The immortalized keratinocyte cell

The immortalized keratinocyte cell line OKF6/hTERT-2 (OKF6), established by ectopic
expression of the telomerase catalytic subunit (hTERT) in cells from normal oral mucosal
epithelium, was obtained from Dr. James Rheinwald, Harvard Medical School.24 Vero cells
were obtained from American Type Culture Collection (Rockville, Md). Cells were plated in
6-well tissue culture dishes at 3.75 and 6.25 X 105 cells/well, respectively, in Ker-SFM
media and incubated at 37°C in a humidified incubator with 5% CO2. The following day
cells were inoculated with HSV-1 strain 17+, obtained from N. Fraser of the Wistar Institute,
Philadelphia, at a multiplicity of infection (MOI) of ≤ 0.05 and incubated at 37°C for 1 hr.
Following two rinses with phosphate buffered saline (PBS), fresh media was added and
incubation at 37°C was continued overnight. Twenty four hours post-inoculation, virus was
released by three freeze thaw cycles and virus yield was determined in duplicate by direct
plaque assay on Vero cell monolayers as we have previously described.25 In the viral
replication inhibitory assays, triplicate cultures were supplemented with blackberry extract
at the times (during adsorption, after removal of virus inoculums or throughout) and
concentrations indicated. In the virucidal assays, cell-free virus suspensions (25,000 –
50,000 plaque forming units [PFU]/ml) were incubated with blackberry extract at 37°C for 1
hr or room temperature for 15 minutes. Virucidal assays were terminated at the indicated
times by dilution of reaction mixture to non-antiviral levels of blackberry extract (1:100
culture media). Virus infectivity was determined by the direct plaque assay and is presented
as the number of remaining PFUs relative to control treated virus suspensions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บรรทัดเซลล์ immortalized keratinocyte OKF6/hTERT-2 (OKF6), ก่อตั้งขึ้น โดย ectopicนิพจน์ที่ telomerase ตัวเร่งปฏิกิริยาย่อย (hTERT) ในเซลล์จากปาก mucosal ปกติepithelium ได้รับจากดร. James Rheinwald เซลล์ Vero School.24 แพทย์ฮาร์วาร์ดได้รับมาจากอเมริกาชนิดคอลเลกชันวัฒนธรรม (ร็อควิลล์ Md) เซลล์ถูกชุบในอาหารเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อทั้ง 6 ที่ 3.75 และ 6.25 X 105 เซลล์/ดี ตามลำดับ ในโคเคอร์ SFMสื่อ และ incubated ที่ 37° C ในการบ่มเพาะวิสาหกิจ humidified กับ 5% CO2 วันต่อไปนี้เซลล์มี inoculated ด้วยต้องใช้ HSV 1 17 + รับจากเฟรเซอร์ N. สถาบัน Wistarฟิลาเดลเฟีย ที่มากมายหลายหลากของเชื้อ (อย) ของ≤ 0.05 และ incubated ที่ 37° C 1 ชมมีเพิ่มสื่อสดต่อ rinses 2 กับน้ำเกลือฟอสเฟต buffered (PBS), และยังคงบ่มที่ 37° C ค้างคืน ยี่สิบสี่ชั่วโมงหลัง inoculation ถูกไวรัสออกโดยสามตรึงรอบ thaw และไวรัสผลตอบแทนกำหนดในซ้ำ โดยตรงหินปูน assay บน monolayers เซลล์ Vero เนื่องจากเรามีก่อนหน้านี้ described.25 ในตัวไวรัสจำลองแบบลิปกลอสไข assays วัฒนธรรม triplicate ถูกเสริม ด้วยสารสกัดจากบีบีเวลา (ระหว่างการดูดซับ หลังจากการกำจัดไวรัส inoculums หรือตลอด) และความเข้มข้นในการระบุ ใน virucidal assays เซลล์ปราศจากไวรัสบริการ (25000 –50000 หินปูนขึ้นรูปหน่วย [PFU] /ml) ถูก incubated สกัดจากเคสที่ 37 ° C 1ชั่วโมงหรืออุณหภูมิห้อง 15 นาที Virucidal assays ถูกเลิกจ้างในที่ระบุครั้ง โดยเจือจางปฏิกิริยาผสมบีบีไม่ใช่ยาต้านไวรัสระดับขยาย (1: 100วัฒนธรรมสื่อ) ไวรัส infectivity กำหนด โดยวิเคราะห์หินปูนโดยตรง และนำเสนอเป็นจำนวนคงเหลือ PFUs สัมพันธ์ควบคุมรักษาไวรัสบริการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์ keratinocyte immortalized สาย OKF6 / hTERT-2 (OKF6) ที่จัดตั้งขึ้นโดยมดลูก
การแสดงออกของดีเอ็นเอ subunit เร่งปฏิกิริยา (hTERT) ในเซลล์จากเยื่อเมือกในช่องปากปกติ
เยื่อบุผิว, ที่ได้รับจากดร. เจมส์ Rheinwald ฮาร์วาร์การแพทย์ School.24 เซลล์เวโร
ได้ อเมริกันที่ได้รับจากทางวัฒนธรรมประเภทสะสม (Rockville, MD) เซลล์ที่ถูกชุบใน
6 ดีอาหารเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อที่ 3.75 และ 6.25 x 105 เซลล์ / ดีตามลำดับในเค-SFM
สื่อและการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในตู้อบความชื้นที่มี CO2 5% วันรุ่งขึ้น
เซลล์ถูกเชื้อกับความเครียด HSV-1 17+ ได้จากเอ็นเฟรเซอร์วิสตาร์ของสถาบัน
เดลเฟียที่หลายหลากของการติดเชื้อ (MOI) ของ≤ 0.05 และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชม.
ต่อมาอีกสอง rinses ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS) สื่อสดถูกบันทึกและ
บ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C ได้อย่างต่อเนื่องในชั่วข้ามคืน ยี่สิบสี่ชั่วโมงหลังการฉีดวัคซีนไวรัสที่ถูก
ปล่อยออกมาจากสามรอบแช่แข็งละลายและผลผลิตไวรัสถูกกำหนดในที่ซ้ำกันโดยโดยตรง
ทดสอบคราบจุลินทรีย์บนเวโร monolayers เซลล์ที่เรามีก่อนหน้านี้ใน described.25 ไวรัส
จำลองแบบการตรวจยับยั้งวัฒนธรรมเพิ่มขึ้นสามเท่าถูกเสริมด้วยผลไม้ชนิดหนึ่ง สารสกัด
ที่ครั้ง (ในระหว่างการดูดซับหลังจากการกำจัดของหัวเชื้อแบคทีเรียไวรัสหรือตลอด) และ
ความเข้มข้นที่ระบุ ในการตรวจ virucidal สนองไวรัสมือถือฟรี (25,000 -
50,000 แผ่นโลหะขึ้นรูปหน่วย [PFU] / ml) ถูกบ่มด้วยสารสกัดจากผลไม้ชนิดหนึ่งที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1
ชั่วโมงหรืออุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที การตรวจ virucidal ถูกยกเลิกที่ระบุ
ครั้งโดยการลดสัดส่วนการผสมปฏิกิริยาให้อยู่ในระดับที่ไม่ไวรัสของสารสกัดจากผลไม้ชนิดหนึ่ง (1: 100
สื่อวัฒนธรรม) การติดเชื้อไวรัสถูกกำหนดโดยการทดสอบแผ่นโลหะโดยตรงและจะถูกนำเสนอ
เป็นจำนวน PFUs ที่เหลือญาติที่จะควบคุมการปฏิบัติสนองไวรัส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์คีราติโนไซต์ที่ immortalized สาย okf6 / htert-2 ( okf6 ) , ก่อตั้งขึ้นโดยเป็นพิษ
การแสดงออกของเทโลเมอเรสแลมดา ( htert ) ในเซลล์เยื่อบุช่องปาก จากปกติ
บุผิว ได้มาจาก ดร. เจมส์ rheinwald แพทย์ฮาร์วาร์ด school.24 เซลล์ Vero
ได้จากประเภทคอลเลกชันวัฒนธรรมอเมริกัน ( ร็อกวิลล์ , แมรี่แลนด์ ) เซลล์มีการชุบ
6-well เนื้อเยื่อวัฒนธรรมอาหารที่ 3.75 และ 6 .25 x 105 เซลล์ / ดี ตามลำดับ ใน เคอร์ sfm
สื่อบ่มที่ 37 ° C ใน humidified ฟักไข่ด้วยคาร์บอนไดออกไซด์ 5% วันต่อไปนี้
เซลล์ปลูกเชื้อ HSV-1 กับสายพันธุ์ 17 ได้จากเอ็น เฟรเซอร์ ของของสถาบัน
ฟิลาเดลเฟียที่หลายหลากของการติดเชื้อ ( MOI ) ของ≤ 0.05 และบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ตามด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์
2 rinses น้ำเกลือ ( PBS )สื่อสดถูกเพิ่มและบ่มที่ 37 ° C
ยังคงค้างคืน การโพสต์ยี่สิบสี่ชั่วโมง , ไวรัส
ปล่อยสามแช่แข็งละลายรอบและไวรัสผลผลิตตั้งใจในการทดสอบซ้ำโดยจุลินทรีย์โดยตรงบนเวโรเซลล์ monolayers
อย่างที่เราเคย described.25 ในการยับยั้งไวรัส
ซ้ำ ) , วัฒนธรรมทำสำเนาสามฉบับถูกเสริมด้วย BlackBerry แยก
ในเวลา ( ในการดูดซับ หลังจากการกำจัดไวรัสหรือตลอด 18 ชั่วโมง )
) ระบุ ในวิธี virucidal การสังเคราะห์ไวรัส , สารแขวนลอย ( 25 , 000 – 50 , 000 แผ่นคราบจุลินทรีย์สร้างหน่วยพีเอฟยู
[ ] / มิลลิลิตรบ่มที่ 37 ° C กับ BlackBerry แยก 1
HR หรืออุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที virucidal ) ถูกยกเลิกที่พบ
ครั้ง โดยผสมเจือจางปฏิกิริยาไม่ระดับยาต้านไวรัสของ Blackberry Extract ( 100
สื่อวัฒนธรรม ) การติดเชื้อไวรัสที่ถูกกำหนดโดยจุลินทรีย์โดยตรงในเสนอ
เป็นจำนวนที่เหลือ pfus สัมพันธ์กับการควบคุมรักษาสารแขวนลอยไวรัส .