Seed samples were collected every 1

Seed samples were collected every 10 days from 20 days after flowering (DAF) at middle nodes (beginning of the linear seed filling period fillingperiod) to 60 DAF (physiological maturity) for analysis of endoge-nous plant hormone (ABA) in seed. Seed samples were taken from10 pods. Harvested seed samples were immediately frozen on dryice and stored at approximately −18◦C until analysis with an HPLC.The endogenous plant hormone analysis was carried out usingthe HPLC procedure outlined previously (Hein et al., 1984; Zhanget al., 1999; Liu et al., 2010). Briefly, samples were initially weighedthen about 1 g was homogenized with a Polytron homogenizer for3 min in 10 mL of 80% cold methanol (4◦C) containing 10 mg/L BHT(chilled to −80◦C before use). After extraction for 4 h at 4◦C, thehomogenates were centrifuged at 10,000 × g for 15 min and thenthe supernatant was decanted. The residues were further extractedtwice with 10 mL of 80% cold methanol and then the supernatantswere combined. These combined extracts were reduced to theaqueous phase in salinized glass tubes under reduced pressure at30◦C. The combined extracts were brought to a volume of 4.0 mLwith distilled deionized H2O, and then sonicated, and microfiltered(1.2 m cellulose nitrate, Micro Filtration System). Samples wereinjected onto a stainless steel column packed with PRP-1 (10 mparticle size) and subjected to a 15-min linear solvent gradient from0.01 M NaH2PO4in 10% ethanol to 0.01 M NaH2PO4in 50% ethanol(2.0 mL min−1). The fraction in which authentic standards of planthormones eluted from the PRP-1 column was diverted to a prepar-ative C18column (7 m particle diameter, 10 mm × 15 cm column)with a high pressure valve. The fractions were eluted from the C18column with a 30-min linear gradient from 0.1 N acetic acid (pH2.8) to 0.1 N acetic acid in 50% ethanol (2.5 mL min−1). Fractionscontaining plant hormones were reduced to 1.0 mL of aqueous elu-ent under reduced pressure (30◦C). For ABA, the fractions wereinjected (50 L, Waters Associates) onto a strong anion exchangecolumn (7 m particle diameter, Wilmington, DE, 4.2 mm × 15 cmcolumn) and eluted with a mobile phase of 30% CH3OH, 10% CH3CN,60% H2O (adjusted to pH 3.5 with H3PO4). The velocity of flow was0.8 mL min−1. The measurement apparatus worked at UV 254 nm.Plant hormone (ABA) in samples was quantified by external stan-dardization to authenticate the standard swatch using peak heightmeasurements. The lowest sensitivity was 10−8g/L.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างเมล็ดพันธุ์รวบรวมทุก 10 วันจากวันที่ 20 หลังจากดอก (เยอรมัน) ที่กลางโหน (จุดเริ่มต้นของ fillingperiod ระยะเวลาในการบรรจุเมล็ดพันธุ์เชิง) เยอรมัน 60 (สรีรวิทยาครบกำหนด) สำหรับการวิเคราะห์ของ endoge-nous ฮอร์โมนพืช (ABA) ในเมล็ด ตัวอย่างเมล็ดได้นำฝัก from10 ตัวอย่างเมล็ดพันธุ์ที่เก็บเกี่ยวได้ทันที dryice แช่แข็ง และเก็บไว้ที่ประมาณ −18◦C จนการวิเคราะห์ด้วย HPLC การได้ดำเนินการวิเคราะห์ฮอร์โมนพืช endogenous usingthe HPLC ขั้นตอนอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Hein et al., 1984 Zhanget al., 1999 หลิว et al., 2010) สั้น ๆ ตัวอย่างแรกถูกต้องหรือ weighedthen ประมาณ 1 g ถูก homogenized เป็นกลุ่มกับแบบฝากระจกโค้ง homogenizer for3 นาทีใน 10 mL ของ 80% เย็นเมทานอล (4◦C) ประกอบด้วย 10 mg/L บาท (เย็นไป −80◦C ก่อนใช้) หลังจากสกัดสำหรับ h 4 ที่ 4◦C, thehomogenates ได้ centrifuged ที่ 10000 × g สำหรับ 15 นาที และถูก decanted supernatant thenthe ตกค้างมีต่อ extractedtwice กับ 10 mL ของเมทานอลเย็น 80% แล้ว supernatantswere ที่รวม สารสกัดเหล่านี้รวมได้ลดลงเป็นระยะ theaqueous ในหลอดแก้ว salinized ภายใต้ at30◦C ความดันลดลง สารสกัดรวมถูกนำไปไดรฟ์ข้อมูล 4.0 mLwith กลั่น deionized H2O แล้ว sonicated และรตชนิดผงละลายง่าย (1.2 เมตรเซลลูโลสไนเตรต ระบบกรองไมโคร) Wereinjected ตัวอย่างลงในคอลัมน์สเตนเลสบรรจุ PRP-1 (ขนาด 10 mparticle) และต้องเป็น 15 นาทีเส้นเป็นตัวทำละลายไล่ระดับ from0.01 M NaH2PO4in 10% เอทานอลกับ 0.01 M NaH2PO4in 50% เอทานอล (min−1 2.0 mL) เศษส่วนแท้มาตรฐานของ planthormones eluted จากคอลัมน์ PRP 1 ถูกเบี่ยงเบนไป C18column prepar-ative (เส้นผ่านศูนย์กลางอนุภาค 7 m คอลัมน์ 10 มม. × 15 ซม.) ด้วยวาล์วแรงดันสูง เศษส่วนมี eluted จาก C18column ที่ มีไล่เส้น 30 นาทีจากกรด 0.1 N น้ำส้ม (pH2.8) ไป 0.1 N กรดอะซิติกใน 50% เอทานอล (min−1 2.5 mL) Fractionscontaining พืชฮอร์โมนลดลง 1.0 mL ของ elu เอนท์อควีภายใต้ความดันลดลง (30◦C) สำหรับ ABA, wereinjected เศษส่วน (50 L น้ำเชื่อมโยง) ลง exchangecolumn แรง anion (7 m อนุภาคเส้นผ่านศูนย์กลาง วิลมิ DE, 4.2 มม. × 15 cmcolumn) และ eluted กับเฟสเคลื่อนที่ 30% CH3OH, 10% CH3CN, 60% H2O (ปรับค่า pH 3.5 กับ H3PO4) ความเร็วของกระแส was0.8 มล min−1 ทำเครื่องมือการวัดที่ UV 254 nmฮอร์โมนพืช (ABA) ในตัวอย่างคือ quantified โดยสแตน dardization ภายนอกสวอตช์มาตรฐาน heightmeasurements สูงสุดโดยใช้การรับรองความถูกต้อง ความไวต่ำสุด 10−8g/L.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างเมล็ดพันธุ์ที่ถูกเก็บรวบรวมทุก 10 วันจาก 20 วันหลังดอกบาน (DAF) ที่โหนดกลาง (จุดเริ่มต้นของระยะเวลาการบรรจุเมล็ดพันธุ์เชิงเส้น fillingperiod) ถึง 60 DAF (สุกแก่ทางสรีรวิทยา) สำหรับการวิเคราะห์ของฮอร์โมนพืช endoge-เซ้นส์ (ABA) ในเมล็ด ตัวอย่างเมล็ดพันธุ์ถูกนำ from10 ฝัก เก็บเกี่ยวตัวอย่างเมล็ดพันธุ์ที่ถูกแช่แข็งทันทีใน Dryice และเก็บไว้ที่ประมาณ-18◦Cจนการวิเคราะห์ที่มีการวิเคราะห์ฮอร์โมนพืชภายนอก HPLC.The ได้ดำเนินการ usingthe ขั้นตอนที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้ HPLC (Hein et al, 1984;.. Zhanget อั 1999; หลิว et al., 2010) สั้น ๆ ตัวอย่างอยู่ในขั้นต้น weighedthen ประมาณ 1 กรัมทำให้เป็นเนื้อเดียวกันกับนาที Polytron โฮโมจีไน For3 ใน 10 มล 80% เมทานอลเย็น (4◦C) ที่มี 10 มิลลิกรัม / ลิตรบาท (แช่เย็นเพื่อ-80◦Cก่อนการใช้งาน) หลังจากการสกัด 4 ชั่วโมงที่4◦C, thehomogenates ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีและใส thenthe ถูก decanted ตกค้างอยู่ extractedtwice ต่อไปด้วย 10 มล 80% เมทานอลเย็นแล้ว supernatantswere รวม สารสกัดที่รวมเหล่านี้ถูกลดขั้นตอนการ theaqueous ในหลอดแก้ว salinized ภายใต้ความกดดันลดลงat30◦C สารสกัดที่รวมกันถูกนำตัวไปที่ปริมาณ 4.0 mLwith กลั่นปราศจากไอออน H2O และ sonicated แล้วและ microfiltered (1.2? มไนเตรตเซลลูโลสไมโครกรองระบบ) ตัวอย่าง wereinjected บนคอลัมน์สแตนเลสที่เต็มไปด้วย PRP-1 (10? ขนาด mparticle) และอาจมีการไล่ระดับสีตัวทำละลายเชิงเส้น 15 นาที from0.01 M NaH2PO4in เอทานอล 10% ถึง 0.01 M NaH2PO4in เอทานอล 50% (2.0 มิลลิลิตรนาที 1) . ส่วนที่มาตรฐานที่แท้จริงของ planthormones ชะจาก PRP-1 ถูกเบี่ยงเบนคอลัมน์ C18column จัดทำ-Ative (7? เมตรเส้นผ่าศูนย์กลางอนุภาค 10 มม× 15 คอลัมน์ซม.) กับวาล์วแรงดันสูง เศษส่วนถูกชะจาก C18column กับลาดเชิงเส้น 30 นาทีจาก 0.1 นกรดอะซิติก (pH2.8) 0.1 ไม่มีกรดอะซิติกในเอทานอล 50% (2.5 มิลลิลิตรนาที 1) Fractionscontaining ฮอร์โมนพืชลดลงถึง 1.0 มิลลิลิตรน้ำ ELU-กิจการภายใต้ความกดดันที่ลดลง (30◦C) สำหรับ ABA เศษส่วน wereinjected (50? L น้ำ Associates) ไปยังแอนไอออนที่แข็งแกร่ง exchangecolumn (7? เมตรเส้นผ่าศูนย์กลางของอนุภาค, Wilmington, DE, 4.2 mm × 15 cmcolumn) และชะกับเฟสเคลื่อนที่ของ CH3OH 30%, 10% CH3CN 60% H2O (ปรับให้ค่า pH 3.5 กับ H3PO4) ความเร็วของการไหล was0.8 มิลลิลิตรนาที 1 เครื่องวัดทำงานที่รังสียูวี 254 nm.Plant ฮอร์โมน (ABA) ในกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการวัดโดยภายนอก stan-dardization ในการตรวจสอบมาตรฐานโดยใช้แถบ heightmeasurements สูงสุด ความไวต่ำสุดคือ 10-8g / ลิตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างเมล็ดพันธุ์ที่เก็บรวบรวมทุกๆ 10 วัน 20 วัน หลังจากดอกบาน ) ที่โหนดกลาง ( จุดเริ่มต้นของเส้น เมล็ดพันธุ์บรรจุระยะเวลา fillingperiod ) 60 วัน ( สรีรวิทยา ) ) สำหรับการวิเคราะห์ endoge นูฮอร์โมนพืช ( ABA ) ในเมล็ด ตัวอย่างเมล็ด นำมา from10 ฝัก .การเก็บเกี่ยวเมล็ดแช่แข็งในตัวอย่างทันทีและเก็บไว้ที่บริษัท เวสเทิร์น ดรายไอซ์ประมาณ 18 ◦ C จนถึงการวิเคราะห์ด้วย HPLC ในการวิเคราะห์ฮอร์โมนในพืชมีการใช้ขั้นตอน HPLC ระบุไว้ก่อนหน้านี้ ( เห้ et al . , 1984 ; zhanget al . , 1999 ; Liu et al . , 2010 ) สั้น ๆจำนวนเริ่มแรก weighedthen ประมาณ 1 กรัมบดด้วยเครื่องปั่น polytron for3 มิน 10 ml 80 % เย็นเมทานอล ( 4 ◦ C ) ที่มี 10 มก. / ล. บาท ( chilled − 80 ◦ C ก่อนใช้ ) หลังจากการสกัด 4 H ที่ 4 ◦ C thehomogenates เป็นระดับที่ 10 ×กรัมและ 15 นาทีและนำกำลังริน .และได้ extractedtwice 10 ml 80% เมทานอลและเย็นแล้ว supernatantswere รวมกัน สารสกัดรวมเหล่านี้ลดลง พบว่า ในขั้นตอน salinized แก้วท่อภายใต้ความดันลดลง at30 ◦ C สารสกัดรวมมา ปริมาณ mlwith 4.0 กลั่นคล้ายเนื้อเยื่อประสาน H2O แล้ว sonicated และ microfiltered ( 1.2  M เซลลูโลสไนเตรตระบบกรองไมโคร ) ตัวอย่าง wereinjected บนสแตนเลส คอลัมน์บรรจุด้วย prp-1 ( 10  ขนาด mparticle ) และต้อง 15 นาที เส้นไล่ระดับสีตัวทำละลาย from0.01 M nah2po4in 10% เอทานอลเอทานอล 0.01 M nah2po4in 50% ( 2.0 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 )ส่วนที่มาตรฐานที่แท้จริงของ planthormones ตัวอย่างจากคอลัมน์ prp-1 ถูกเบี่ยงเบนไป prepar แสดงความโน้มเอียงหรืออารมณ์ c18column ( 7  M อนุภาคขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 10 มม. × 15 ซม. คอลัมน์ ) กับวาล์วแรงดันสูง เศษส่วนมีตัวอย่างจาก c18column กับ 30 นาทีเส้นไล่ระดับจาก 0.1 N กรดน้ำส้ม ( กรดอะซิติก 0.1 N ph2.8 ) 50% เอทานอล ( 2.5 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 )fractionscontaining ฮอร์โมนพืชลดลง 1.0 มิลลิลิตรของน้ำ elu ENT ภายใต้การลดความดัน ( 30 ◦ C ) สำหรับ ABA , เศษส่วน wereinjected ( 50  ลิตรน้ำ Associates ) ลงบน exchangecolumn แอนแข็งแรง ( 7  M อนุภาคเส้นผ่านศูนย์กลาง , Wilmington , DE , 4.2 มม. × 15 cmcolumn ) และตัวอย่างที่มีระยะเคลื่อนที่ของ ch3oh 30% , 10% ch3cn 60 % H2O ( ปรับพีเอช 3.5 กับ H3PO4 ) ความเร็วของการไหล was0 .8 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 การวัดเครื่องมือทำงานยูวี 254 nm . ฮอร์โมนพืช ( ABA ) ในตัวอย่างเป็น quantified โดย dardization สแตนภายนอกเพื่อรับรองมาตรฐาน heightmeasurements สวอตช์ใช้สูงสุด ความไวสุด 10 − 8 ลิตร