Methanol metabolism is a characteri

Methanol metabolism is a characteristic shown by relatively few yeast species (the methylotrophic yeasts); most known methylotrophic yeasts belong to the genera Pichia and Candida (Kurtzman & Fell, 1998; Barnett et al., 2000). From the differences in the partial sequences of small-subunit (18S)andlarge-subunit(26S)rDNAsequence,Yamadaetal. (1994) proposed the transfer of hat-shaped ascospore- forming, nitrate-assimilating methylotrophic yeast species formerlyclassifiedinthegenusPichia(Pichiaangusta,Pichia minuta var. minuta, P. minuta var. nonfermentans, Pichia philodendra, Pichia glucozyma and Pichia henricii) to a newly described genus, Ogataea. Thereafter, Mikata & Yamada (1995) transferred Pichia kodamae to the genus Ogataea.
Recently, Morais et al. (2004) described Ogataea falcaomo- raisii as a novel sporogenous methylotrophic yeast, on the basis of the sequences of the D1/D2 domain of the 26S rDNA. However, the circumscription of Ogataea is not generally accepted. Kurtzman & Robnett (1998) suggested that a more robust dataset is required in order to substantiate the circumscription.
Methylotrophic yeasts have attracted interest since they were first isolated for both physiological study and indus- trial applications (Levine & Cooney, 1973; Demain et al., 1998). Recently, some of them have become the principal biocatalyst for the production of useful compounds, and are an important host for the expression of genes (Sakai et al., 1996; Gellissen, 2000). Thermotolerant or thermophilic micro-organisms have certain advantages over mesophiles in industrial processes. Thermophilic yeasts are defined as yeasts with a minimal temperature for growth of 20uC, but with no maximal temperature limit for growth (Arthur &
Published online ahead of print on 3 June 2005 as DOI 10.1099/ ijs.0.63712-0.
The GenBank/EMBL/DDBJ accession number for the sequence of the D1/D2 domain of the 26S rDNA of P. thermomethanolica sp. nov. PT31T is AB200285.
63712 G 2005 IUMS Printed in Great Britain 2225
International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology (2005), 55, 2225–2229 DOI 10.1099/ijs.0.63712-0
Watson, 1976; Watson, 1987). By this definition, a yeast strain that grows below 20uC, e.g. 10uC, and up to high temperatures, such as 37–48uC, is considered to be thermotolerant (Arthur & Watson, 1976).
In the course of an investigation of thermotolerant methylotrophic yeasts in Thailand, 253 strains were isolated from 634 samples of soil and plant materials (e.g. flowers, fruits, bark and tree exudates) by a technique involving three consecutive methanol enrichments (Limtong et al., 2004). Fifty-four strains that showed good growth at 10uC as well as at 37uC were categorized as thermotolerant strains. Of these, four strains have previously been reported asrepresenting three novelspecies,Pichiasiamensis,Candida krabiensis and Candida sithepensis (Limtong et al., 2004). In this study, we describe another three of these strains (N002, N069 and PT31T) obtained from soil samples as a novel thermotolerant, methylotrophic species of the genus Pichia.
Strain N002 was isolated from soil collected in Saraburi Province, while N069 and PT31T were obtained from two soil samples in Pathalung Province. The isolation was carried out using a procedure involving three consecutive enrichments, with 1% methanol-YNB broth (0?67% Difco yeast nitrogen base and 1%, v/v, methanol), at room temperature as previously described (Limtong et al., 2004). The strains were categorized as thermotolerant methylo- trophic yeasts on the basis of their good growth at 10 and 37uC.
The strains were characterized morphologically, physio- logically and biochemically by using the standard methods described by Yarrow (1998). Assimilation of nitrogen compounds was examined on solid media with starved inocula, according to the method of Nakase & Suzuki (1986). Growth at various temperatures was determined by cultivation on YM broth (3 g yeast extract l21, 3 g malt extract l21, 5 g peptone l21, 10 g glucose l21) and YM agar (YM broth containing 20 g agar l21), using a water bath and anincubator, respectively.Ubiquinoneswereextractedfrom intact packed cells and purified according to the method described by Nakase & Suzuki (1986). The isoprenologues were identified by an HPLC system (Agilent 1100) using a Cosmosil (Waters 5C18) 4?66250 mm column and methanol/isopropanol (2:1) at 1 ml min21 as the elution system, with spectrophotometric detection (wavelength 275 nm).
The sequences of the D1/D2 domains of the 26S rDNA of the three strains were determined by the National Collec- tion of Industrial, Marine and Food Bacteria (Japan), as described previously (Limtong et al., 2004). The sequences were compared pairwise by using a BLAST homology search (DNA Data Bank of Japan, Research Organization of Information and Systems, National Institute of Genetics) and were aligned with the sequences of related species using the multiple-alignment program CLUSTAL W, version 1.81 (Thompson et al., 1997). A phylogenetic tree was constructed from the evolutionary distance data according
to the two-parameter method of Kimura (1980) and the neighbour-joining method (Saitou & Nei, 1987). Con- fidence limits for the phylogenetic tree were estimated from bootstrap analysis (1000 replicates) (Felsenstein, 1985). The sequences of the D1/D2 domains of the 26S rDNA revealed that the degree of similarity among the three strains ranged from 99?8% (one substitution in 566 nt) to 99?5% (three substitutions in 566 nt). This degree of sequence similarity implied that the three strains were conspecific.
In the phylogenetic tree based on the D1/D2 domains of 26S rDNA sequences, the three strains were in the same group and clustered with Pichia dorogensis, P. kodamae, P. minuta var. nonfermentans and P. minuta var. minuta (other methylotrophic yeasts) (Fig. 1). The closest species, in terms of pairwise sequence similarity to the three strains N002, N069 and PT31T, was P. dorogensis but with differences of 11, 13 and 13 nucleotide substitutions, respectively, in 554 nt of the D1/D2 domain of the 26S rDNA. According to Kurtzman & Robnett (1998), yeasts strains that show nucleotide substitution greater than 1% in the D1/D2 domain of the 26S rDNA are likely to repres- ent different species.
The three strains formed four helmet-/hat-shaped asco- spores in adeliquescent ascus thatmight beunconjugated or produced by conjugation between a cell and its bud or between independent cells (Fig. 2), proliferated by multi- lateral budding, lacked arthrospores and ballistospores, were negative for Diazonium blue B colour and urease reactions and had Q-7 as the major ubiquinone. These characteristics coincided well with those of the genus Pichia. The strains also shared the same standard taxo- nomic characteristics, as shown in Table 1. We therefore conclude that the three strains represent a single novel species of Pichia. The name Pichia thermomethanolica sp. nov. is proposed for these strains.
In practice, P. thermomethanolica can be distinguished from P. dorogensis, the closest species in the phylogenetic tree, by using a number of phenotypic characteristics, as shown in Table 1.
Latin diagnosis of Pichia thermomethanolica Limtong, Srisuk, Yongmanitchai, Yurimoto, Nakase et Kato sp. nov. In agaro YM post dies 3–5 ad 25uC cellulae spheroideae aut ovoideae (0?8–4?261?7–5?0 mm), singulae, aut binae, per germinationem multipolarem reproducentes. Cultura albida, glabra, nitida, butyrosa, margine glabra. Pellicula non formatur. Mycelium nec pseudomycelium non formantur. Ascosporae galeiformes aut pileiformes,4in ascum. Glucosum fermentatur at non galactosum, maltosum, sucrosum, lacto- sum nec raffinosum. Glucosum, L-sorbosum, D-xylosum, D-ribosum, D-arabinosum, L-rhamnosum, sucrosum, mal- tosum, trehalosum, a-methyl-D-glucosidum, cellobiosum, salicinum, melezitosum, glycerolum, erythritolum, ribitolum, D-glucitolum, D-mannitolum, glucono-d-lactonum, acidum

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เผาผลาญเมทานอลนั้นเป็นลักษณะที่แสดงสายพันธุ์ยีสต์ค่อนข้างน้อย (methylotrophic yeasts); yeasts methylotrophic รู้จักกันส่วนใหญ่อยู่ในสกุล Candida และ Pichia (Kurtzman &ตก 1998 บาร์เนตและ al., 2000) จากความแตกต่างในลำดับบางส่วนของเล็กย่อย (18S) andlarge-ย่อย (26S) rDNAsequence, Yamadaetal (1994) เสนอการโอนรูปหมวก ascospore-ขึ้นรูป ไนเตรต assimilating methylotrophic ยีสต์สายพันธุ์ formerlyclassifiedinthegenusPichia (Pichiaangusta, Pichia minuta เพียง minuta, P. minuta เพียง nonfermentans, Pichia philodendra, Pichia glucozyma และ Pichia henricii) เพื่อเป็นพืชสกุลใหม่อธิบาย Ogataea หลังจากนั้น Mikata &ยามาดะ (1995) โอนย้าย Pichia kodamae กับพืชสกุล Ogataea
เพิ่ง Morais และ al. (2004) อธิบาย Ogataea falcaomo-raisii เป็นยีสต์ methylotrophic นวนิยาย sporogenous ตามลำดับของโดง 1/D2 ของ 26S rDNA อย่างไรก็ตาม circumscription ของ Ogataea ไม่โดยทั่วไปยอมรับ Kurtzman & Robnett (1998) แนะนำว่า ชุดข้อมูลมีประสิทธิภาพมากขึ้นเป็นการ substantiate ที่ circumscription.
Methylotrophic yeasts ได้ดึงดูดความสนใจตั้งแต่พวก first ที่แยกต่างหากสำหรับศึกษาสรีรวิทยาและเอยูรเวทดลองงาน (Levine & Cooney, 1973 Demain et al., 1998) ล่าสุด บางส่วนของพวกเขาได้กลายเป็น biocatalyst หลักสำหรับการผลิตของสารประกอบที่มีประโยชน์ และเป็นโฮสต์สำคัญสำหรับนิพจน์ของยีน (ซาไก et al., 1996 Gellissen, 2000) Thermotolerant หรือไมโคร thermophilic-สิ่งมีชีวิตมีข้อดีบางช่วง mesophiles ในกระบวนการอุตสาหกรรม Thermophilic yeasts มี defined yeasts มีอุณหภูมิต่ำสุดสำหรับการเจริญเติบโตของ 20uC แต่ไม่จำกัดอุณหภูมิสูงสุดสำหรับการเจริญเติบโต (อาร์เธอร์&
เผยแพร่ออนไลน์ก่อนพิมพ์วันที่ 3 2548 มิถุนายนเป็นดอย 10.1099 / ijs.0.63712-0.
GenBank/EMBL/DDBJ เลขทะเบียนสำหรับลำดับของโดง 1/D2 ของ rDNA 26S ของ P. thermomethanolica sp. nov PT31T เป็น AB200285.
63712 พิมพ์ IUMS 2005 G ในสหราชอาณาจักร 2225 วิโต้ครู
นานาสมุดรายวันของระบบและวิวัฒนาการจุลชีววิทยา (2005), 55 – 2229 2225 วิโต้ครูดอย 10.1099/ijs.0.63712-0
Watson, 1976 วัตสัน 1987) โดย definition นี้ ต้องใช้ยีสต์ที่ขึ้นด้านล่าง 20uC เช่น 10uC และจนถึงอุณหภูมิสูง เช่น 37 – 48uC ถือเป็น thermotolerant (อาร์เธอร์& Watson, 1976) .
ในหลักสูตรการสอบสวน yeasts methylotrophic thermotolerant ในประเทศไทย 253 สายพันธุ์แยกต่างหากจากตัวอย่างดินและพืชวัสดุ (เช่น flowers ผลไม้ เปลือก และต้นไม้ exudates) 634 โดยเทคนิคที่เกี่ยวข้องกับเมทานอลติดกันสาม enrichments (ทอง et al, 2004) ห้าสิบสี่สายพันธุ์ที่พบเจริญเติบโตดีใน 10uC เป็นที่ 37uC ถูกจัดประเภทเป็นสายพันธุ์ thermotolerant เหล่านี้ สี่สายพันธุ์ก่อนหน้านี้ได้รายงาน asrepresenting 3 novelspecies, Pichiasiamensis โรค krabiensis และโรค sithepensis (ทองร้อยเอ็ด al., 2004) ในการศึกษานี้ เราอธิบายอีก 3 สายพันธุ์เหล่านี้ (N002 N069 และ PT31T) ได้จากตัวอย่างดินเป็น thermotolerant นวนิยาย methylotrophic พันธุ์สกุล Pichia.
N002 ต้องใช้ถูกแยกจากดินที่รวบรวมในจังหวัดสระบุรี ขณะ N069 และ PT31T ที่ได้จากดินตัวอย่างที่สองใน Pathalung แยกที่ได้รับการดำเนินการใช้กระบวนงานที่เกี่ยวข้องกับสาม enrichments ติดต่อกัน กับ 1% เมทานอล-YNB ซุป (067 Difco ยีสต์ไนโตรเจนพื้นฐาน และ 1%, v/v เมทานอล), อุณหภูมิห้องที่เคย อธิบายไว้ (ทองร้อยเอ็ด al., 2004) สายพันธุ์ถูกจัดประเภทเป็น thermotolerant methylo - trophic yeasts ตามการเจริญเติบโตดีที่ 10 และ 37uC
สายพันธุ์มีลักษณะ morphologically, physio - ตรรกะ และ biochemically โดยใช้วิธีมาตรฐานโดย Yarrow (1998) ผสมกลมกลืนของสารประกอบไนโตรเจนถูกสื่อแข็งด้วย starved inocula ตรวจสอบตามวิธีการของ Nakase & Suzuki (1986) เจริญเติบโตที่อุณหภูมิต่าง ๆ ที่ถูกกำหนด โดยปลูกบนซุป YM (l21 สารสกัดยีสต์ 3 g, 3 g มอลต์สกัด l21, l21 peptone 5 กรัม l21 กลูโคส 10 กรัม) และ YM agar (YM ซุปมี 20 กรัม agar l21), ใช้อาบน้ำและ anincubator ตามลำดับUbiquinoneswereextractedfrom เหมือนเดิมบรรจุเซลล์และ purified ตามวิธีการอธิบายไว้ โดย Nakase & Suzuki (1986) Isoprenologues ถูก identified โดยมีระบบ HPLC (Agilent 1100) โดยใช้ Cosmosil (น้ำ 5C 18) 4 ? คอลัมน์ 66250 มม.และเมทานอ ล/isopropanol (2:1) ที่ min21 1 มล. elution ระบบ พร้อมตรวจ spectrophotometric (nm ความยาวคลื่น 275) .
ลำดับของโดง 1/D2 ของ rDNA 26S ของสายพันธุ์สามถูกกำหนด โดยชาติ Collec - สเตรชันของอุตสาหกรรม มารีน และ แบคทีเรียในอาหาร (ญี่ปุ่น), อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (ทองร้อยเอ็ด al., 2004) มีการเปรียบเทียบลำดับที่ pairwise โดยค้นหา homology ระเบิด (DNA ข้อมูลธนาคารของญี่ปุ่น องค์กร ข้อมูลวิจัย และ ระบบ สถาบันพันธุศาสตร์แห่งชาติ) และได้สอดคล้องกับลำดับของสปีชีส์ที่เกี่ยวข้องโดยใช้โปรแกรมหลายตำแหน่ง W CLUSTAL รุ่น 1.81 (ทอมป์สันและ al., 1997) ต้นไม้ phylogenetic ถูกสร้างจากระยะวิวัฒนาการข้อมูลตาม
วิธีสองพารามิเตอร์ของคิมุระโย (1980) และวิธีการรวมเพื่อนบ้าน (Saitou & Nei, 1987) คอน fidence จำกัดสำหรับทรี phylogenetic ถูกประเมินจากการวิเคราะห์เริ่มต้นระบบ (1000 เหมือนกับ) (Felsenstein, 1985) ลำดับของโดง 1/D2 ของ 26S rDNA เปิดเผยว่า ระดับของความคล้ายคลึงกันระหว่างสายพันธุ์สามอยู่ในช่วงจาก 99 ? 8% (แทนหนึ่งใน 566 nt) ไป 99 ? 5% (แทนสามใน 566 nt) ระดับของความคล้ายคลึงกันของลำดับโดยนัยว่า มีสายพันธุ์ที่สาม conspecific.
ใน phylogenetic ตามโดง 1/D2 26S rDNA ลำดับ สายพันธุ์สามอยู่ในกลุ่มเดียวกัน และจับกลุ่ม Pichia dorogensis, P. kodamae, P. minuta เพียง nonfermentans และ minuta เพียง P. minuta (yeasts อื่น ๆ methylotrophic) (Fig. 1) สายพันธุ์ใกล้เคียงที่สุด ในลำดับแพร์ไวส์คล้ายกับสายพันธุ์ 3 N002, N069 และ PT31T มี P. dorogensis แต่ มีความแตกต่างของ 11, 13 และนิวคลีโอไทด์ที่ 13 แทน ตามลำดับ ใน 554 nt โดเมนง 1/D2 ของ 26S rDNA ตาม Kurtzman & Robnett (1998), yeasts สายพันธุ์ที่แสดงแทนนิวคลีโอไทด์มากกว่า 1% ในโดง 1/D2 ของ 26S rDNA มักจะ repres เอนท์ต่างสปีชีส์กัน
สายพันธุ์สามเกิดขึ้นหมวกสี่- / รูปหมวก asco เพาะเฟิร์นใน adeliquescent ascus thatmight beunconjugated ผลิต โดย conjugation ระหว่างเซลล์และของดอกตูม หรือระหว่างเซลล์อิสระ (Fig. 2), proliferated โดยโตด้านข้างหลาย ขาด arthrospores และ ballistospores มีค่าลบสำหรับปฏิกิริยาสีและยูบลู Diazonium B และมี Q-7 เป็น ubiquinone หลัก ลักษณะเหล่านี้ร่วมกับพืชสกุล Pichia ดี สายพันธุ์ยังร่วมกันลักษณะเหมือนกันมาตรฐาน taxo - nomic ดังที่แสดงในตารางที่ 1 เราจึงสรุปว่า สายพันธุ์ที่สามหมายถึงนวนิยายชนิดเดียวของ Pichia ชื่อ Pichia thermomethanolica sp. nov เสนอสำหรับสายพันธุ์นี้ได้
ในทางปฏิบัติ P. thermomethanolica สามารถแตกต่างไปจาก P. dorogensis สายพันธุ์ใกล้เคียงที่สุดใน phylogenetic โดยลักษณะของไทป์ ดังที่แสดงในตารางที่ 1.
วินิจฉัยติ Pichia thermomethanolica ทอง สุข มานิตชัย Yurimoto, Nakase ร้อยเอ็ดนายกาโต sp. nov ใน agaro YM ลงตาย 3-5 โฆษณา 25uC cellulae spheroideae aut ovoideae (0 ? 8 – 4 ? 261 ? 7 – 5 ? 0 mm), singulae, binae aut ต่อ germinationem multipolarem reproducentes Cultura albida เครือขาว nitida, butyrosa, margine เครือขาว Pellicula ไม่ใช่ formatur Mycelium เน็ค pseudomycelium ไม่ formantur Ascosporae galeiformes aut pileiformes, ascum ใน 4 Fermentatur Glucosum ที่มี galactosum, maltosum, sucrosum ผลรวม lacto nec raffinosum Glucosum, L sorbosum, D xylosum, D-ribosum, D arabinosum, L-rhamnosum, sucrosum อัป tosum, trehalosum, a-methyl-D-glucosidum, cellobiosum, salicinum, melezitosum, glycerolum, erythritolum, ribitolum, D glucitolum, D-mannitolum, glucono-d-lactonum, acidum

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเผาผลาญเมทานอลเป็นลักษณะที่แสดงถึงชนิดของยีสต์ค่อนข้างน้อย ( ยีสต์ methylotrophic ) ; ที่รู้จักกันมากที่สุด methylotrophic ยีสต์เป็นของสกุล pichia และ Candida ( เคิร์ทแมน&ล้ม , 1998 ; Barnett et al . , 2000 ) จากความแตกต่างในลำดับบางส่วนของใบเล็ก ( พบ 1 ) และขนาดใหญ่ ( 26 ) rdnasequence yamadaetal , .( 1994 ) ได้เสนอการสร้างไนเตรท - หมวกรูป ascospore , ตู้กระจก methylotrophic ยีสต์สายพันธุ์ formerlyclassi จึง edinthegenuspichia ( pichiaangusta pichia พันธุ์จิ๋ว , จิ๋ว , จิ๋ว , nonfermentans pichia philodendra ) , , และ pichia glucozyma pichia henricii ) เพื่ออธิบาย ogataea สกุลใหม่ , . หลังจากนั้น มิกาตะ&ยามาดะ ( 1995 ) โอน pichia kodamae ในจีนัส ogataea .
เพิ่ง Morais et al . ( 2004 ) อธิบาย ogataea falcaomo - raisii เป็นนวนิยาย sporogenous methylotrophic ยีสต์ บนพื้นฐานของลำดับของ D1 / D2 โดเมนของ 26 ด้วย . อย่างไรก็ตาม circumscription ของ ogataea ไม่ได้โดยทั่วไปยอมรับ เคิร์ทแมน& robnett ( 2541 ) พบว่า ชุดข้อมูลที่แข็งแกร่งมากขึ้นเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อที่จะพิสูจน์ circumscription .
methylotrophic ยีสต์ได้ดึงดูดความสนใจตั้งแต่พวกเขาจึงตัดสินใจเดินทางไปแยกทั้งการศึกษาทางสรีรวิทยาและสินธุ - โปรแกรมทดลอง ( Levine & cooney 1973 ; วันพรุ่งนี้ et al . , 1998 ) เมื่อเร็วๆนี้ บางส่วนของพวกเขาได้กลายเป็นตัวเร่งปฏิกิริยาชีวภาพหลักสำหรับการผลิตของสารประกอบที่เป็นประโยชน์ และเป็นโฮสต์ที่สำคัญในการแสดงออกของยีน ( Sakai et al . , 1996 ; gellissen , 2000 )สารหรือสิ่งมีชีวิตขนาดเล็ก และมีข้อได้เปรียบเหนือกว่าเมโซไฟล์ในกระบวนการอุตสาหกรรม และยีสต์ de จึงเน็ดเป็นยีสต์ด้วยอุณหภูมิที่น้อยที่สุดสำหรับการเจริญเติบโตของ 20uc แต่ไม่มีขีดจำกัดอุณหภูมิสูงสุดสำหรับการเจริญเติบโต ( อาเธอร์&
เผยแพร่ออนไลน์ก่อนพิมพ์เมื่อวันที่ 3 มิถุนายน 2548 เป็นดอย 10.1099/ ijs .
0.63712-0 .ขนาด / จำนวน / ddbj สัตวภาคยานุวัติสำหรับการเรียงลำดับของ D1 / D2 โดเมนของ 26 ด้วยหน้า thermomethanolica sp . . pt31t เป็น ab200285 .
63712 g ปี 2005 iums พิมพ์ในอังกฤษ 2225
วารสารระบบและวิวัฒนาการจุลชีววิทยา ( 2005 ) , 55 , 2225 – 2229 ดอย 10.1099 / ijs 0.63712-0
. วัตสัน , 1976 ; วัตสัน , 1987 ) โดย เดอ จึง nition , ยีสต์สายพันธุ์ที่เติบโต 20uc ด้านล่าง เช่น10uc และอุณหภูมิสูง เช่น 37 – 48uc ถือว่าเป็นสาร ( อาเธอร์&วัตสัน , 1976 ) .
ในการสืบสวนของ ทน methylotrophic ยีสต์สายพันธุ์ที่แยกได้จากประเทศไทย , 253 และตัวอย่างดินและพืช ( เช่นfl ทาวเวอร์ ผลไม้ ต้นไม้ เปลือกไม้ และสารที่หลั่ง ) โดยเทคนิคที่เกี่ยวข้องกับสาม enrichments เมทานอลติดต่อกัน ( limtong et al .2004 ) ห้าสิบสี่สายพันธุ์ที่พบการเติบโตที่ดีที่ 10uc เช่นเดียวกับที่ 37uc แบ่งเป็นสายพันธุ์ที่ทน . ของเหล่านี้สี่สายพันธุ์ก่อนหน้านี้ได้รับรายงาน asrepresenting สาม novelspecies pichiasiamensis krabiensis Candida Candida , และ sithepensis ( limtong et al . , 2004 ) ในการศึกษานี้เราอธิบายอีก 3 สายพันธุ์ ( n002 เหล่านี้ ,และ n069 pt31t ) ที่ได้จากตัวอย่างดินเป็นนวนิยาย ทน methylotrophic , ชนิดของพืช pichia .
n002 สายพันธุ์ที่แยกได้จากดินในจังหวัดสระบุรี และในขณะที่ n069 pt31t ได้จากสองตัวอย่างดินใน pathalung ) แยกเป็น โดยใช้กระบวนการที่เกี่ยวข้องกับสาม enrichments ติดต่อกันกับ 1 % เมทานอล ynb broth ( 0 ?67 % difco ยีสต์ไนโตรเจนเบสและ 1 % v / v อล ) ที่อุณหภูมิห้องตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( limtong et al . , 2004 ) สายพันธุ์จำแนกเป็นสาร methylo - โภชนาการยีสต์บนพื้นฐานของการเจริญเติบโตที่ดีของพวกเขาที่ 10 และ 37uc .
สายพันธุ์มีลักษณะจากธรรมชาติ , ตรรกะ และ biochemically โดยใช้วิธีการมาตรฐานที่อธิบายโดยโรว์ ( 1998 )การผสมผสานของสารประกอบไนโตรเจนที่ถูกตรวจสอบในสื่อที่เป็นของแข็งที่มี inocula อดอยาก ตามวิธีการของ nakase &ซูซูกิ ( 1986 ) การเจริญเติบโตที่อุณหภูมิต่าง ๆ ถูกกำหนด โดยการปลูกในน้ำซุป ) ( 3 กรัมยีสต์สกัด l21 malt extract l21 3 กรัม 5 กรัม ตามลำดับ l21 10 กรัมกลูโคส l21 ) และวุ้น ( YM ) อาหารที่มี 20 กรัมวุ้น l21 ) ใช้อาบน้ำและ anincubator ตามลำดับubiquinoneswereextractedfrom เหมือนเดิมบรรจุเซลล์และปุริมจึงตามวิธีการที่อธิบายโดย nakase &ซูซูกิ ( 1986 ) การ isoprenologues เป็น identi จึงเอ็ด โดยมี 2 ระบบ ( Agilent 1100 ) โดยใช้ cosmosil ( น้ำ 5c18 ) 4 คอลัมน์ 66250 มม. และเมทานอล / ไอโซโพรพานอล ( 2 : 1 ) ที่ min21 1 มิลลิลิตร เป็นระบบที่ใช้กับการตรวจสอบ ( ความยาวคลื่น )
275 nm )ลำดับของ D1 / D2 โดเมนของ rDNA 26 ของ 3 สายพันธุ์ถูกกำหนดโดยการรวบรวมชาติ - tion ของแบคทีเรียทางทะเลและอุตสาหกรรมอาหาร ( ญี่ปุ่น ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( limtong et al . , 2004 ) ลำดับการเปรียบเทียบคู่โดยการใช้ระเบิดที่มีการค้นหา ( องค์กรวิจัยดีเอ็นเอข้อมูลธนาคารของญี่ปุ่น , ข้อมูลและระบบพันธุศาสตร์สถาบัน ) และสอดคล้องกับลำดับของสายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับการจัดโปรแกรมหลาย clustal W รุ่น 1.81 ( Thompson et al . , 1997 ) phylogenetic ต้นไม้ถูกสร้างขึ้นจากข้อมูลวิวัฒนาการตามระยะทาง
ถึงสองพารามิเตอร์วิธี คิมูระ ( 1980 ) และเพื่อนบ้านร่วมวิธี ( ไซโตะ&เนย , 1987 )คอน - จึง dence ข้อจำกัดในการวิเคราะห์ phylogenetic ต้นไม้ประมาณได้จากบูท ( 1000 ซ้ำ ) ( felsenstein , 1985 ) ลำดับของ D1 / D2 โดเมนของ 26 rDNA พบว่าระดับของความคล้ายคลึงกันระหว่าง 3 สายพันธุ์ ตั้งแต่ 99 ? 8% ( ทดแทนใน 566 NT ) 99 ? 5% ( สามแทนใน 566 NT )ระดับความเหมือนลำดับโดย 3 สายพันธุ์ จึง conspeci C .
ใน phylogenetic ต้นไม้ตาม D1 / D2 โดเมน 26 ชนิด , 3 สายพันธุ์ในกลุ่มเดียวกัน และจับกลุ่มกับ pichia dorogensis , หน้า kodamae , หน้าจิ๋วพันธุ์ nonfermentans . จิ๋วพันธุ์จิ๋ว ( ยีสต์ methylotrophic อื่นๆ ) ( ภาพประกอบ 1 ) สายพันธุ์ที่ใกล้ในแง่ของคู่ลำดับเหมือน 3 สายพันธุ์ n002 n069 pt31t , และ , หน้า dorogensis แต่มีความแตกต่างของ 11 , 13 และ 13 แทนเบส ตามลำดับ ใน 554 NT ของ D1 / D2 โดเมนของ 26 ด้วย . ตามที่ เคิร์ทแมน& robnett ( 1998 )ยีสต์สายพันธุ์ที่แสดงการแทนที่นิวคลีโอไทด์มากกว่า 1 % ใน D1 / D2 โดเมนของ 26 ชนิดมีแนวโน้มที่จะ repres - ENT สายพันธุ์ที่แตกต่างกัน .
3 สายพันธุ์ รูปสี่หมวก - หมวกรูป asco - สปอร์ใน adeliquescent ascus thatmight beunconjugated หรือผลิตโดยการรวมกันระหว่างเซลล์และระหว่างเซลล์อิสระ ( รูปตา หรือ 2 ) พัฒนาโดยหลายรุ่น - ด้านข้าง ,และขาด arthrospores ballistospores เป็นลบสำหรับไดอะโซเนียมสีฟ้า B สีและที่มีปฏิกิริยาและมี q-7 เป็นบิควินโนนใหญ่ ลักษณะเหล่านี้สอดคล้องกับของสกุล pichia . สายพันธุ์ที่ยังใช้มาตรฐานเดียวกัน taxo - ลักษณะ nomic ดังแสดงในตารางที่ 1 เราจึงสรุปได้ว่า สายพันธุ์ทั้งสามเป็นตัวแทนของนวนิยายชนิดเดียวของ pichia .ชื่อ pichia thermomethanolica sp . 3 สายพันธุ์เหล่านี้เสนอ .
ในการปฏิบัติหน้า thermomethanolica แตกต่างจากหน้า dorogensis สปีชีส์ใกล้ใน phylogenetic ต้นไม้ โดยใช้หมายเลขของลักษณะฟีโนไทป์ ดังแสดงในตารางที่ 1 .
วินิจฉัยภาษาละตินของ pichia thermomethanolica limtong ศรีสุข yongmanitchai yurimoto , , , , nakase และ คาโต้ sp .ในการโพสต์ agaro ตาย 3 – 5 โฆษณา 25uc เซลลูเล spheroideae หรือ ovoideae ( 0 ? 8 - 4 261 ? 7 - 5 0 มม. ) , singulae , หรือ binae ต่อ germinationem multipolarem reproducentes . cultura albida glabra พงษ์ , , , butyrosa มาร์จีน glabra . pellicula ไม่ formatur . โดย NEC pseudomycelium ไม่ formantur . ascosporae galeiformes หรือ pileiformes 4in , ascum . glucosum fermentatur ที่ไม่ galactosum maltosum sucrosum , , ,แลคโต - ผลรวม NEC ราฟจึง nosum . glucosum l-sorbosum d-xylosum d-ribosum , , , , l-rhamnosum d-arabinosum , , sucrosum มัล - tosum trehalosum a-methyl-d-glucosidum cellobiosum , , , , melezitosum salicinum , , glycerolum erythritolum ribitolum d-glucitolum , , , , glucono-d-lactonum d-mannitolum ทางช่องท้อง ( i.p . )

, ,