2.8. Non-specific and thiol-specifi

2.8. Non-specific and thiol-specific SDS-PAGE
The SDS-homogenates from the thiol quantification of the meat
emulsions collected at day 1 were analyzed by a thiol-specific IAFlabeled
1D gel-electrophoresis modified from Hawkins, Morgan, and
Davies (2009) coupled to non-specific ordinary SDS-PAGE. The homogenateswere
diluted in 250mMTRIS buffer (pH 7.4) to obtain 0.6 mg/ml
after heat treatment for 20 min at 80 °C. Diluted samples were incubated
for 15 min at 20 °C with 80 μM 5-iodoacetamidofluorescein (IAF).
Subsequently, derivatized samples were incubated for 10 min at 80 °C
with 0.8 mM iodoacetamide and 30 μl LDS sample buffer. Reduced
samples were prepared without IAF labeling as described by Jongberg,
Skov, et al. (2011), and IAF-stained and reduced samples as well as
Precision Plus Protein All Blue Standard were loaded to the wells of a
NuPAGE Novex 3–8% TRIS-acetate gel (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).
Electrophoresis was run for 84 min at 150 V in a cassette containing
ice-cold SDS TRIS-acetate running buffer. Immediately after electrophoresis,
the gel was scanned on a Typhoon Trio Variable Mode Imager
(GE Healthcare Life Sciences, Brøndby, Denmark) using filter 526SP,
laser: green (532nm), 100 μm, sensitive mode, and scan: 820 PMT. Subsequently,
the gelwas fixed and stained by Sypro Ruby Protein Gel Stain
(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) as described by Jongberg, Skov, et al.
(2011). The gels were scanned on Typhoon Trio Variable Mode Imager
(GE Healthcare Life Sciences, Brøndby, Denmark) using filter 610 BP
30, laser: green (532 nm), 100 μm, sensitive mode, and scan: 470
PMT. Data processing was performed using GelAnalyzer 2010© by Dr.
Istvan Lazar (ver. 2010a).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.8 เฉพาะ thiol และไม่ใช่เฉพาะ SDS-หน้าSDS-homogenates จากนับ thiol ของเนื้อemulsions รวบรวมในวันที่ 1 ถูกวิเคราะห์ โดย IAFlabeled เฉพาะ thiolเจล 1D จากฮอว์กินส์ มอร์แกน electrophoresis และเดวีส์ (2009) ควบคู่ไปไม่ใช่เฉพาะธรรมดา SDS-หน้า Homogenateswereยกเว้นใน 250mMTRIS บัฟเฟอร์ (pH 7.4) รับ 0.6 mg/mlหลังจากรักษาความร้อนที่ 80 องศาเซลเซียส 20 นาที ตัวอย่างแตกออกได้ incubatedใน 15 นาทีที่ 20 ° C มี 80 μM 5-iodoacetamidofluorescein (IAF)ในเวลาต่อมา ถูก incubated ตัวอย่าง derivatized ใน 10 นาทีที่ 80 ° Cมี 0.8 มม. iodoacetamide และ μl 30 แอลดีเอสอย่างบัฟเฟอร์ ลดลงตัวอย่างเตรียมไว้ โดย IAF ติดฉลากตามที่อธิบายไว้ โดย JongbergSkov, et al. (2011), และตัวอย่าง สี IAF และลดลงเป็นความแม่นยำบวกโปรตีนทั้งหมดสีฟ้ามาตรฐานถูกโหลดไปยังบ่อของการNuPAGE Novex 3-8% ทริสเรทติ้ง acetate เจลอาบ (Invitrogen คาร์ลส CA, USA)Electrophoresis รันในนาที 84 150 V ในเทปที่ประกอบด้วยฉ่ำ SDS ตรี-acetate ทำบัฟเฟอร์ ทันทีหลังจาก electrophoresisเจถูกสแกนขณะที่ลมทริโอแปรโหมดถ่ายภาพ(วิทยาศาสตร์สุขภาพสุขอนามัย GE, Brøndby เดนมาร์ก) โดยใช้ตัวกรอง 526SPเลเซอร์: กรีน (532nm), 100 μm โหมดสำคัญ และการสแกน: 820 ชำระ ในเวลาต่อมาgelwas ถาวร และสี โดย Sypro ทับทิมโปรตีนเจติด(Invitrogen คาร์ลส CA, USA) ตามที่อธิบายไว้ โดย Jongberg, Skov, et al(2011) . เจถูกสแกนขณะถ่ายภาพโหมดการผันแปรของลมทริโอ(วิทยาศาสตร์สุขภาพสุขอนามัย GE, Brøndby เดนมาร์ก) ใช้กรอง 610 BP30 เลเซอร์: สีเขียว (532 nm), μm 100 โหมดสำคัญ และการสแกน: 470ทำการประมวลผลข้อมูลในการชำระเงินโดยใช้ GelAnalyzer 2010 © โดย DrIstvan Lazar (ไม่ 2010a)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.8 SDS-PAGE ไม่เฉพาะเจาะจงและ thiol เฉพาะ
SDS-homogenates จากปริมาณ thiol ของเนื้อ
อิมัลชันเก็บในวันที่ 1 นำมาวิเคราะห์โดย thiol เฉพาะ IAFlabeled
1D เจลอิเล็กดัดแปลงมาจากฮอว์กิน, มอร์แกนและ
เดวีส์ (2009) คู่ ไม่ใช่เฉพาะสามัญ SDS-PAGE homogenateswere
เจือจางในบัฟเฟอร์ 250mMTRIS (pH 7.4) เพื่อให้ได้ 0.6 mg / ml
หลังจากการรักษาความร้อนเป็นเวลา 20 นาทีที่ 80 ° C ตัวอย่างที่เจือจางถูกบ่ม
เป็นเวลา 15 นาทีที่ 20 ° C ที่มี 80 ไมครอน 5- iodoacetamidofluorescein (IAF).
ต่อจากนั้นตัวอย่าง derivatized ถูกบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 80 ° C
กับ 0.8 มิลลิ iodoacetamide และ 30 ไมโครลิตรบัฟเฟอร์ตัวอย่างโบถส์ ลดลง
ตัวอย่างที่ถูกจัดทำขึ้นโดยไม่ต้องติดฉลาก IAF ตามที่อธิบายไว้โดย Jongberg,
Skov, et al (2011) และ IAF เปื้อนและตัวอย่างลดลงเช่นเดียวกับ
พรีซิชั่พลัสโปรตีนทั้งหมดมาตรฐานสีฟ้าถูกโหลดไปยังหลุมของ
NuPAGE Novex 3-8% ทริสเจล-อะซิเตท (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).
Electrophoresis กำลังวิ่ง 84 นาทีที่ 150 V ในเทปคาสเซ็ทที่มี
เย็น SDS-ทริสอะซิเตทบัฟเฟอร์ทำงาน ทันทีหลังจากที่อิเลค,
เจลได้รับการสแกนในโหมดตัวแปรสามไต้ฝุ่น Imager
(GE Healthcare วิทยาศาสตร์เพื่อชีวิต, Brøndby, เดนมาร์ก) โดยใช้ 526SP กรอง
เลเซอร์สีเขียว (532nm) 100 ไมโครเมตรโหมดที่สำคัญและสแกน: 820 PMT ต่อมา
gelwas คงที่และย้อมสีโดย Sypro ทับทิมโปรตีนคราบเจล
(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ตามที่อธิบายไว้โดย Jongberg, Skov, et al.
(2011) เจลถูกสแกนในโหมดตัวแปรไต้ฝุ่นสาม Imager
(GE Healthcare วิทยาศาสตร์เพื่อชีวิต, Brøndby, เดนมาร์ก) ใช้ตัวกรอง 610 BP
30, เลเซอร์สีเขียว (532 นาโนเมตร), 100 ไมโครเมตรโหมดความละเอียดอ่อนและสแกน: 470
PMT การประมวลผลข้อมูลที่ถูกดำเนินการโดยใช้ GelAnalyzer 2010 ©โดยดร
Istvan เกลลาซาร์ (ver. 2010a)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.8 . ไม่เฉพาะเจาะจง และขนาดที่เฉพาะเจาะจงถูก
homogenates SDS จากขนาดของปริมาณเนื้ออิมัลชั่นที่ 1 วัน
รวบรวม วิเคราะห์ โดยเฉพาะ iaflabeled
ขนาด 1D gel electrophoresis ดัดแปลงจาก Hawkins , มอร์แกน ,
เดวีส์ ( 2009 ) คู่กับเอนไซม์ชนิดธรรมดา . การ homogenateswere
เจือจางใน 250mmtris บัฟเฟอร์ pH 7.4 ) ที่ได้รับ 0.6 มก. / มล.
หลังการรักษาความร้อนเป็นเวลา 20 นาทีที่ 80 องศา ปรับลดจำนวนเชื้อ
15 นาทีที่ 20 ° C 80 μ M 5-iodoacetamidofluorescein ( IAF ) .
ต่อมา derivatized จำนวนบ่มสำหรับ 10 นาทีที่ 80 ° C
0.8 มม. และ 30 μ l ตัวอย่าง iodoacetamide โบถส์บัฟเฟอร์ ลด
จำนวนเตรียมโดยไม่ IAF ฉลากตามที่อธิบายไว้โดย jongberg
skov , et al . ( 2011 )กับ IAF เปรอะเปื้อนและลดลงตัวอย่างรวมทั้ง
แม่นยำบวกโปรตีนมาตรฐานสีฟ้าโหลดบ่อของ
nupage novex 3 – 8 % จากอะซิเตท เจล ( Invitrogen Carlsbad , CA , USA ) .
electrophoresis คือวิ่ง 84 นาที 150 V ในตลับประกอบด้วย
เย็น SDS ซึ่งใช้อะซิเตท บัฟเฟอร์ ทันทีหลังจากอิเล็ก
เจลสแกนในโหมดสัญญาณภาพ
พายุไต้ฝุ่นสามตัวแปร( GE Healthcare วิทยาศาสตร์เพื่อชีวิต , BR ขึ้น ndby , เดนมาร์ก ) โดยใช้ตัวกรอง 526sp
, เลเซอร์สีเขียว ( 532nm ) 100 μ M โหมด ไว และสแกน : 820 PMT . ต่อมา
gelwas ถาวร และ คราบโปรตีน sypro ทับทิมเจลคราบ
( Invitrogen Carlsbad , CA , USA ) ตามที่อธิบายไว้โดย jongberg skov , et al .
( 2011 ) เจล ทำการสแกนในโหมดพายุไต้ฝุ่นสามตัวแปร )
( วิทยาศาสตร์ , GE Healthcare ชีวิตขึ้น ndby br ,เดนมาร์ก ) การใช้ตัวกรองใน BP
30 , เลเซอร์สีเขียว ( 532 nm ) 100 μ M โหมด ไว และสแกน : 470
PMT . การประมวลผลข้อมูลคือการใช้ gelanalyzer 2010 สงวนลิขสิทธิ์โดยดร.
อิสวอน ลาซาร์ ( Ver . 2010a )