Determination of b-Actin-RNA/DNA Le

Determination of b-Actin-RNA/DNA Levels
To assess whether there was a decrease in the RNA amount relative to genomic
DNA content in triploids, we have conducted PCR experiments for
the single-copy b-actin gene, with DNA and cDNA samples from liver of
three diploid S. pyrenaicus and two triploid S. alburnoides as templates. Genomic
DNA and total RNA were extracted simultaneously from each sample
with the AllPrep DNA/RNA Mini Kit (QIAGEN). Amplification of DNA and
cDNA templates was conducted with b-actin primers (Table S3). PCR conditions
were as follows: preheating at 94C for 3 min, 30 cycles at 94C for
45 s, 60C for 40 s, and 72C for 3 min and a final extension at 72C for
15 min. Products were run in a 1.5% agarose gel and densitometrically
quantified with ImageG (Figure S2).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กำหนดระดับ b-แอกตินอาร์เอ็นเอ/ดีเอ็นเอเพื่อประเมินว่ามีการลดในยอดอาร์เอ็นเอสัมพันธ์ genomicDNA เนื้อหาใน triploids เราได้ดำเนินการทดลอง PCR เพื่อยีน b แอกตินสำเนาเดียว มีตัวอย่างดีเอ็นเอและ cDNA จากตับของสาม diploid S. pyrenaicus และ S. triploid สอง alburnoides เป็นต้น Genomicดีเอ็นเอและอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดกันจากแต่ละตัวอย่างมี AllPrep ดีเอ็นเอ/อาร์เอ็นเอมินิชุด (QIAGEN) ขยายของดีเอ็นเอ และแม่ cDNA ถูกดำเนินกับไพรเมอร์บีแอกติน (ตาราง S3) เงื่อนไข PCRมีดังนี้: preheating ที่ 94 C สำหรับ 3 นาที 30 รอบที่ 94 C สำหรับs, C 60 สำหรับ 40 45 s และ C 72 3 นาทีและต่อสุดท้ายที่ 72 C สำหรับ15 นาทีผลิตภัณฑ์ถูกเรียกใช้ ในวุ้น 1.5% agarose และ densitometricallyquantified โดย ImageG (รูป S2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความมุ่งมั่นของ B-โปรตีน-RNA / DNA ระดับ
เพื่อประเมินว่ามีการลดลงของจำนวนเงินที่ญาติ RNA เพื่อจีโนม
เนื้อหาดีเอ็นเอใน triploids เรามีดำเนินการทดสอบ PCR สำหรับ
สำเนาเดียวยีน B-โปรตีนที่มีดีเอ็นเอและตัวอย่างดีเอ็นเอจาก ตับของ
สามซ้ำ pyrenaicus เอสและสอง triploid alburnoides เอสเป็นแม่แบบ Genomic
DNA และ RNA ทั้งหมดถูกสกัดพร้อมกันจากแต่ละกลุ่มตัวอย่าง
ที่มีดีเอ็นเอ AllPrep / อาร์เอ็นเอมิ Kit (QIAGEN) การขยายของ DNA และ
cDNA แม่ได้ดำเนินการกับไพร B-โปรตีน (ตาราง S3) เงื่อนไข PCR
มีดังนี้? อุ่นที่ 94 C เป็นเวลา 3 นาที, 30 รอบที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
45 วินาที, 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 วินาที, และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาทีและนามสกุลสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา?
15 นาที . ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการทำงานในเจล agarose 1.5% และ densitometrically
วัดกับ ImageG (รูปที่ S2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การกำหนด b-actin-rna / DNA ระดับ
เพื่อประเมินว่ามีการลดลงในระดับปริมาณสัมพันธ์กับเนื้อหาดีเอ็นเอ
ในปลาทริพลอย เราได้ดำเนินการโดยการทดลอง
เดียวคัดลอก b-actin ยีนกับดีเอ็นเอและดีเอ็นเอจากตัวอย่างตับ
3 S . pyrenaicus ดิพลอยด์และสองปลาทริพลอยด์ เอส alburnoides เป็นแม่แบบ จีโนมของ DNA และ RNA ที่ทั้งหมด

พร้อมกันจากแต่ละตัวอย่างกับ allprep DNA / RNA ขนาดเล็กชุด ( เพิ่ม ) การเพิ่มปริมาณของดีเอ็นเอและดีเอ็นเอแม่แบบ
จำนวน b-actin ไพรเมอร์ ( โต๊ะ S3 ) โดยเงื่อนไข
ดังนี้อุ่นที่ 94  C เป็นเวลา 3 นาที 30 รอบที่ 94  C
45 , 60  C 40 , และ 72  C เป็นเวลา 3 นาที และสุดท้ายเป็นส่วนขยายที่ 72  C
15 นาทีผลิตภัณฑ์ที่ได้ใช้ในเจล ( 1.5 % และ densitometrically
quantified กับ imageg ( รูป S2 )