปังกระเทียม ผักชีฝรั่ง ข้าวไรย์พริกหยวก , หัวหอม , พริกไทย , สีขาว ลอเรล พริก ข้าวโพด และถั่วเหลือง
ตัวอย่างที่สกัดได้ทันทีหรือเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 20 ° C −เพื่อป้องกันการย่อยสลายดีเอ็นเอเอนไซม์ .
การแปล กรุณารอสักครู่..