With the prevalence of drug resista

With the prevalence of drug resistance in bacteria, the need for
new antibiotics and new antibiotic targets is urgent and growing.
Bacterial Peptidyl-tRNA hydrolase (Pth1) is emerging as a promising
antibiotic target [1e4]. In bacteria, Pth1 performs the essential
function of hydrolyzing peptidyl-tRNA generated from premature
termination of protein biosynthesis and the expression of minigenes
or short ORFs [5e7]. Accumulation of peptidyl-tRNA is lethal
[8]. In the absence of Pth function, sequestration of tRNA as
peptidyl-tRNA leads to tRNA starvation and inhibition of protein
biosynthesis [9,10].
Though Pth activity is ubiquitous in all domains of life, most
bacteria contain only one highly conserved Pth1 enzyme. Select
strains have acquired a structurally unrelated Pth2 enzyme
[11], however functional redundancy has not been established.
The bacterial system differs greatly from the multicomponent
eukaryotic Pth systems. A Pth1 ortholog is present in eukaryotes,
however it is not essential. Similarly, the other well-characterized
Pth in eukaryotes, Pth2, is also not essential. Knockout of Pth1,
Pth2, or even both simultaneously do not affect viability in yeast
[12]. Thus, essential Pth1 activity in bacteria is only part of a more
complex and functionally redundant system in eukaryotes. While
contributing to the attractiveness of Pth1 as a new target for antibiotic
development, this also demonstrates the lack of understanding
regarding the eukaryotic Pth system.
Better understanding of the multi-component eukaryotic Pth
system is warranted to further validate and advance Pth1 as an
antibiotic target. From amino acid sequence alignment, PTRHD1,
or C2orf79, was identified as a human peptidyl-tRNA hydrolase.
Herein, we report the cloning, recombinant expression in bacteria,
purification, buffer solubility optimization, and nucleotide
binding of human PTRHD1. Expressed under control of a T7
promoter, over 60 mg of purified protein were produced per
liter of minimal media. PTRHD1 was purified to greater than 90%
in one chromatography step as determined from Coomassie
stained SDS-PAGE. To extend the usable lifetime, storage buffer
conditions that optimized long-term solubility were also
determined.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีความชุกของการดื้อยาในเชื้อแบคทีเรีย ความต้องการยาปฏิชีวนะใหม่และเป้าหมายยาปฏิชีวนะใหม่เป็นเร่งด่วน และเติบโตแบคทีเรียป้องกันสลาย Peptidyl hydrolase (Pth1) เกิดขึ้นตามได้สัญญาเป้าหมายยาปฏิชีวนะ [1e4] ในแบคทีเรีย Pth1 ทำสำคัญฟังก์ชันของ hydrolyzing peptidyl-ป้องกันสลายจากก่อนวัยอันควรการสิ้นสุดของการสังเคราะห์โปรตีนและการแสดงออกของ minigenesหรือสั้น ORFs [5e7] สะสมของ peptidyl ป้องกันสลายคือตาย[8] ขาด Pth ฟังก์ชัน อายัดของป้องกันสลายเป็นป้องกันสลาย peptidyl สู่ป้องกันสลายความอดอยากและการยับยั้งโปรตีนสังเคราะห์ [9,10]แม้ว่า กิจกรรม Pth จะแพร่หลายในโดเมนทั้งหมดของชีวิต สุดแบคทีเรียประกอบด้วยเอนไซม์ Pth1 สูงภัตเดียว เลือกสายพันธุ์ที่ได้รับเอนไซม์ Pth2 เกี่ยวข้องกับโครงสร้าง[11], อย่างไรก็ตาม สำรองทำงานได้ไม่ถูกทำระบบแบคทีเรียแตกต่างอย่างมากจาก multicomponent ที่ระบบ eukaryotic Pth Ortholog Pth1 มีอยู่ใน eukaryotesอย่างไรก็ตาม มันไม่จำเป็น ในทำนองเดียวกัน ที่อื่น ๆ ดีลักษณะPth ใน eukaryotes, Pth2 ยังไม่จำเป็น ของ Pth1Pth2 หรือทั้งสองอย่างพร้อมกันไม่มีผลต่อชีวิตในยีสต์[12] . ดังนั้น จำเป็น Pth1 กิจกรรมในแบคทีเรียเป็นเฉพาะส่วนที่ระบบที่ซับซ้อน และซ้ำซ้อนหน้าที่ใน eukaryotes ในขณะที่เอื้อต่อการน่า Pth1 เป็นเป้าหมายใหม่สำหรับยาปฏิชีวนะพัฒนา นี้ยังแสดงให้เห็นถึงการขาดความเข้าใจเกี่ยวกับระบบ Pth eukaryoticเข้าใจของ Pth ใน eukaryotic หลายส่วนประกอบระบบการรับประกันการตรวจสอบเพิ่มเติม และล่วงหน้า Pth1 เป็นการเป้าหมายยาปฏิชีวนะ จากการจัดตำแหน่งลำดับของกรดอะมิโน PTRHD1หรือ C2orf79 ถูกระบุเป็น hydrolase เป็นมนุษย์ peptidyl ป้องกันสลายในที่นี้ เรารายงานการโคลน นิพจน์ recombinant ในแบคทีเรียทำให้บริสุทธิ์ การเพิ่มประสิทธิภาพการละลายบัฟเฟอร์ และนิวคลีโอไทด์ผูกพันของมนุษย์ PTRHD1 แสดงภายใต้การควบคุมของการ T7โปรโมเตอร์ ผลิตโปรตีนบริสุทธิ์กว่า 60 มิลลิกรัมต่อลิตรของสื่อน้อยที่สุด PTRHD1 บริสุทธิ์ไปมากกว่า 90%ในขั้นตอนเดียว chromatography พิจารณาจาก Coomassieย้อม SDS-หน้า เพื่อยืดอายุการใช้งานสามารถใช้งานได้ เก็บบัฟเฟอร์เงื่อนไขที่เหมาะสมระยะยาวละลายก็กำหนด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่มีความชุกของการดื้อยาในเชื้อแบคทีเรียที่จำเป็นในการ
ใช้ยาปฏิชีวนะใหม่และเป้าหมายใหม่ของยาปฏิชีวนะเป็นเรื่องเร่งด่วนและการเจริญเติบโต.
แบคทีเรีย peptidyl-tRNA hydrolase (Pth1) ที่เกิดขึ้นเป็นแนวโน้ม
เป้าหมายยาปฏิชีวนะ [1e4] ในแบคทีเรีย Pth1 ดำเนินการที่สำคัญ
การทำงานของไฮโดรไลซ์ peptidyl-tRNA ที่เกิดจากการคลอดก่อนกำหนด
สิ้นสุดของการสังเคราะห์โปรตีนและการแสดงออกของ minigenes
หรือ ORFs สั้น [5e7] การสะสมของ peptidyl-tRNA เป็นตาย
[8] ในกรณีที่ไม่มีฟังก์ชั่น Pth ที่อายัดของ tRNA เป็น
peptidyl-tRNA นำไปสู่การ tRNA ความอดอยากและการยับยั้งของโปรตีน
สังเคราะห์ [9,10].
แม้ว่ากิจกรรม Pth แพร่หลายในโดเมนทั้งหมดของชีวิตส่วนใหญ่
เชื้อแบคทีเรียที่มีเพียงหนึ่งเอนไซม์ Pth1 ป่าสงวน เลือก
สายพันธุ์ที่ได้มา Pth2 เอนไซม์ที่ไม่เกี่ยวข้องกับการก่อสร้าง
[11] แต่ความซ้ำซ้อนการทำงานยังไม่ได้รับการจัดตั้งขึ้น.
ระบบแบคทีเรียแตกต่างอย่างมากจากหลายองค์ประกอบ
ระบบ Pth eukaryotic ortholog Pth1 มีอยู่ในยูคาริโอ,
แต่มันไม่จำเป็น ในทำนองเดียวกันที่อื่น ๆ ที่มีลักษณะดี
Pth ในยูคาริโอ, Pth2 ยังไม่จำเป็น สิ่งที่น่าพิศวงของ Pth1,
Pth2 หรือแม้กระทั่งทั้งสองพร้อมกันไม่ได้ส่งผลกระทบต่อการมีชีวิตในยีสต์
[12] ดังนั้นกิจกรรม Pth1 สำคัญในเชื้อแบคทีเรียที่เป็นเพียงส่วนหนึ่งของการขึ้น
ระบบที่ซับซ้อนและซ้ำซ้อนหน้าที่ในยูคาริโอ ในขณะที่
เอื้อต่อความน่าสนใจของ Pth1 เป็นเป้าหมายใหม่สำหรับยาปฏิชีวนะ
พัฒนานี้ยังแสดงให้เห็นถึงการขาดความเข้าใจ
เกี่ยวกับระบบ Pth eukaryotic.
ความเข้าใจที่ดีขึ้นของ multi-component Pth eukaryotic
ระบบการรับประกันเพื่อตรวจสอบและล่วงหน้า Pth1 เป็น
เป้าหมายของยาปฏิชีวนะ . จากการจัดตำแหน่งกรดอะมิโนลำดับ PTRHD1,
หรือ C2orf79 ถูกระบุว่าเป็นมนุษย์ peptidyl-tRNA hydrolase.
ที่นี้เรารายงานการโคลนแสดงออก recombinant ในแบคทีเรีย
บริสุทธิ์, การเพิ่มประสิทธิภาพการละลายบัฟเฟอร์และเบื่อหน่าย
ที่มีผลผูกพันของมนุษย์ PTRHD1 แสดงภายใต้การควบคุมของ T7
ก่อการกว่า 60 mg ของโปรตีนบริสุทธิ์ที่ผลิตต่อ
ลิตรของสื่อน้อยที่สุด PTRHD1 บริสุทธิ์ไปมากกว่า 90%
ในขั้นตอนที่โครมาโตหนึ่งตามที่กำหนดจาก Coomassie
เปื้อน SDS-PAGE ที่จะขยายอายุการใช้งานสามารถใช้งานได้การจัดเก็บบัฟเฟอร์
เงื่อนไขที่ดีที่สุดที่สามารถในการละลายในระยะยาวนอกจากนี้ยัง
กำหนด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่มีความชุกของการดื้อยาของแบคทีเรีย ความต้องการยาปฏิชีวนะยาปฏิชีวนะใหม่และเป้าหมายใหม่ ด่วน และการเติบโตแบคทีเรีย peptidyl ทีอาร์เอ็นเอไฮโดรเลส ( pth1 ) เป็นสัญญาใหม่ยาปฏิชีวนะกลุ่มเป้าหมาย [ 1e4 ] ในแบคทีเรีย pth1 การจำเป็นฟังก์ชันที่สร้างขึ้นจากการย่อย peptidyl ทีอาร์เอ็นเอ ก่อนกำหนดการสิ้นสุดของการสังเคราะห์โปรตีน และการแสดงออก minigenesหรือสั้น orfs [ 5e7 ] การสะสมของ peptidyl การเมารถคือตาย[ 8 ] ในการขาดของฟังก์ชันการเมารถ PTH , การเป็นpeptidyl ทีอาร์เอ็นเอนำไปสู่ความอดอยากการเมารถ และการยับยั้งโปรตีนทฤษฎีออโตมาตา [ 9,10 ]แม้ว่ากิจกรรม PTH เป็นที่แพร่หลายในโดเมนทั้งหมดของชีวิตมากที่สุดแบคทีเรียมีเพียงหนึ่งที่มีการอนุรักษ์ pth1 เอนไซม์ เลือกสายพันธุ์ที่ได้รับเอนไซม์ pth2 ซึ่งไม่เกี่ยวข้องกัน[ 11 ] แต่การทำงานซ้ำซ้อนไม่ได้รับการจัดตั้งขึ้นระบบแบคทีเรียแตกต่างอย่างมากจากองค์ประกอบระบบ PTH ยูคาริโอติก เป็น pth1 ortholog ยูแคริโอตคือปัจจุบัน ,แต่มันไม่จําเป็น ส่วนอื่น ๆ ด้วยลักษณะยูแคริโอต pth2 / , , ยังไม่สรุป ของ pth1 พิศวง ,pth2 หรือทั้งสองอย่างพร้อมกันไม่ได้มีผลต่อความมีชีวิตในยีสต์[ 12 ] ดังนั้น กิจกรรม pth1 จำเป็นในแบคทีเรีย เป็นเพียงส่วนหนึ่งของเพิ่มเติมที่ซับซ้อนและการทำงานที่ซ้ำซ้อนในระบบ ยูแคริโอต . ในขณะที่เกิดความน่าดึงดูดใจของ pth1 เป็นเป้าหมายใหม่สำหรับยาปฏิชีวนะการพัฒนานี้ยังแสดงให้เห็นถึงการขาดความเข้าใจเกี่ยวกับระบบ PTH ยูคาริโอติกความเข้าใจที่ดีขึ้นของ PTH โดย eukaryoticระบบการรับประกันเพิ่มเติมตรวจสอบล่วงหน้า pth1 เป็นยาปฏิชีวนะกลุ่มเป้าหมาย . จากลำดับกรดอะมิโน ptrhd1 , จัดหรือ c2orf79 ถูกระบุว่าเป็นมนุษย์การเมารถ peptidyl ไฮโดรเลส .ในที่นี้ เรารายงานการโคลนยีนการแสดงออกในแบคทีเรียการเพิ่มประสิทธิภาพการละลาย บัฟเฟอร์ และเบสptrhd1 ผูกพันของมนุษย์ แสดงภายใต้การควบคุมของขี้น.โปรโมเตอร์ กว่า 60 มิลลิกรัม โปรตีนที่ถูกผลิตต่อลิตรสื่อน้อยที่สุด ptrhd1 บริสุทธิ์ให้มากกว่า 90 %หนึ่งในขั้นตอนเหล่านี้น่าจะเป็นวิธีตามที่กำหนดจากย้อมสีเอนไซม์ . เพื่อยืดอายุการใช้งานที่สามารถใช้งานได้ , กระเป๋าบัฟเฟอร์เงื่อนไขที่เหมาะสมในระยะยาวยังมุ่งมั่น